邓俊刚付翔(通讯作者)
（桂林医学院附属医院广西桂林541001）
【摘要】目的对白饭树中的总生物碱成分进行提取及研究其对肝损害小鼠的保护作用。方法采用水煎煮法进行提取，大孔吸附树脂进行分离，进行鉴定，以CCl4制造小鼠急性肝损害模型，给予白饭树总生物碱，测定血清GPT（谷丙转氨酶）和肝脏MDA（丙二醛）。结果通过大孔树脂分离可得到白饭树总生物碱，药理学显示白饭树总生物碱能肝损害小鼠肝脏。结论白饭树中的白饭树总生物碱能缓解CCl4所至肝损害。
【关键词】白饭树提取鉴定生物碱肝保护
【中图分类号】R927【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2014）10-0171-02
白饭树为大戟科白饭树属（Flueggea）植物，生于丘陵地的山坡，路旁和旷野灌木丛中。产于广西各地区。全株入药，味苦、微涩，性凉，有小毒，具清热解毒、消肿止痛、止痒止血等功效，外用可治疗湿疹、脓疱疮、过敏性皮炎、疮疖及烧烫伤[1,2]等。白饭树含有多种化合物，且有多种生理活性，被各国药学和化学工作者所关注[3-5]。本文对白饭树总生物碱进行提取分离，并作出了鉴定，并研究其对CCl4所致的小鼠肝损害的保护作用。
1.材料
1.1原料与试剂
白饭树（由桂林医药公司提供）；甲醇（汕头市西陇化工厂有限公司，批号：090505）；硅胶G（青岛海洋公司，批号:1984211）；羧甲基纤维素（青岛海洋公司，批号:0908011）；75%乙醇（北海国发海洋生物产业股份有限公司制药厂，批号：100507）；氢氧化钠（国药集团化学试剂有限公司，批号：T20050928）；36%Hcl（国药集团化学试剂有限公司，批号：T20050928）；氯仿（汕头市西陇化工厂有限公司，批号：080510）；正丁醇（汕头市西陇化工厂有限公司，批号：0903012）;鞣酸（浙江省温州市瓯海精细化工有限公司，批号：080612）；碘化钾（广东达濠精细化学品有限公司，批号：0030323）。GPT试剂盒（上海沪鼎生物科技有限公司）。
1.2仪器
旋转蒸发仪RE-52AA（上海亚荣生化仪器厂）；DZF-250真空干燥器（郑州长城科工贸有限公司）；B2500S-M7超声波清洗器（必能信超声有限公司产品）；HANGPINGFA2004电子天平（上海精科天平仪器厂）;SHZ-Ⅲ循环水真空泵（上海亚荣生化仪器厂）;YOKO-SY紫外线分析仪（武汉药科新技术开发公司）。
2.实验方法和结果
2.1白饭树总生物碱的提取分离及鉴定
取白饭树药材1kg，加水采煎煮进行提取两次，合并两次煎煮液，浓缩，将浓缩液一半经上样预处理活化过的D101型大孔吸附树脂柱，先用蒸馏水洗脱至洗脱液无色，收集洗脱液，再用75%乙醇进行洗脱至醇液无色，收集洗脱液。分别得到了上样收集液、水洗脱液、乙醇洗脱液，将上述液体分别浓缩后真空干燥。上样流出物和水洗脱物为粘稠状黄色物体。乙醇洗脱物为褐色固体，即白饭树总生物碱。
2.2生物碱的鉴定
2.2.1生物碱的沉淀反应（试管法）
取少量水洗脱液、乙醇洗脱液、上样收集液分别置于5支干净的试管中，分别加入以下已配制好的生物碱沉淀试剂中：碘化铋钾、改良的碘化铋钾、硅钨酸、碘-碘化钾、鞣酸，观察其现象与结果。结果如表所示：
表1试管法鉴定结果
试剂乙醇洗脱液水洗脱液上样收集液
碘化铋钾橘红色沉淀无反应无反应
改良碘化铋钾橘黄色沉淀无反应无反应
碘-碘化钾暗棕色沉淀无反应无反应
硅钨酸黄棕色沉淀无反应无反应
鞣酸棕黄色沉淀无反应无反应
由表1结果显示只有乙醇洗脱液样品跟生物碱沉淀试剂有颜色反应，可知白饭树生物碱主要在乙醇洗脱液中，而较少或没有生物碱成分在水洗脱液和上样收集液中，然而由于该方法本身灵敏度较差有一定局限性,需要用薄层层析法来进一步判断。
2.2.2生物碱的薄层色谱定性鉴别
取少量的上样收集液样品、水洗脱液样品、乙醇洗脱液样品。用毛细管从中取大约4ul溶液点在分别点于同一Cmc-Na为粘合剂的含2%NaOH的硅胶G薄层板硅胶G薄层板同一起跑线上。以氯仿：正丁醇：甲醇(3:5:2)为展开剂，于室温(25℃)上行法展开，展程约15cm，取出晾干，置紫外光灯(365nm)下检视（见图1），最后喷改良的碘化铋钾显色。结果如图2。
图1外光灯(365nm)下检视图
1、2为上样收集液样品；3、4为水洗脱液样品；5、6为乙醇洗脱液样品
图2喷改良碘化铋钾显色后检视图
1、2上样收集液样品；3、4为水洗脱液样品；5、6为乙醇洗脱液样品
由图1可见，将薄层板放入紫外灯（365nm）观察荧光只有乙醇洗脱液样品有荧光显示，而上样收集物及水洗脱物相应位置未发现有荧光斑点。然后用改良的碘化铋钾显色，可见只有乙醇洗脱浓缩液样品的最上方有黄褐色斑点，由以上的实验现象可以推断出白饭树中的生物碱主要在乙醇洗脱液中，为进一步研究白饭树生物碱的药理活性做好准备。
2.3小鼠CCl4致肝损害的保护研究
取小鼠50只，随机分成5组：空白对照组，阳性对照组，白饭树总生物碱高、中、低剂量组，以CCl4造模[6]，空白对照组、阳性对照组分别给予生理盐水灌胃，白饭树总生物碱高、中、低剂量组跟别给予1、0.5、0.1mg.kg-1白饭树总生物碱，48小时后摘眼球取血，测定血清GPT含量，取肝脏匀浆测定MDA含量。结果显示白饭树总生物碱能明显降低CCl4致小鼠的GPT值，对肝脂质过氧化物有明显抑制，结果如表2。
表2白饭树总生物碱对CCl4肝损害小鼠GPT和MDA的影响
组别剂量（mg/kg）GPTMDA
空白对照组生理盐水0.312±0.0540.124±0.074
CCl4阳性对照组生理盐水0.498±0.0250.215±0.046
白饭树高剂量组10.322±0.042*0.137±0.015*
白饭树中剂量组0.50.347±0.057*0.169±0.052*
白饭树低剂量组0.010.381±0.038*0.194±0.046
与阳性对照组比较，*P<0.01。
3.讨论
3.1本次实验采用打孔树脂对白饭树生物碱进行了分离，结果显示分离效果良好，去除了提取物中的大部分杂质，得到了固体状的总生物碱，为下一步进行药理实验做好准备，为白饭树在制剂中的利用提供了有效途径。本实验首次利用薄层色谱法鉴定了白饭树提取物，所用分离系统分离效果良好，在紫外灯下可见清晰的荧光斑点，对白饭树在制剂研发中的质量控制提供依据。
3.2通过给予白饭树总生物碱，CCl4所致肝损害小鼠的BPT、MDA明显低于阳性对照组，说明白饭树中的有效成分为白饭树总生物碱，本实验对该要用药用于临床有一定的指导意义。
参考文献
[1]中国植物志编辑委员会(AnEditorialCommitteeofFloraofChina).中国植物志[M].北京:科学出版社,1997,68-72.
[2]中华本草编委会(AnEditorialCommitteeofTraditionalChineseMedicine).中华本草[M].上海:上海科学技术出版社,1999,858-859.
[3]张庆荣，夏光成.有毒中草药彩色图鉴[M]，天津科技翻译出版公司，2006，03第二版：112.
[4]国家中医药管理局编.中华本草（民族药卷）[M]，世纪出版集团/上海科学技术出版社，2004，09第一版：256.
[5]陈梦青，侯林林.白饭树化学成分的研究[J]，JournalOfIntegrativePlantBiology.植物学报（英文版）1985，06：228.
[6]李仪奎等，中药药理学[M].上海科学技术出版社，1991:458-459.
广西卫生厅科研课题:Z2011168