导读:本文包含了体外进化论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:噬菌体,热稳定性,抗体,体外,突变,蛋白质,对硫磷。
体外进化论文文献综述
涂涛,蒋肖,黄火清,罗会颖,姚斌[1]（2019）在《基于体外分子进化技术提高Aspergillus niger来源葡萄糖氧化酶的热稳定性和催化效率研究》一文中研究指出葡萄糖氧化酶(Glucose oxidase, Gox, EC 1.1.3.4)是一种黄素蛋白,黄素腺嘌呤二核苷酸(flavin adenine dinucleotide, FAD)与酶分子非共价结合。在催化反应过程中,Gox利用FAD作为氧化还原反应的载体,以分子氧为电子受体,将β-D-葡萄糖催化氧化成葡萄糖酸内酯和过氧化氢。基于该催化反应的特点,Gox被广泛应用于化学、食品、临床诊断、生物制药等领域。本研究中,以Aspergillus niger来源的葡萄糖氧化酶GoxA为研究对象,利用根据Gox颜色反应原理建立的毕赤酵母高表达菌株高通量快速筛选方法,采用随机突变和理性设计的策略对其热稳定性和催化效率进行分子进化,获得了一株热稳定性和催化效率均显着提高的突变体M8。突变体M8的最适温度与野生型GoxA保持一致,为40℃;在70℃处理10 min后的剩余酶活由野生型的14%提高到90%;在80℃处理2 min后的剩余酶活由野生型的5%提高到78%;催化效率较野生型提高了1.7倍。改良后的突变体M8其综合性能要明显优越于目前报道的同类酶,完全满足于应用成产的需求。分子动力学模拟(Molecular dynamics simulation)分析结果表明,每个突变位点在热稳定性和催化效率提高上的分子机理各不相同。本研究一方面为Gox结构与功能关系探讨提供了有用信息,更为扩展Gox的实际应用提供了有用素材。(本文来源于《第十二届中国酶工程学术研讨会论文摘要集》期刊2019-08-08）
王建新[2]（2018）在《“体外进化”新药研发 插上“库”的翅膀》一文中研究指出诺贝尔化学奖频繁被生物学和生物技术的科学家获得。2017年诺贝尔化学奖颁给发明“冷冻电子显微镜”的科学家,这种显微镜可以让研究人员观察生物大分子在液体中的情况。今年化学奖则颁发给叁位被称为“进化科学家”(Evo-lutionary Scientists)(本文来源于《医药经济报》期刊2018-10-11）
李英南[3]（2018）在《体外分子进化提高甲基对硫磷水解酶的催化活力》一文中研究指出有机磷酸酯(OPs)由于其极强的的毒性而被用作神经毒剂和杀虫剂,并且由于其对乙酰胆碱酯酶的抑制从而引起严重的环境和人类健康问题。甲基对硫磷水解酶(Methyl parathion hydrolase,MPH)可实现在大肠杆菌的可溶性表达并且可以水解多种有机磷农药进而可用于修复被农药污染的土地。然而,MPH只在某些已知的有机磷农药中体现了降解活性,对有机磷酸酯神经毒剂的水解活性尚未报道,因此,应用生物技术手段开发具有良好的生物稳定性,广谱性,高效率的有机磷农药显得尤为重要。本研究通过随机突变和定点饱和突变的策略,经过两轮的筛选工作,通过搜索和设计远离活性口袋的关键位点,实现了对来源于假单胞菌Pseudomonas sp.WBC-3的甲基对硫磷水解酶的催化效率的提高。论文主要研究结果如下:(1)在第一轮筛选过程中,通过随机突变获得具有催化效率提高的一个四位点突变体D172H/D265V/S277I/K316R。其催化效率(k_(cat)/K_m)(337.7μM)为野生型(wild type,WT)(105.3μM)的3.2倍。为了探究四个突变位点中的关键突变,通过将突变体中的四个突变位点进行拆分并重新组合成不同的突变体。最终,关键位点S277被鉴定为可以显着提高底物结合亲和催化效率。(2)进一步将方向集中于277位点的饱和突变,发现在此位点的另外两个突变的K_m明显下降,分别为40.2和47.6μM。并且k_(cat)/K_m值分别是第一轮筛选到的四位点突变体的3.0和3.2倍,是WT的9.5和10.3倍。在MPH叁维结构中,发现S277残基位于loop结构与螺旋结构的铰链区域,其作用可以视为底物在进入结合袋时处充当盖子作用。这表明残基S277位点的突变可以通过底物入口区域的构象变化影响底物结合。(3)通过运用已知的MPH晶体结构信息以及生物信息学分析相结合的策略,更加针对性地选取热点氨基酸进行酶的改造,与野生型MPH相比较,突变体Q272E对底物的催化效率提高到野生型的5.5倍。此研究工作运用随机突变,位点饱和突变,结构和生物信息学分析相结合的策略,从较小的突变库(3800株)中获得具有高催化效率的突变体。(本文来源于《江南大学》期刊2018-06-01）
范红丽[4]（2018）在《发状念珠藻水分胁迫蛋白（WspA）体外分子定向进化及其功能分析》一文中研究指出发状念珠藻,俗称发菜,是一种陆生固氮蓝藻。发状念珠藻具有极强的耐旱能力,体内蕴藏着丰富的耐旱特异基因资源,是研究耐旱基因的理想材料。克隆和研究其耐旱相关基因,将为植物抗旱基因工程提供候选功能基因或理论借鉴。WspA蛋白最早分离于地木耳,具有一定的耐旱功能,并伴有β-半乳糖苷酶活性。研究表明在发状念珠藻胶质鞘中存在多种WspA同源蛋白,这可能是具鞘类念珠藻特有的一类蛋白。本研究以发状念珠藻基因组DNA为模板,利用PCR技术克隆得到两个发状念珠藻水分胁迫蛋白基因序列,并命名为WspA3和WspA4。通过生物信息学分析,发现该类蛋白属于亲水酸性蛋白,分布在细胞质中。将WspA3及WspA4基因与表达载体pET-32a连接构建重组表达载体并将其转化至大肠杆菌BL21中进行原核表达。以聚乙二醇6000(PEG6000)对其进行模拟干旱胁迫,发现其最高可耐60%PEG6000胁迫,表现出较强的耐旱能力。为提高发状念珠藻WspA3蛋白与WspA4蛋白在干旱条件下促进宿主细胞生长的能力,采用易错PCR的方法向WspA蛋白基因序列中引入碱基突变,转化大肠杆菌BL21中构建突变基因表达文库,以60%PEG6000模拟干旱胁迫下突变子的工程菌生长情况为指标进行微孔板筛选,最终获得耐早性能增强的6个蛋白,其中进化的WspA3蛋白2个,进化的WspA4蛋白4个,检测进化蛋白的β-半乳糖苷酶相对比活力,其酶相对比活力是野生型蛋白酶相对比活力的1.4-3.5倍。通过基因家族改组对6个进化蛋白改造,没有得到耐旱功能增强的突变蛋白序列,但其表型有明显的变化,说明此次家族改组对进化蛋白的改进起到一定的推动作用。将WspA3,WspA4及WspA3-sf1、WspA4-sf1基因转入高等模式植物烟草中超表达,研究WspA3-sf1、WspA4-sf1基因的潜在耐旱功能。成功获得转WspA3、WspA4及WspA3-sf1基因烟草,对转基因烟草进行5天10%PEG6000模拟干旱胁迫处理。转基因烟草中的抗氧化酶类活性较对照增高,丙二醛含量较对照下降,表明该基因参与了干旱胁迫下烟草抗氧化酶系的调控及膜稳定性调节物质的积累。转WspA3-sf1基因烟草生理指标变化更加突出,表明该基因具有更强的耐旱能力。(本文来源于《宁夏大学》期刊2018-04-24）
陈磊,陈晟,吴敬,吴丹[5]（2018）在《基于体外分子进化技术提高弯曲芽孢杆菌CCTCC 2015368 β-淀粉酶的热稳定性》一文中研究指出运用体外分子进化技术易错PCR方法,高通量筛选热稳定性提高的弯曲芽孢杆菌Bacillus flexus CCTCC2015368β-淀粉酶突变体。利用LB琼脂淀粉板显色、96-孔板DNS法测酶活和酶标仪检测等,最终筛选到了一株热稳定性显着提高的突变体D476N。野生型和突变体D476N分别纯化后,酶学性质测定表明:突变体D476N的最适pH为6.5,与野生型相比降低了0.5。突变体D476N和野生型的最适温度均为55℃,突变体D476N在55℃下的半衰期为35 min,比野生型提高了95%。突变体D476N的T_(50)值比野生型提高4℃。突变体D476N的K_m值为97.98μmol/L,是野生型(85.86μmol/L)1.14倍;突变体稳定性提高的同时,催化活力相对于野生型有略微下降。通过SWISS-MODEL同源模拟野生型和突变体D476N的叁维结构,并通过PyMol软件分析,发现突变后的氨基酸残基Asn476位于蛋白质表面的loop环上,通过MOE软件计算,D476N的分子自由能(ΔG)为106.01kcal/mol,比野生酶降低10.3%,这一结果与蛋白质分子自由能和热稳定性呈负相关的理论相符。(本文来源于《生物工程学报》期刊2018年02期）
林森珠,陈格飞,孟清[6]（2016）在《DNA展示系统介导的断裂蛋白质内含子体外定向进化方法的研究》一文中研究指出蛋白质内含子对于外显子的选择性限制了它的应用范围。目前,已经建立的卡那霉素定向进化系统适用于微小蛋白质内含子,但不适用于断裂蛋白质内含子。为了研究适用于断裂蛋白质内含子的定向进化的方法,我们引入了DNA展示系统。在该系统中,生物素化基因在人工细胞中与其表达的融合蛋白(内含子C端-外显子-生物素结合蛋白)形成DNA-蛋白质连接体。只有能与后续加入的N端蛋白质内含子前体(Flag-内含子N端)发生剪接反应的DNA-蛋白质连接体,才能被加上旗帜标签(Flag),从而被抗旗帜标签抗体纯化柱(Anti Flag antibody M2 agarose)筛选富集。为了验证该系统的可行性,实验构建了2个基因,即含有具剪接活性的蛋白质内含子的阳性基因IRC和含有不具剪接活性的蛋白质内含子的阴性基因IRCM。实验首先通过Western印迹和琼脂糖凝胶电泳证明,人工细胞中的体外转录翻译系统不仅可高表达500个氨基酸的蛋白质,而且表达的蛋白中内含子仍保持原有的剪接能力。生物素结合蛋白能结合95%的DNA,并且形成的DNA-蛋白质连接体可以被筛选富集,最终证明了该系统用于断裂蛋白质内含子定向进化筛选的可行性。随后,为了检测系统的富集效率,制备了人为的基因"突变库",即将基因IRC和IRCM以摩尔比1:10的比例混合,经过2轮筛选后,阳性基因IRC可以被10倍富集,进一步证明了体外筛选方法的可行性。该方法为后续针对不同宿主进化出不同的断裂蛋白质内含子提供筛选方法支持,也为断裂蛋白质内含子的在生物技术和研究领域的应用奠定了基础。(本文来源于《中国生物化学与分子生物学报》期刊2016年10期）
张向楠[7]（2016）在《亚磷酸脱氢酶的体外定向进化及其固定化研究》一文中研究指出亚磷酸脱氢酶(EC 1201.1),将底物亚磷酸盐氧化为磷酸盐,同时将催化反应所必须的氧化型烟酰胺辅酶(NAD+)还原为还原型烟酰胺辅酶(NADH).该酶能够代谢利用低价态亚磷酸盐,同时产物伴随有还原型烟酰胺辅酶的生成,这两大特点使得亚磷酸脱氢酶在转基因生物技术研究领域和工业生物催化的辅酶再生领域都有着巨大的应用潜能和广阔的发展空间。本研究以罗尔斯通菌属(Ralstonia so.strain 4506)中的亚磷酸脱氢酶基因为基础,通过人工密码优化合成,在大肠杆菌中克隆表达。亚磷酸脱氢酶基因(prxD)全长1011bp,共编码336个氨基酸,预测蛋白分子量大小为36.7kDa。酶学性质分析表明最适温度为45℃,最适pH为7.0。在40"C和45℃下处理100min,仍保持催化活性,但在50℃处理20min活性几乎完全丧失。在pH4.5-9.5范围内活性相对稳定,均保持在80%以上。该酶对亚磷酸盐的Km和kcat值分别为9.35±0.37mM和157.48±1.99 min-1,催化效率(kcat/Km)为16.85 mM-1·min-1;对NAD+的Km和kcat值分别为0.53±0.02mM和190.24±2.09 min-1,催化效率(kcat/Km)为353.02 mM-1·min-1。为提高亚磷酸脱氢酶的催化活性,通过定向进化技术在约10000个突变株中筛选得到一株催化活性有所提高的突变株PTDH-M20,该突变株与野生型氨基酸序列相比,第139位的酪氨酸被色氨酸替代,最适温度和pH均与野生型保持一致,突变株PTDH-M20对亚磷酸盐的Km和kcat值分别为6.52-_+0.34mM和459.1±6.29 min-1,催化效率(kcat/Km)为70.46mM.min-1;对NAD+的Km和kcat值分别为0.97±0.04mM和501.23±7.97mmin-1,对NAD+催化效率分别为(kcaat/Km)为514.71mM-1·min-1。突变株对亚磷酸盐的亲和力比野生型提高30%,催化效率比野生型提高近3倍,对NAD+的亲和力下降了83%,但催化效率仍然提升了45.8%。为进一步研究139位点对于该酶催化活性的影响和作用,引入其他18种氨基酸进行定点饱和突变研究。只有当该位点突变为苯丙氨酸、谷氨酰胺、亮氨酸、蛋氨酸和精氨酸时突变株才具有催化活性,突变为其它13种氨基酸后突变体均失活。在上述5株突变体中,PTDH-Y139F和PTDH-Y139Q的活性变化最为明显,对亚磷酸盐PTDH-Y139F和PTDH-Y139Q的催化效率分别是野生型的5.19倍和5.83倍。对NAD+而言,PTDH-Y139F和PTDH-Y139Q的催化效率分别是野生型的2.74倍和2.89倍。该结果为该酶的结构功能研究提供重要信息,也为该酶在工业和转基因研究领域的应用奠定了基础。以Fe304磁性纳米颗粒作为载体结合交联聚集体(CLEAs)的固定化方法对亚磷酸脱氢酶进行固定化研究。固定化酶Fe3O4-PTDH的最适温度为50℃,比游离态PTDH提高5℃,最适pH为6.5。在50℃下处理100min后仍然保留约50%的催化活性,55℃和60℃下处理100min后保留约25%的催化活性,热稳定比游离态PTDH有了显着的改善。将固定化酶Fe3O4-PTDH循环回收利用10次后,保留有57%的催化活性,表现出较优良的循环利用性。该酶的固定化研究为降低生产成本了奠定基础。(本文来源于《华中农业大学》期刊2016-06-01）
王师[8]（2016）在《基于AID酶与哺乳动物细胞展示技术的抗PD-1抗体体外进化研究》一文中研究指出研究背景:抗体作为一种特异性强、安全性高、效果显着的药物,在肿瘤等多种疾病的临床治疗中发挥重要作用。在多种抗体制备技术中,抗体库技术是最常用的技术之一。活化诱导胞嘧啶核苷脱氨酶(activation-induced cytidine deaminase AID)参与B细胞受体亲和力成熟,促进并诱导免疫球蛋白可变区的突变,在抗体体内成熟过程中发挥重要作用。文献报道,在抗体库中引入AID酶,有助于提高抗体库库容。因此,AID酶与抗体库技术相结合的抗体筛选技术成为当前抗体筛选的一个研究热点。免疫负调控的共刺激信号通路PD-1/PD-L1在肿瘤的免疫逃逸中发挥着重要的作用,PD-1、PD-L1并成为肿瘤免疫治疗的新靶点。抗PD-1/PD-L1的抗体药物也成为了新的研究热点。目的:在课题组前期搭建的“哺乳动物细胞展示抗体库技术”基础上,本研究以PD-1为靶点,将抗体库技术与AID酶诱导抗体基因体外进化成熟相结合,借助流式细胞分选技术,探讨了一种高通量的抗体筛选新方法。方法:通过IMGT获得抗PD-1抗体Nivolumab的可变区氨基酸序列,合理考察密码子偏性的前提下进行反向翻译获得可变区基因序列;通过全合成制备Nivolumab的轻重链基因,并克隆入pFRT-IgG1载体中进行表达,全抗体命名为MIL75。将MIL75抗体Fab片段克隆至pFRT-FTMK载体上,该载体在抗体Fab片段的重链C末端偶联了PDGFR-α跨膜区,使抗体Fab片段能够展示在细胞膜上。通过真核细胞转染技术将载体转染到CHO-K1-FRT细胞中并筛选稳定表达细胞株,进一步将含有AID酶基因的载体转染至稳定表达细胞中。利用FITC标记的PD-1抗原(PD-1-FITC),通过流式分选的方法筛选高亲和力的抗体。将富集到的细胞提取基因组,调取抗体基因经测序并克隆到全长抗体表达载体pFRT-IgG1上进行表达。随后对筛选得到的抗体进行了初步功能评价:(1)利用ELISA和Biacore的方法评价了抗体与抗原结合的特异性和亲和力;(2)针对筛选获得的高亲和力抗体,借助混合淋巴细胞反应实验,通过检测T细胞分泌IFN-γ的水平来评价抗体激活T细胞的功能;(3)在免疫缺陷NPG小鼠中输注人PMBC,构建GVHD模型,进一步给予抗PD-1抗体,通过免疫排斥反应的强弱评价抗体体内生物学活性。结果:(1)将全合成的抗体可变区基因分别克隆入载体pFRT-IgG1以及pFRTFTMK中,成功构建MIL75全长抗体表达载体pFRT-IgG1K-MIL75以及Fab抗体细胞膜展示载体pFRT-FTMK-MIL75Fab。pFRT-IgG1K-MIL75稳定转染CHO-K1-FRT细胞后,经过加压筛选,获得了MIL75全长抗体稳定表达细胞株。ELISA结果表明,表达的MIL75抗体可以特异性、高亲和力识别PD-1抗原。pFRT-FTMK-MIL75Fab稳定转染稳定转染CHO-K1-FRT细胞后,经过加压筛选,获得稳定表达MIL75-Fab的细胞株。流式细胞术检测结果显示,MIL75-Fab成功展示在CHO-K1-FRT细胞表面,且能与抗原PD-1的特异性结合并具有浓度依赖性;进一步转染入AID酶诱导突变。(2)经流式筛选及计算机序列比对分析后获得叁条新的抗体序列,分别为Fv56、Fv60、Fv70。(3)体外结合实验表明Fv56、Fv60、Fv70叁株抗体均能够与靶抗原PD-1特异性结合;其中,Fv56、Fv60识别的表位与MIL75相同;Fv70识别的表位发生了漂移。抗体Fv56、Fv60在体外能够特异性阻断PD-1与PD-L1相互作用。进一步的生物学功能实验表明:Fv56、Fv60与母本抗体MIL75具有相似的生物学活性,均能够激活T细胞,上调T细胞分泌IFN-γ,并具有一定的抗体浓度依赖性;而Fv70只在高浓度下对T细胞具有激活功能。(4)体内生物学功能实验结果显示抗体Fv56能够激活人源化小鼠体内的T细胞,加剧免疫排斥反应,缩短了小鼠的生存时间。结论:本研究将哺乳动物细胞展示技术与AID酶诱导抗体亲和力成熟相结合,建立了一种能够快速有效进行体外抗体进化的筛选技术。并以PD-1为靶点,通过这种方法筛选得到了叁株新的抗体Fv56、Fv60和Fv70;其中Fv56、Fv60两株抗体具有良好的T细胞激活功能,其生物学活性与母本抗体MIL75相似。(本文来源于《河南大学》期刊2016-06-01）
林子玉,丁莹莹,周鹏,高彩霞,冯娇娇[9]（2015）在《SPA单结构域突变体组合噬菌体文库的构建及体外进化筛选》一文中研究指出目的使用人免疫球蛋白G(IgG)对金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)单结构域突变体组合文库进行体外分子进化筛选,判断不同突变体组合的特异结合优势,探索优势组合分子结构与功能间的关系。方法通过Overlap PCR获得SPA中A和C单结构域突变体片段组合构成的噬菌体文库,再使用人IgG对文库进行体外亲和筛选,期望通过对特定结合分子的定向改造及体外进化获得具有高结合优势的组合分子。结果成功构建符合体外筛选要求的SPA单结构域A在29、30位氨基酸定点突变文库(A1)、SPA单结构域C在36、37位定点突变文库(C1)和SPA单结构域A在37位后插入3个氨基酸随机肽(AI37)、SPA单结构域C在20位后插入3个随机连接肽(CI20),将A1、C1随机组合构建的噬菌体展示文库命名为库A1C1,将AI37、CI20随机组合构建的噬菌体展示文库命名为库AI37CI20。两个文库各自经过4、5轮亲和筛选,文库进化完全。Phage-ELISA高光密度值的单克隆,测序结果分析为A(Q29K30)A(I29I30)和AI-TQSA。结论通过定向改造技术获得了高结合能力的定点突变分子A(Q29K30)A(I29I30)和插入突变分子AI37-TQSA,为Ig结合分子的定向改造及具有新的Ig结合特性的重组Ig结合分子的进一步研究奠定了基础。(本文来源于《安徽医科大学学报》期刊2015年09期）
刘震,陈倩,陈荫楠,王祖鑫,朱秋享[10]（2015）在《枯草芽孢杆菌β-糖苷酶的克隆表达、体外定向进化及结构模拟》一文中研究指出【目的】从枯草芽孢杆菌基因组DNA中扩增出bgl C基因并在大肠杆菌中表达,分析表达产物的酶学性质并进行结构模拟,为进一步研究其生理功能及结构解析奠定基础。【方法】将bgl C基因克隆到大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中表达,通过定向进化获取水解效率提高的突变株,经Ni-NTA镍离子层析柱纯化后,测定野生枯草芽孢杆菌β-糖苷酶与突变酶的性质。利用CD光谱,非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及叁维结构建模,分析野生酶与突变酶的高级结构。【结果】野生酶的比活力为9.7 U/mg,最适催化温度为60℃,最适p H值是7.0。经过突变和筛选,我们得到一个突变体BS-GLY_M1(A242T/T385A/S425L),其比活力达到17.1 U/mg,最适温度为55℃,最适p H值是7.0,在55℃下的半衰期为3.5 h,比野生酶增加2 h。突变酶对4-硝基苯基-β-半乳糖苷、乳糖和熊果苷的催化效率(Km/Kcat)有所提高。酶在天然条件下以二聚体、四聚体状态存在,推测它以二聚体为基本功能单位。结构模拟结果表明突变后酶的叁维结构有轻微地变化,这可能是酶热稳定性和催化效率提高的原因。【结论】枯草芽孢杆菌β-糖苷酶可以在大肠杆菌中高效表达并可以通过定向进化提高其水解效率。(本文来源于《微生物学报》期刊2015年10期）
体外进化论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
诺贝尔化学奖频繁被生物学和生物技术的科学家获得。2017年诺贝尔化学奖颁给发明“冷冻电子显微镜”的科学家,这种显微镜可以让研究人员观察生物大分子在液体中的情况。今年化学奖则颁发给叁位被称为“进化科学家”(Evo-lutionary Scientists)
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
体外进化论文参考文献
[1].涂涛,蒋肖,黄火清,罗会颖,姚斌.基于体外分子进化技术提高Aspergillusniger来源葡萄糖氧化酶的热稳定性和催化效率研究[C].第十二届中国酶工程学术研讨会论文摘要集.2019
[2].王建新.“体外进化”新药研发插上“库”的翅膀[N].医药经济报.2018
[3].李英南.体外分子进化提高甲基对硫磷水解酶的催化活力[D].江南大学.2018
[4].范红丽.发状念珠藻水分胁迫蛋白（WspA）体外分子定向进化及其功能分析[D].宁夏大学.2018
[5].陈磊,陈晟,吴敬,吴丹.基于体外分子进化技术提高弯曲芽孢杆菌CCTCC2015368β-淀粉酶的热稳定性[J].生物工程学报.2018
[6].林森珠,陈格飞,孟清.DNA展示系统介导的断裂蛋白质内含子体外定向进化方法的研究[J].中国生物化学与分子生物学报.2016
[7].张向楠.亚磷酸脱氢酶的体外定向进化及其固定化研究[D].华中农业大学.2016
[8].王师.基于AID酶与哺乳动物细胞展示技术的抗PD-1抗体体外进化研究[D].河南大学.2016
[9].林子玉,丁莹莹,周鹏,高彩霞,冯娇娇.SPA单结构域突变体组合噬菌体文库的构建及体外进化筛选[J].安徽医科大学学报.2015
[10].刘震,陈倩,陈荫楠,王祖鑫,朱秋享.枯草芽孢杆菌β-糖苷酶的克隆表达、体外定向进化及结构模拟[J].微生物学报.2015
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