香蕉几丁质酶基因ChiI2超表达载体和干涉表达载体的构建

论文摘要

分离克隆栽培香蕉中的几丁质酶基因ChiI2,构建超表达载体和干涉表达载体,可为进一步研究ChiI2基因响应抗逆胁迫的功能提供基础.从栽培香蕉天宝蕉（Musa spp., AAA）中克隆几丁质酶基因ChiI2,利用生物信息软件对该基因进行分析,并用无缝克隆技术分别构建ChiI2的超表达载体和干涉表达载体.从香蕉果皮中克隆到一个几丁质酶基因ChiI2,该基因全长942 bp,蛋白编码313个氨基酸,其编码的蛋白质理论分子量（Mr）为32.96,等电点（pI）为6.77.ChiI2蛋白的α-螺旋结构有6个,β-折叠结构有5个,转角结构有33个.蛋白质疏水性预测分析值为-0.233,属于亲水性蛋白.功能保守域分析表明,该蛋白是糖苷水解酶家族几丁质酶家族的一员.该基因核苷酸序列推导的氨基酸与野生香蕉、玉米、水稻、小麦、莲等植物的同源性都在70%以上.对ChiI2基因进行荧光定量PCR检测,发现4℃处理6 h的表达显著高于对照和38℃处理6 h,表明ChiI2基因可能与低温响应有关,诱导香蕉苗产生抗冷性.利用无缝克隆技术成功构建了pGreenII-ChiI2超表达载体和pGreenII-ChiI2i干涉表达载体,并转化到农杆菌EHA105菌株中.本研究成功地从栽培香蕉天宝蕉中分离克隆到了ChiI2基因,并对其基因特点和蛋白功能进行了预测分析,成功构建了超表达载体和干涉表达载体,可为进一步研究其功能奠定基础,也为采用基因工程方法改良选育香蕉抗寒品种提供了新尝试.（图8表1参24）

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•   1.2 方法
•     1.2.1 核酸提取
•     1.2.2 ChiI2基因克隆
•     1.2.3 基因表达分析
•     1.2.4 线性载体制备
•     1.2.5 超表达载体构建
•     1.2.6 干涉表达载体构建
• 2 结果与分析
•   2.1 ChiI2基因克隆
•   2.2 编码蛋白的理化性质、二级结构及功能保守域
•   2.3 ChiI2基因对温度的响应
•   2.4 表达载体构建
•     2.4.1 超表达载体构建
•     2.4.2 干涉表达载体构建
• 3 讨论与结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 黄玉吉,赖钟雄

关键词: 香蕉,几丁质酶,干涉表达载体,超表达载体,无缝克隆

来源: 应用与环境生物学报 2019年03期

年度: 2019

分类: 基础科学,工程科技Ⅰ辑,农业科技

专业: 生物学,园艺

单位: 福建农林大学园艺学院,福建农林大学园艺植物生物工程研究所

基金: 福建省教育厅中青年教师教育科研项目(JA15189),福建省自然科学基金面上项目(2016J01704),国家自然科学基金青年基金项目(31701900),福建农林大学博士后启动基金(61201400723),福建农林大学科技创新专项基金(CXZX02018082,CXZX2017189,CXZX2018076),国家现代农业产业技术体系专项资金(CARS-31-15),福建省高原学科建设经费(102,71201801101)资助~~

分类号: Q943.2;S668.1

DOI: 10.19675/j.cnki.1006-687x.2018.09019

页码: 672-678

总页数: 7

文件大小: 1870K

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