炭疽杆菌双重荧光定量PCR检测技术的建立和应用

论文摘要

为快速和准确检测炭疽杆菌,本研究以炭疽杆菌染色体上的BA5345基因和pXO1质粒上的PA基因为靶基因设计特异性引物和探针,建立了炭疽杆菌双重荧光定量PCR检测方法,对其反应的特异性、敏感性和重复性进行了分析,并与常规PCR方法一起对临床样品进行检测。结果显示,所建立方法特异性强,与蜡样芽胞杆菌群中其他芽胞杆菌无交叉反应;对BA5345基因和PA基因的最低检测限分别为8.0和7.8拷贝·μL-1,标准曲线相关系数大于0.99,组内和组间CV均小于1.5%。对35份污染皮毛样品检测显示BA5345基因和PA基因的检出率分别为80.0%和82.9%,与常规PCR检测方法相比,敏感性更高。本研究为炭疽杆菌的检测和流行病学调查提供了一种快速、准确的检测方法。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 细菌菌株及核酸样品
•   1.2 主要试剂和仪器
•   1.3 引物探针设计
•   1.4 炭疽杆菌常规PCR方法的建立
•   1.5 质粒标准品制备
•   1.6 双重荧光定量PCR反应条件优化
•   1.7 特异性试验
•   1.8 敏感性试验
•   1.9 重复性试验
•   1.10 模拟皮毛样品和临床样品检测
• 2 结 果
•   2.1 质粒标准品制备
•   2.2 双重荧光定量PCR最优反应条件
•   2.3 标准曲线的建立
•   2.4 特异性分析
•   2.5 敏感性分析
•   2.6 重复性分析
•   2.7 模拟和临床样品的检测
• 3 讨 论
• 4 结 论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 王素华,帅江冰,李舟,袁淑辉,吴绍强,吕继洲,赵治国

关键词: 炭疽杆菌,基因,双重荧光定量,检测方法

来源: 畜牧兽医学报 2019年08期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 温州海关综合技术服务中心,杭州海关技术中心,中国检验检疫科学研究院动物检疫所,呼和浩特海关技术中心

基金: 国家质检总局科技计划项目(2017IK098),浙江省重大科技专项重点农业项目(2015C02044)

分类号: S852.616

页码: 1658-1665

总页数: 8

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