猪瘟病毒E2蛋白配体表位的筛选与鉴定

论文摘要

为进一步精确定位猪瘟病毒（CSFV）E2蛋白配体表位信息,利用DNASIS（Ver.2.5）软件分析设计合成7条多肽,主要覆盖E2蛋白,分别命名为SE21、SE22、SE231、SE232、SE241、SE242、SE03,同时设计合成1条无关多肽CP,均标记FITC。将PK-15细胞作为靶细胞,通过多肽与PK-15细胞结合试验、多肽抑制CSFV感染PK-15细胞试验和CSFV阻断多肽与PK-15细胞结合试验,筛选和鉴定E2蛋白配体表位。结果表明,多肽SE241、SE242与PK-15细胞结合的平均荧光强度分别为74.43±4.59和83.60±3.11,显著高于其他多肽,抑制CSFV感染PK-15细胞的感染抑制率也显著高于其他多肽,同时这2条多肽与PK-15细胞的结合被CSFV有效阻断。证实SE241、SE242多肽为CSFV与靶细胞PK-15细胞结合的配体表位,并能抑制CSFV感染PK-15细胞。本试验为CSFV新型多肽疫苗或免疫佐剂的研制提供依据。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 CSFV与细胞株
•   1.2 主要试剂
•   1.3 多肽的设计与合成
•   1.4 引物设计与合成
•   1.5 建立标准曲线[14]
•   1.6 多肽与PK-15细胞结合试验
•     1.6.1 流式细胞仪检测
•     1.6.2 荧光显微镜观察
•   1.7 多肽抑制CSFV感染试验
•     1.7.1 IPMA方法检测多肽抑制CSFV感染PK-15细胞
•     1.7.2 TaqMan实时荧光定量PCR方法检测多肽抑制CSFV感染PK-15细胞
•   1.8 CSFV阻断多肽与PK-15细胞试验
• 2 结果
•   2.1 结合试验
•     2.1.1 流式细胞仪检测结果
•     2.1.2 荧光显微镜观察结果
•   2.2 抑制感染结果
•     2.2.1 IPMA方法
•     2.2.2 标准曲线
•     2.2.3 TaqMan qPCR检测结果
•   2.3 阻断试验结果
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 银梅,李鹏,岳锋,张秋雨,胡东方,宁红梅,孔令芸,姜金庆,王选年

关键词: 猪瘟病毒,蛋白,配体表位

来源: 中国兽医学报 2019年06期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 河南科技学院动物科技学院,新乡学院生命科学技术学院,新乡县农牧局(新乡县林业局)

基金: 国家自然科学基金资助项目(31201877),河南省教育厅创新人才资助项目(14HASTIT026)

分类号: S852.651

DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2019.06.01

页码: 1045-1051

总页数: 7

文件大小: 3175K

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