导读:本文包含了卵透明带论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:透明,疫苗,佐剂,基因,蛋白,免疫,小体。
卵透明带论文文献综述
东天,朱华,王巍,董颖,田照辉[1]（2018）在《小体鲟卵透明带家族ZP3亚型和ZPAX基因cDNAs克隆及其组织表达分析》一文中研究指出为研究透明带ZP家族在小体鲟Acipenser ruthenus性腺发育、卵子发生等过程中所发挥的作用,采用PCR技术克隆获得小体鲟卵透明带家族ZP3 3种亚型(ArZP3-1、ArZP3-4、ArZP3-5)及ZPAX基因(ArZPAX)cDNA部分序列。结果表明:ArZP3-1部分cDNA序列长度为1029 bp,对应编码342个氨基酸;ArZP3-4部分cDNA序列长度为1191 bp,对应编码397个氨基酸;ArZP3-5部分cDNA序列长度为717 bp,对应编码238个氨基酸;ArZPAX部分cDNA序列长度为733 bp,对应编码243个氨基酸;ArZP3蛋白3种亚型及ArZPAX蛋白氨基酸序列中均含有一个保守的ZP结构域;基于ZP氨基酸序列的系统发育树显示,小体鲟ArZP3蛋白3种亚型与高等鱼类ZP3亲缘关系较近,而ArZPAX蛋白则与哺乳类、鸟类、高等鱼类和爬行类ZPAX亲缘关系均较远;通过半定量RT-PCR进行组织表达特异性分析表明,ArZP3-1基因在小体鲟卵巢、精巢、肝、脑、肾、心、肌肉、鳃中表达,ArZP3-4基因仅在小体鲟卵巢和精巢中表达,而ArZPAX基因在小体鲟卵巢、精巢、肝、肠、肾、脾、心、鳃、脑中均有表达,3个基因在性腺中的表达量均最高,且均具有雌、雄差异性表达特点。(本文来源于《大连海洋大学学报》期刊2018年04期）
林君媛,王颖,李金玉,张富春[2]（2017）在《阿魏菇多糖佐剂增强犬卵透明带3(CZP3)DNA疫苗的免疫不育效果》一文中研究指出目的研究阿魏菇多糖(PFP)作为佐剂增强犬卵透明带3(CZP3)DNA疫苗(pc DNA3-CZP3)的免疫不育效果。方法将pc DNA3-CZP3单独或分别与铝佐剂、PFP联用,肌肉注射免疫小鼠3次,采用ELISA测定免疫小鼠抗血清特异性抗体滴度;流式细胞术检测树突状细胞(DC)的成熟和T淋巴细胞增殖;合笼计算窝仔数检测免疫不育效果。综合评价PFP和铝佐剂对CZP3 DNA疫苗免疫效果的影响。结果联用铝佐剂和PFP的pc DNA3-CZP3与单独免疫pc DNA3-CZP3的疫苗组相比,均能提高受免小鼠抗血清特异性抗体水平。PFP作为佐剂能够显着性的增强DC表面成熟标志物CD86+和MHCⅡ+的基因表达水平,促进T细胞增殖,并且显着降低小鼠的生育率和窝仔数。结论 PFP能够提高免疫小鼠的抗体水平,促进DC成熟和增强T淋巴细胞增殖,增强CZP3 DNA疫苗免疫小鼠的不育效果。(本文来源于《细胞与分子免疫学杂志》期刊2017年08期）
玄彪,金一[3]（2017）在《小鼠精子与卵透明带蛋白的识别机制》一文中研究指出受精是一个非常灵巧、独特的和有时也很"棘手"的过程,包括一些必不可少的步骤,最后形成受精卵。在受精过程中卵透明带具有重要作用,卵透明带内含有许多种糖蛋白并能识别精子进行与卵子识别再融合。精子受体是指这些能识别精子的卵透明带内的糖蛋白,在受精和早期胚胎发育过程中发挥各种功能。文章主要针对卵透明带内的精子受体与受精过程进行综述。(本文来源于《黑龙江畜牧兽医》期刊2017年07期）
王颖,张贝贝,张冀,罗娇娇,阿地拉·艾皮热[4]（2016）在《犬卵透明带3(CZP3)DNA疫苗免疫有效降低小鼠生育能力》一文中研究指出目的构建以犬卵透明带3(CZP3)为靶抗原的DNA避孕疫苗,并对其免疫效果及抗生育能力进行初步评价。方法提取犬卵巢总RNA,反转录PCR扩增CZP3基因,利用Prot Scale、TMHMM、Signal P、Inter Pro Scan、PREDICT PROTEIN、同源模建等生物信息学方法对CZP3基因进行分析,构建携带目标抗原CZP3的DNA疫苗pc DNA-CZP3,进行小鼠免疫实验,对DNA疫苗的免疫效果、抗生育水平进行综合评价。结果 CZP3基因序列共编码426个氨基酸,其在N端和C端各有1个疏水区,N端前22个氨基酸为信号肽,C端有1个由细胞外到细胞内的跨膜螺旋。CZP3有8个B细胞表位。DNA避孕疫苗pc DNA3-CZP3能够诱导小鼠产生较高的抗体水平,免疫组小鼠平均产仔数显着低于空白对照组和阴性对照组。结论成功构建能显着降低小鼠生育能力的犬避孕DNA疫苗pc DNA3-CZP3。(本文来源于《细胞与分子免疫学杂志》期刊2016年10期）
张贝贝,王颖,张冀,张富春[5]（2016）在《犬卵透明带3蛋白原核表达和抗血清的制备》一文中研究指出在研发控制流浪犬卵透明带3(CZP3)免疫不育疫苗的过程中,需要制备特异性的CZP3抗血清进行免疫检测。本研究克隆获得CZP3的c DNA(全长1 281 bp)和除去跨膜区和信号肽的核心片段(CZP3C,984 bp),通过构建原核表达载体p ET28a-CZP3C,转化大肠杆菌BL21(DE3)。在28℃下以0.6 mmol·L~(-1)异丙基硫代β-D-半乳糖苷诱导表达4 h,获得CZP3C融合蛋白。利用CZP3C融合蛋白免疫新西兰大白兔,制备特异性的抗血清,并对抗血清的特异性和效价进行评价。SDS-PAGE结果表明,融合蛋白以包涵体形式存在。经过镍柱亲和纯化及8 mmol·L~(-1)尿素复性后,获得了高纯度的CZP3C融合蛋白。用0.8μg·μL~(-1)的CZP3C融合蛋白免疫新西兰大白兔,免疫后的兔抗血清用Western blot及间接免疫荧光实验检测,结果证明CZP3C兔抗血清具有较高的特异性,ELISA检测效价为1∶409600。本研究所制备的抗血清能够为流浪犬免疫不育疫苗的研制提供检测材料。(本文来源于《四川动物》期刊2016年05期）
周智敏,韩崇选[6]（2016）在《草兔卵透明带蛋白2的克隆与原核表达》一文中研究指出哺乳动物卵透明带蛋白具有极强抗原性,产生的抗卵透明带蛋白抗体可以有效阻碍精卵结合。为了探究草兔卵透明带2(zona pellucida 2,ZP2)蛋白抗原性,以及定位抗原表位。根据GenBank上欧洲兔的卵透明带2基因序列,设计5′端磷酸化的反转录引物用于合成特异cDNA作为模板,通过普通PCR扩增草兔ZP2基因。测序获得的2 184bp序列比对成功后,预测其信号肽和跨膜区域分别位于ZP235-56和ZP2698-717。将克隆获得954bp的hZP2基因连入pET-28a(+)的EcoRⅠ和XhoⅠ酶切位点之间,成功构建了重组原核表达载体pET-28a-hZP2后转化大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)BL21。重组的E.coli BL21经诱导后表达41.17kD可溶性的hZP2融合蛋白,经优化诱导表达体系后,确定较好的诱导条件是37℃下0.7mmol·L-1 IPTG诱导15h。经Western blot鉴定,结果表明相对于表达ZP2大片段基因,hZP2融合蛋白表达量明显提高。(本文来源于《西北林学院学报》期刊2016年02期）
吴景龙,隋丹丹,张冬辉,周智敏,李昊[7]（2015）在《草兔卵透明带3(ZP3)基因真核表达载体的构建与表达》一文中研究指出【目的】利用基因重组技术将草兔卵透明带3基因(ZP3)构建到真核表达载体上,并在RK-13细胞中表达ZP3蛋白,为后期的免疫不育研究提供方便。【方法】提取草兔卵巢总RNA,采用RT-PCR方法克隆ZP3基因,将其与pEGFP-N1真核表达载体连接,构建pEGFP-N1-ZP3表达载体,并将载体转入RK-13细胞中进行ZP3表达。利用倒置荧光显微镜、RT-PCR和Western Bolt方法对重组ZP3蛋白表达情况进行观测。【结果】RT-PCR获得长为1 260bp的草兔ZP3基因;成功构建pEGFP-N1-ZP3重组质粒,将其转染RK-13细胞后表达出73ku的重组ZP3蛋白,RT-PCR验证和Western Bolt结果与ZP3基因的理论长度一致。【结论】首次构建了草兔ZP3基因真核表达载体并成功在真核细胞中表达重组ZP3蛋白。(本文来源于《西北农林科技大学学报(自然科学版)》期刊2015年11期）
王丹阳,杨雨,杨秀梅,张富春,吴道澄[8]（2015）在《PolyI:C协同IL-15作为小鼠卵透明带3基因疫苗佐剂黏膜免疫效果的观察》一文中研究指出目的:以Toll样受体拮抗物Poly I:C协同细胞因子IL-15作为免疫佐剂,通过滴鼻方式免疫ICR小鼠,对卵透明带3(murine zona pellucida,m ZP3)基因疫苗的免疫增强效果进行观察。方法:将Poly I:C和IL-15单独或协同与用壳聚糖(chitosan,Chi)包裹的m ZP3基因疫苗滴鼻免疫ICR小鼠,ELISA法检测小鼠血清中特异性抗m ZP3抗体和生殖道黏液、肺洗液中s Ig A的水平,MTT法检测淋巴细胞增殖,小鼠的平均窝仔数和生育率检测抗生育情况,组织学观察小鼠的卵巢病理切片。结果:Poly I:C协同IL-15共同免疫组能够显着提高免疫后小鼠抗m ZP3抗体的水平,促进淋巴细胞的增殖,平均窝仔数和生育率显着降低,小鼠的卵巢发育异常。结论:Poly I:C协同IL-15能够增强m ZP3基因疫苗的免疫效果,并在一定程度上降低小鼠生育率。(本文来源于《中国生物工程杂志》期刊2015年09期）
周智敏[9]（2015）在《表达草兔卵透明带2和3基因的分析》一文中研究指出草兔啃食破坏农作物及苗木,随着数量剧增,危害我国生态系统并损害人类的利益,因此被视为有害脊椎动物。合适的生殖相关抗原将有利于实现免疫不育控制草兔数量。哺乳动物的卵透明带蛋白具有极强抗原性,产生的抗体可以有效阻碍精卵结合。为了探究草兔卵透明带2蛋白抗原性,以及定位抗原表位。根据GenBank上欧洲兔的卵透明带2(ZP2)基因序列,设计5′端磷酸化的反转录引物用于合成特异cDNA作为模板,通过普通PCR扩增草兔ZP2 cDNA。测序获得的2184bp序列比对成功后,预测其信号肽和跨膜区域分别位于ZP235-56和ZP2698-717。去除信号肽与跨膜区域的1,716bp ZP2f基因连入pET-28a(+)的SacI和XhoI酶切位点之间,将克隆获得954bp的hZP2基因连入pET-28a(+)的EcoRI和XhoI酶切位点之间,成功构建了重组原核表达载体pET-28a-ZP2f和pET-28a-hZP2后分别转化E.coli BL21。经优化诱导表达体系后,最终确定最佳诱导重组大肠杆菌表达ZP2f的条件是:在加入1.2 mM IPTG的培养基中,28℃下培养8h;hZP2最适的诱导条件是37℃下0.7mM IPTG诱导15h。重组的E.coli BL21经诱导后表达68.46 kDa可溶性的ZP2f融合蛋白、41.17kDa可溶性的hZP2融合蛋白,经Western blot鉴定,结果表明相对于表达大片段ZP2f基因,hZP2融合蛋白表达量明显提高。将2,194bp的ZP2基因插入pEGFP-N1载体中获得pEGFP-N1-ZP2真核表达载体,转染RK13细胞后更换加有G418的培养基培养14天筛选抗性细胞。在倒置荧光显微镜下筛选稳定的抗性细胞,以获得能够稳定发荧光的重组RK13细胞。提取该重组RK13细胞基因组DNA,通过PCR与测序证实了发生自发重组使得ZP2基因连同GFP基因成功插入RK13细胞基因中;提取重组RK13细胞总RNA,通过RT-PCR与测序验证了ZP2成功转录;同时在SDS-PAGE胶上和Western blot膜上都有同ZP2蛋白相近大小条带。这些结果进一步证实ZP2基因位于重组SFV基因组中启动子后并且获得表达。由于大量表达外源蛋白会阻碍细胞生长,有些细胞会出现ZP2基因缺失,导致该重组细胞荧光较弱。本实验将草兔ZP3基因连入载体pSC11成功获得pSC11-ZP3穿梭载体;通过转染,将穿梭载体转入已感染肖普纤维瘤病毒(SFV)的兔肾脏细胞(RK13)中。在已感染RK 13细胞中,SFV病毒与穿梭载体间在共同拥有的胸苷激酶处发生同源重组,将ZP3基因连同穿梭载体上的标记基因lacZ重组到SFV病毒的基因组中。在加有X-gal培养基中,重组成功的SFV病毒因为能够表达lacZ基因,使得被感染的RK13细胞显蓝色,经过多次挑选蓝色细胞并反复冻融细胞使其裂解,最终获得足够纯净的重组SFV病毒。提取重组SFV病毒基因组DNA作为模板,通过PCR方法扩得同ZP3分子大小相近条带并测序后,结果显示基因序列同ZP3基因一致;通过RT-PCR也证实了重组SFV能够转录ZP3;在SDS-PAGE胶上和Western blot膜上都有同ZP3蛋白相近大小条带。最终通过噬菌斑方法测定重组SFV病毒效价为4.2×107 pfu/mL。这些结果进一步证实ZP3基因存在重组SFV基因组中,且能够大量表达。(本文来源于《西北农林科技大学》期刊2015-05-01）
张冬辉[10]（2015）在《中华鼢鼠卵透明带3真核表达系统的构建及其免疫不育的研究》一文中研究指出中华鼢鼠(Myospalax fontanierii)属仓鼠科、鼢鼠亚科动物,是我国北方旱作区鼠类的优势种,其数量多、分布广,对我国林业、牧业、农业等发展造成严重威胁和巨大的经济损失。目前的防治方法主要还是捕杀、物理隔离、药剂趋避、药剂毒杀等,虽然在控制鼢鼠种群数量和减少林木受害等起到一定作用,但其面临着工作量大,效果不明显,专一性差,种群恢复快、经济成本高和存在环境安全等多种问题。因此迫切需要一种能够满足安全经济、专一性强,持续久且简单易行的防治新方法,而免疫不育技术的出现为防治中华鼢鼠提供了新的思路。免疫不育是将具有一定免疫活性的物质直接或间接导入生物体内,形成有效抗原并产生免疫反应,破坏靶标生物自身生殖系统,从而达到降低其生育率的目的,在免疫不育的研究过程中,靶标抗原的选择一直是工作的重点,科研工作者在动物卵透明带有关方面已做了大量研究实验,并且已经证实了卵透明带3(ZP3)在免疫不育中发挥的关键性作用,因此获得中华鼢鼠卵透明带3(mZP3)基因并将其连接到真核表达载体上,制备成基因疫苗来进行防治成为研究的重点,本研究即通过构建重组载体并体外表达目的mZP3蛋白,并进行基因疫苗免疫小鼠的探索性试验来为免疫不育疫苗的研制奠定基础。本研究以中华鼢鼠mZP3为目的基因,以此构建EGFP-mZP3真核表达载体,经双酶切和测序正确后,体外转染CHO细胞,通过试验优化转染方案,通过荧光观察蛋白表达情况并在基因水平和蛋白质水平上分别进行RT-PCR和WB的检测,结果表明所构建的重组质粒成功在CHO细胞中得到表达,这为免疫不育疫苗的研制提供可能。为排除GFP蛋白对目的蛋白的免疫效价的影响,重新构建了重组载体pcDNA3.1-mZP3,为提高其表达的效率,在目的基因序列前面加入了Kozak序列,为方便后期的检测,在其序列末端添加了6个His标签,由于His属于小分子物质并不会对目的蛋白的生化性质和结构产生影响,因此不会影响其免疫效价。经测序无误后进行体外转染CHO细胞并进行RT-PCR和WB检测目的蛋白的表达情况,经检测目的蛋白成功在体外得到表达,为探究其作为不育DNA疫苗的可能性,大量制备重组质粒进行小鼠免疫试验,分别在免疫后14、28、42 d后采集小鼠血清进行Elisa检测抗体反应情况,同时在免疫后将小鼠合笼进行抗生育实验,结果分析表明,在小鼠体内成功检测到IgG抗体,小鼠的生育率也有所下降,这为以后DNA免疫不育疫苗的研制提供了可能和奠定了基础。(本文来源于《西北农林科技大学》期刊2015-05-01）
卵透明带论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的研究阿魏菇多糖(PFP)作为佐剂增强犬卵透明带3(CZP3)DNA疫苗(pc DNA3-CZP3)的免疫不育效果。方法将pc DNA3-CZP3单独或分别与铝佐剂、PFP联用,肌肉注射免疫小鼠3次,采用ELISA测定免疫小鼠抗血清特异性抗体滴度;流式细胞术检测树突状细胞(DC)的成熟和T淋巴细胞增殖;合笼计算窝仔数检测免疫不育效果。综合评价PFP和铝佐剂对CZP3 DNA疫苗免疫效果的影响。结果联用铝佐剂和PFP的pc DNA3-CZP3与单独免疫pc DNA3-CZP3的疫苗组相比,均能提高受免小鼠抗血清特异性抗体水平。PFP作为佐剂能够显着性的增强DC表面成熟标志物CD86+和MHCⅡ+的基因表达水平,促进T细胞增殖,并且显着降低小鼠的生育率和窝仔数。结论 PFP能够提高免疫小鼠的抗体水平,促进DC成熟和增强T淋巴细胞增殖,增强CZP3 DNA疫苗免疫小鼠的不育效果。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
卵透明带论文参考文献
[1].东天,朱华,王巍,董颖,田照辉.小体鲟卵透明带家族ZP3亚型和ZPAX基因cDNAs克隆及其组织表达分析[J].大连海洋大学学报.2018
[2].林君媛,王颖,李金玉,张富春.阿魏菇多糖佐剂增强犬卵透明带3(CZP3)DNA疫苗的免疫不育效果[J].细胞与分子免疫学杂志.2017
[3].玄彪,金一.小鼠精子与卵透明带蛋白的识别机制[J].黑龙江畜牧兽医.2017
[4].王颖,张贝贝,张冀,罗娇娇,阿地拉·艾皮热.犬卵透明带3(CZP3)DNA疫苗免疫有效降低小鼠生育能力[J].细胞与分子免疫学杂志.2016
[5].张贝贝,王颖,张冀,张富春.犬卵透明带3蛋白原核表达和抗血清的制备[J].四川动物.2016
[6].周智敏,韩崇选.草兔卵透明带蛋白2的克隆与原核表达[J].西北林学院学报.2016
[7].吴景龙,隋丹丹,张冬辉,周智敏,李昊.草兔卵透明带3(ZP3)基因真核表达载体的构建与表达[J].西北农林科技大学学报(自然科学版).2015
[8].王丹阳,杨雨,杨秀梅,张富春,吴道澄.PolyI:C协同IL-15作为小鼠卵透明带3基因疫苗佐剂黏膜免疫效果的观察[J].中国生物工程杂志.2015
[9].周智敏.表达草兔卵透明带2和3基因的分析[D].西北农林科技大学.2015
[10].张冬辉.中华鼢鼠卵透明带3真核表达系统的构建及其免疫不育的研究[D].西北农林科技大学.2015
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