交感神经对5-FU肠道干细胞损伤的保护作用及机制

论文摘要

目的:探讨交感神经对5-FU肠道干细胞损伤的保护作用及机制,研究拟交感神经胺类药物对5-FU处理后胃肠综合症的应用价值。方法:将8周龄雄性C57BL/6小鼠随机分为4组:正常对照组,5-氟尿嘧啶（5-FU）组,异丙肾上腺素（ISO）组和5-FU+ISO组。用免疫组织化学法观察分析各组空肠Olfm4+肠道干细胞、lysozyme+潘氏细胞及PCNA+增殖细胞数量变化;用TUNEL法检测不同组肠隐窝凋亡细胞的分布情况及数量变化。在5-FU/ISO作用后3.5天和7天取小鼠空肠,分离肠道干细胞,提取各组RNA和蛋白质,利用实时荧光定量PCR和免疫蛋白印迹技术,检测并分析细胞凋亡基因（Bcl-xl,Puma和Bax等）、PI3K/Akt信号通路（磷酸化Akt等）和NF-κB信号通路（磷酸化p65等）相关mRNA和蛋白的表达情况。结果:1.与正常组相比,5-FU组小鼠体重明显下降,并在3.5天时达到最低点（P<0.01）,到第7天基本恢复正常水平。2.与正常组相比,5-FU组肠黏膜出现充血和出血,炎性细胞浸润,绒毛缩短变小,上皮细胞坏死脱落,固有层裸露等病理损伤,在第3.5天时损伤最明显。与5-FU组相比,5-FU+ISO组肠黏膜损伤显示不同程度的恢复。3.与正常组相比,5-FU组明显减少肠道干细胞的数量（P<0.01）和酪氨酸羟化酶（TH）阳性蛋白染色的密度（P<0.05）,在经ISO处理后肠道干细胞恢复至正常水平（P<0.01）。与5-FU组相比,5-FU+ISO组TH阳性蛋白染色的密度明显升高（P<0.05）。4.与正常组相比,5-FU组可以明显减少潘氏细胞的数量,在第3.5天最为明显（P<0.01）,经ISO处理后显著促进潘氏细胞数量恢复,在处理后7天时恢复到正常水平（P<0.05）。5.与正常组相比,5-FU处理组能显著增加空肠隐窝中PCNA阳性细胞的数量（P<0.01）和凋亡细胞的数量（P<0.05）,经ISO处理后可使增殖细胞和凋亡细胞的数量明显降低（P<0.05）。6.与正常组相比,5-FU组肠道干细胞中的促凋亡基因PUMA和Bax的表达量明显升高（P<0.05）,经ISO处理后这两个基因mRNA的表达量显著下降（P<0.01）。与正常对照组相比,5-FU处理组PGES1的相对表达量显著增多（P<0.01）,经ISO处理后相对表达量明显减少（P<0.05）。ISO组与正常对照组相比,PGES2和PGES3的相对表达量明显升高（P<0.05）。与5-FU组相比,5-FU+ISO组PGES2的相对表达量明显降低（P<0.05）。7.通过免疫组化和Western Blotting两种方法检测肠隐窝中的p-p65蛋白表达量可知,与正常对照组相比,5-FU组p-p65蛋白表达量显著增高（P<0.01）,经ISO处理后该蛋白的表达量显著下降（P<0.01）。8.通过免疫组化和Western Blotting两种方法检测肠隐窝中的p-Akt蛋白表达量可知,与正常对照组相比,5-FU组p-Akt蛋白表达量显著增高（P<0.01）,经ISO处理后该蛋白的表达量显著下降（P<0.01）。结论:1.化疗药物5-FU可引起肠交感神经的损伤、肠道干细胞数量减少和肠黏膜损伤;2.交感神经调节肠道干细胞增殖分化和肠黏膜的更新与修复,拟交感神经胺类药异丙肾上腺素可保护化疗导致的肠道干细胞损伤及促进肠黏膜修复;3.5-FU对肠道干细胞的损伤作用和异丙肾上腺素的保护作用可能是通过调节NF-κB和PI3K-Akt信号通路,以达到影响肠道干细胞的凋亡和增殖来实现的。

论文目录

• 摘要
• abstract
• 第1章 前言
• 第2章 材料与方法
•   2.1 材料
•     2.1.1 实验动物
•     2.1.2 主要设备
•     2.1.3 主要试剂
•     2.1.4 主要药物及溶液的配制
•   2.2 实验方法
•     2.2.1 动物分组及模型的建立
•     2.2.2 标本的留取
•     2.2.3 检测指标及方法
•     2.2.4 统计学处理
• 第3章 结果
•   3.1 小鼠一般情况及体重变化
•   3.2 肠黏膜的组织病理变化
•   3.3 酪氨酸羟化酶免疫组化结果
•   3.4 肠道干细胞数量变化
•   3.5 潘氏细胞数量变化
•   3.6 PCNA阳性增殖细胞数量变化
•   3.7 凋亡细胞数量变化
•   3.8 凋亡相关基因及PGES家族相关基因m RNA表达
•   3.9 p-p65和p65蛋白表达量变化
•   3.10 p-Akt和Akt蛋白表达量变化
• 第4章 讨论
•   4.1 化疗引起肠黏膜损伤
•   4.2 化疗引起肠道干细胞损伤
•   4.3 化疗引起肠交感神经损伤
•   4.4 化疗通过损伤肠交感神经影响肠黏膜损伤的修复
•   4.5 交感神经对化疗后肠黏膜与肠道干细胞的保护作用
•   4.6 化疗及拟交感神经胺类药的作用机制
• 第5章 结论
• 致谢
• 参考文献
• 附图
• 攻读学位期间的研究成果
• 综述
•   参考文献

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 李环

导师: 曾慧红

关键词: 肠道干细胞,化疗,拟交感神经胺类药,交感神经,小肠,小鼠

来源: 南昌大学

年度: 2019

分类: 基础科学,医药卫生科技

专业: 生物学,基础医学

单位: 南昌大学

基金: 国家自然科学基金(项目编号:81460110,81660123和81860026)

分类号: R338

总页数: 63

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