微滴式数字聚合酶链式反应定量检测水产品中溶藻弧菌

论文摘要

目的建立水产品中溶藻弧菌微滴式数字聚合酶链式反应(ddPCR)快速定量检测方法。方法采用SN/T 1870—2016《出口食品中食源性致病菌检测方法实时荧光PCR法》中溶藻弧菌的引物探针,建立优化ddPCR反应体系,梯度稀释溶藻弧菌纯培养液,确定ddPCR方法的检出限(LOD)和定量限(LOQ);通过人工添加试验,比较ddPCR与实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)方法定量的准确性,以验证ddPCR方法用于检测水产品中溶藻弧菌的可行性。结果所建立的水产品中溶藻弧菌ddPCR检测方法经过溶藻弧菌标准菌株、分离菌株以及其他近源菌株验证,具有良好的特异性;纯培养的LOD和LOQ一致,均为2.2拷贝/反应,相当于110 CFU/ml纯菌液,定值结果与传统平板计数方法相差0.04个对数值。在人工污染模拟试验中ddPCR的定量结果较qPCR更接近理论添加值,检测重复性以及对低浓度样品的检出情况也均优于qPCR。ddPCR对人工污染样品的LOQ可达120拷贝/g。结论溶藻弧菌ddPCR定量检测方法特异性好、灵敏度高、结果准确,可为快速定量检测溶藻弧菌提供参考。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 菌株
•     1.1.2 主要仪器与试剂
•   1.2 方法
•     1.2.1 DNA提取及平板计数
•     1.2.2 超微量紫外分光光度计测定
•     1.2.3 引物探针及实时荧光PCR试验
•     1.2.4 ddPCR试验
•     1.2.5 ddPCR退火温度的优化
•     1.2.6 ddPCR特异性验证
•     1.2.7 实际样品添加
• 2 结果
•   2.1 ddPCR扩增体系的建立与优化
•   2.2 ddPCR特异性分析
•   2.3 ddPCR方法测定溶藻弧菌基因组DNA的最低检出限（LOD）和定量限（LOQ）
•   2.4 ddPCR与平板计数、超微量紫外分光光度计测定结果的比较
•   2.5 实际样品检测
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 李丹,马丹,李碧鹰,徐蕾蕊,魏咏新,魏海燕,汪琦,赵晓娟,刘莉,张西萌,付溥博,曾静

关键词: 微滴式数字聚合酶链式反应,溶藻弧菌,定量检测

来源: 中国食品卫生杂志 2019年04期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,工程科技Ⅰ辑

专业: 轻工业手工业,预防医学与卫生学

单位: 北京海关,中国食品发酵工业研究院有限公司

基金: “食品安全关键技术研发”重点专项(2017YFC1601602),原国家质检总局科技计划(2017IK176)

分类号: R155.5

DOI: 10.13590/j.cjfh.2019.04.009

页码: 345-350

总页数: 6

文件大小: 271K

下载量: 45