冯晓云
（广东省揭阳市人民医院检验科522000）
【摘要】目的探讨ABO血型鉴定的影响因素，提高准确鉴定的能力。方法一共对400例血液标本分别采用玻片法和试管法进行血型鉴定,对比结果。结果玻片法和试管法存在一定结果不符，其准确率低于试管法。结论血型鉴定存在一定的影响因素，血型鉴定时，正反定型结果一致方可下结论。
【关键词】ABO血型血型鉴定正反定型ABO血型抗原抗体系统
【中图分类号】R457.1+1【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2014）02-0128-02
前言
血型鉴定(bloodtyping)是临床输血首要解决的问题，正确的血型鉴定是保证输血安全的前提条件。临床常用的血型鉴定方法有盐水凝集法和凝胶微柱法。盐水凝集法因简单易行在临床上广泛应用，其又分为玻片法和试管法，结果在实际操作中会受到诸多因素的影响。本文通过对400例血液标本的玻片法和试管法的血型鉴定结果进行统计分析，探讨ABO血型鉴定中的影响因素。
1资料和方法对象
在医院检验科,共收集3天,400例青年患者血液常规标本，每例血液标本同时用玻片法和试管法两种方法进行ABO血型鉴定。
ABO血型鉴定方法：
正定型法：①玻片法：取清洁的玻片1张，在玻片中间画一条竖线并注明A、B字样。将抗A试剂、抗B试剂各1滴分别滴于玻片上A、B处。分别取充分摇匀等体积待检血样于抗A试剂和抗B试剂。另取洁净玻片1张，标明A细胞、B细胞和0细胞，用滴管各加受检者血清1滴，再分别用滴管滴加A、B和0型试剂红细胞悬液1滴。用不同的竹签将分型试剂与待检血样调匀，同时不停的摇动玻片并观察血型凝集反应，最后在低倍镜观察凝集情况。②试管法：取医用洁净小试管2支，分别标上抗A、B字样，分别加入抗A、抗B标准血清各1滴，于相应标记的试管；然后分别加入被检者5％红细胞生理盐水悬液l滴于各试管充分混匀；以3400转／分的速度离心15秒判定结果。将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以肉眼观察有无凝集(或溶血)现象。如肉眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。
反定型法：首先将待检血离心(2500r／mm，3min)分离血清；取小试管3支，分别标记A、B、O，各管加被检者血清1滴，然后按标记分别加入5％的A、B、O型标准红细胞生理盐水1滴，混匀；以1000r／m离心l分钟后取出试管，先观察是否溶血,轻摇管底,使细胞悬浮起来,观察凝集情况。
结果判断：凝集判断标准红细胞均匀分布，无凝集颗粒，显微镜下红细胞分散存在，无凝集靠拢现象为阴性，红细胞出现凝集为阳性。
血型试剂：ABO血型反定型用红细胞试剂盒；抗A、抗B血型鉴定试剂(单克隆抗体)
统计学方法：全部数据采用SPSS11.5统计软件包处理，计量资料以x-±s表示。
2结果
方法A型B型0型AB型玻片法10712013637试管法10112813437
①从试验统计结果中可以看出不论是玻片法还是试管法，400例血液标本的血型分布是一致的，即O型最多，之后依次为B、A、AB，即O>B>A>AB。
②玻片法和试管法的鉴定结果显示AB型人数相同，而A型、B型和O型人数不完全一致，存在一定的差异。
3讨论
ABO血型系统和Rh血型系统是红细胞的两大血型抗原抗体系统，在临床输血和血液遗传学研究上有重要意义。血型由血型基因决定，是血细胞的主要特征之一。正确的血型鉴定(bloodtyping)是保证输血安全的前提条件。在鉴定过程中由于某些因素干扰，而出现鉴定的血型不一致，现总结有以下几点因素：
（1）工作人员疏忽
医生在填写输血申请时，单凭患者的自诉血型而造成血型错误；临床护士在抽取血标本时，未校对患者标签信息或者弄错血液标本；检验人员没有对报告核对正确，这些因素都可造成血型鉴定错误。
（2）被检红细胞
①血型测定的错误血型：检测时，因患者红细胞悬液浓度过低，又只用肉眼观察结果，使之在血型抗原较弱的情况下，微弱、细小的凝集未看到，而造成定型报告错误。
②标本新鲜，严防污染。细菌污染的标本，红细胞上T抗原被激活，与标准血清中的抗T抗体结合，出现全凝集现象，干扰血型鉴定。某些疾病如多发性骨髓瘤所致的高球蛋白血症在做ABO血型鉴定时出现假凝集，可加做自身血清和红细胞，自身红细胞和生理盐水对照试验及结合反定型结果进行鉴定。当疑有血浆成分干扰血型鉴定时，可用生理盐水反复洗涤红细胞以除去干扰。
③冷凝集素属于冷反应性的自身抗体，4℃条件下，正常人血清中的冷凝集素效价低于1：16，冷凝集素效价增高是导致献血者血型正反定型不符的常见厩。在较低温度条件下，冷凝集素能够与标准红细胞和自身红细胞产生凝集现象，凝集强度随着温度的升高而减弱。低效价的冷凝集素在37qC不能凝集标准RBC和自身RBC，因此不会造成血型误判，但高效价的冷凝集素在37℃仍可产生较强凝集，容易造成血型误判。如果献血者血清中含有高效价的冷凝集素，在血型鉴定试验中应使用37℃生理盐水洗涤红细胞或45％热放散。在肺炎、支原体肺炎、肝硬化等疾病患者血清中，冷凝集素很高，严重干扰血型鉴定。
④ABO亚型在血型血清学试验中是导致正反定型不符的主要原因之一。亚型属于同一血型抗原，是由基因所决定的抗原结构和位点数改变导致的弱表现型。
⑤ABO血型抗体减弱：ABO血型规则抗体合成量的不足也是造成正反定型不符的重要因素。当献血者血清中抗一A和抗一B效价减弱，其反定型格局总表现为AB型。在这种情况下，可以通过增加血清用量，降低反应温度，延长反应时间，应用低离子强度溶液等方法，检出低效价的抗一A和抗一B。
（3）实验器材，悬液浓度，离心机的控制
①所用器材必须清洁、干燥。试管、滴管，玻片要专用，标记清楚。用试管法定型时，应同时进行正向和反向定型。每批测定均须设置对照。
②红细胞悬液浓度过高或离心力过大，可造成假凝集，反应温度、反应时间、离心时间是血型鉴定的重要影响因素，要按操作规程严格控制。
（4）其它因素
①经输血或妊娠等免疫刺激产生，在献血者中常见的不规则抗体是抗一M、抗一N和抗一A等。在反定型试验中，不规则抗体可以和标准红细胞上相应的抗原发生凝集反应，而这种反定型结果与A或B抗原无关，所以导致ABO血型鉴定时正反定型结果不一致。
②类B抗原某些受肠道革兰氏阴性杆菌感染的病人，红细胞获得了类B抗原，A型病人可误定为AB型，O型误定为B型。因此，感染体征病人配血不合时，应考虑类B。
③磺胺类药物引起的凝集有人报道一个B型的献血员阑尾术后用氨苯磺胺，3个月后，其血清能凝集A、AB型的红细胞，也能凝集B型的红细胞。另外，注射青霉素后，有些人的血清中含有青霉素抗体，而青霉素已吸附在红细胞表面，当此红细胞与含有青霉素抗体的血清相遇时便发生凝集。
结论
在患者ABO血型鉴定试验中，如出现正反定型结果不符，不能发报告，否则可致血型的误判。因此，ABO血型准确鉴定极其重要,是一项须要具有高度责任心和技术性的工作。检验人员在具备认真的工作态度的基础上，还需要不断积累丰富的血型鉴定经验，对异常结果进行系统全面地分析，以获得ABO血型的准确定型,以保障临床输血安全。
参考文献
[1]吴敏慧,刘毅,刘洪莉,等.ABO血型正反定型不符确认试验结果分析［J］.临床输血与检验，2005，7(3):198-1991.
[2]中华人民共和国卫生部.中国输血技术操作规程［M］.天津:天津科学技术出版社,1997：82-841.