陈金锋姜蕾王坤郭怀宇蒋家龙
(六安市中医院安徽六安237006)
【摘要】目的：尝试确定芪归通络颗粒中黄芪甲苷含量的新方法。方法：采用高效液相-蒸发光散射检测器（HPLC-ELSD），实验用柱为阿波罗ApploC18,4.6×250mm,5um；流动相为乙腈∶水（35∶65）；流速为1.0ml/min；柱温为30℃；漂移管温度为98℃，载气流速为2.8L/min。结果：黄芪甲苷的线性范围为59.92μg/ml～299.60μg/ml(r=0.9996，n=5)，平均加样回收率为96.37%，RSD=0.81%。结论：本方法准确、精确、快速、重复性好，是控制芪归通络颗粒质量的较理想方法。
【关键词】芪归通络颗粒；HPLC-ELSD；黄芪甲苷
【中图分类号】R94【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2016）17-0318-02
“芪归通络颗粒”是六安市中医院专家经验方，临床疗效确切，属于我院医院制剂。全方共由黄芪、桃仁、当归等9味传统中药组成，具有活血散瘀，益气通络之功效。临床在用于治疗脑梗死恢复期、脑供血不足、颅脑损伤及脑血管病变康复期等疾病上效果较好[1-2]。本实验试采用HPLC法测定芪归通络颗粒制剂中黄芪甲苷的含量。
1.设备与试剂
1.1设备
AlltechELSD2000ES（美国Alltech公司），Alltech426HPLCPump（美国Alltech公司），KQ5200DA型超声波清洗器。
1.2试剂
芪归通络颗粒由六安市中医院制剂中心提供，批号分别为20110816、20110818、20110820；黄芪甲苷对照品（20111205）购于中国食品药品检定研究院；乙腈（上海国药集团化学试剂有限公司）为色谱纯，蒸馏水为实验室自制。
2.方法与结果
2.1色谱条件
色谱分析条件如下：色谱柱为ApploC18,5um（4.6×250mm）；流动相比例确定为水∶乙腈（65∶35）；柱温为30℃；流速为1.0ml/min；每次进样量均为20?l；漂移管温度设定为98℃，载气流速设定为2.8L/min。
2.2对照品溶液
取黄芪甲苷，用甲醇溶解稀释制成所含浓度为100μg/1ml和200μg/1ml的溶液。
2.3样品溶液
将芪归通络颗粒用研钵研细，精密称定其3.0g粗粉，放于容量为50ml的具塞锥形瓶中，加甲醇50ml，准确称其重量，超声仪超声（功率100W，频率40kHz）40min后，放冷，滤液放于水浴锅上蒸干，所留残渣用蒸馏水20ml微热使其溶解，后置于分液漏斗中，用提前制备好的水饱和正丁醇20ml振摇提取4次，正丁醇液合并，用现配的氨试液60ml分3次洗涤充分后，正丁醇液放于水浴锅上蒸干，后用甲醇定容至5ml容量瓶中[3-4]。
2.4阴性样品溶液
取遵生产工艺及处方比例制备提取的不含黄芪原药材的芪归通络颗粒，按“2.3”项下的方法进行操作。
2.5线性关系考察
精密称定黄芪甲苷7.49mg，将其置于25ml容量瓶中，用甲醇溶解并定容至相应刻度，混和均匀。用移液管精密吸取1.0、2.0、2.5、3.0、4.0ml，按“2.1”项下的方法进行测定，以y（峰面积的自然对数）对x（浓度的自然对数）作线性回归，获得回归方程如下，y＝1.7246x+5.9927，r＝0.9996。该结果表明，黄芪甲苷在59.92μg/ml～299.60μg/ml此浓度范围之间线性关系良好。
2.6精密度考察
精密称取黄芪甲苷对照品，加纯甲醇定容至5ml容量瓶中，超声溶解，得对照品溶液，按上述色谱分析方法进行测定，分别连续上样6次，记录所得峰面积，计算结果RSD为0.69%。由此表明，黄芪甲苷对照品用该方法测定精密度良好。
2.7稳定性试验
取芪归通络颗粒（批号：110628）适量，照供试品溶液的制备法处理，用ELSD检测器进行检测，结果RSD为1.15%。故本样品溶液在12h内所测样品溶液基本稳定。
2.8重复性试验
取芪归通络颗粒（批号：110628），按样品溶液制备项下的方法分别制备6份，照上述色谱分析条件进行测定，得到黄芪甲甙的平均含量为0.154mg/g，RSD=0.95%，此结果表明该方法用于芪归通络颗粒中黄芪甲苷的测定重现性良好。
2.9加样回收率试验
精密称取适量黄芪甲苷对照品，加入到已知含量批号为110628的6份芪归通络颗粒样品中，按“2.3”项下的方法处理，加入对照品溶液适量，用甲醇溶解稀释至相应刻度，取其续滤液注入色谱仪测定，计算黄芪甲甙的平均加样回收率。结果RSD<2%，表明用此方法测定芪归通络颗粒中黄芪甲苷回收率符合标准。见表。
表黄芪甲苷加样回收率试验结果
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2.10样品含测
将批号分别为20110816、20110818、20110820的三批样品按“2.3”项下方法制备样品溶液，每批分别进样三次，每次进样均为20μl，将其注入高效液相色谱仪，测得的黄芪甲甙含量分别为0.152、0.155、0.157mg/g。由此可见黄芪甲苷含量均高于0.1mg/g。
3.讨论
黄芪甲苷常通过薄层色谱法定性和高效液相色谱法定量。薄层色谱法受外界环境因素干扰性较大，而高效液相法中蒸发光检测法较紫外检测法灵敏度高，能检测出无紫外吸收的皂苷类成分[5-7]。同时，参照2005版、2010版药典一部，有关含黄芪成方制剂中检测黄芪甲甙的，均采用了HPLC-ELSD法，因此，本实验中我们采用蒸发光散射法来检测芪归通络颗粒中黄芪甲苷的含量。
实验室在前期通过HPLC-ELSD法建立的十位疏风通窍颗粒中黄芪甲苷的含测方法确实可行[8]，在此基础上通过对芪归通络颗粒可控性研究验证，表明该方法作为芪归通络颗粒中黄芪甲苷的含测方法也是可行的，进一步为完善芪归通络颗粒质量标准奠定了基础。
【参考文献】
[1]方无杰，朱莎.芪归通络颗粒治疗脑梗死急性期气虚血瘀型临床观察[J].中医药临床杂志，2014，5:020.
[2]俞娟，汪国凯.香茯颗粒质量控制研究[J].安徽中医药大学学报，2015，34（3）：85-87.
[3]王坤，张祖亮.十味疏风通窍颗粒的质量标准研究[J].海峡药学，2014，26(11)：89-91.