菊粉外切酶的异源表达、纯化及酶学性质

论文摘要

将菊粉降解菌Paenibacillus sp. Lfos16的菊粉外切酶基因克隆至表达载体p ET-28a （+）,转入Escherichia. coli BL21（DE3）中实现了异源表达。利用镍柱亲和层析纯化重组菊粉外切酶,并进行SDS-PAGE检测。重组菊粉外切酶的表观分子质量为87 k Da,经纯化后,重组菊粉外切酶的比酶活为348.30 U/mg。重组菊粉外切酶作用菊粉和蔗糖的酶活分别为259.37 U/m L和592.16 U/m L,I/S值为0.438,且重组酶水解菊粉的主要产物为果糖。重组菊粉外切酶最适作用温度为40℃,且当温度低于30℃时酶活较稳定;最适作用pH为6。Ag+、Cu2+、Mn2+、Zn2+、Hg2+、Fe3+具有显著抑制作用。重组菊粉外切酶对菊粉的Km为19. 28 mg/m L,Vmax为0.18 mg/（min·m L）。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•     1.1.1 菌株与质粒
•     1.1.2 试剂
•     1.1.3 培养基
•   1.2 方法
•     1.2.1 菊粉外切酶基因的克隆及重组菌构建
•     1.2.2 重组菌的诱导表达及纯化
•     1.2.3 重组菊粉外切酶转化菊粉产物分析
•     1.2.4 酶活测定方法及定义
•     1.2.5 酶学性质测定
• 2 结果与分析
•   2.1 菊粉外切酶基因的扩增
•   2.2 p ET28a-Exo-inu表达载体和工程菌的构建
•   2.3 重组菊粉外切酶的诱导表达和分离纯化
•   2.4 重组菊粉外切酶转化菊粉产物分析
•   2.5 重组菊粉外切酶酶活测定
•   2.6 重组菊粉外切酶酶学性质测定
•     2.6.1 重组菊粉外切酶的最适温度与温度稳定性
•     2.6.2 重组菊粉外切酶的最适pH与p H稳定性
•   2.7 金属离子对菊粉外切酶活性的影响
•   2.8 重外菊粉外切酶动力学常数测定
• 3 结论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 马俊,安启坤,唐文竹

关键词: 类芽孢杆菌,菊粉外切酶,克隆,酶学性质

来源: 食品与发酵工业 2019年04期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑

专业: 轻工业手工业

单位: 大连工业大学生物工程学院

基金: 辽宁省高等学校基本科研项目(No.2017J030)

分类号: TS201.25

DOI: 10.13995/j.cnki.11-1802/ts.018537

页码: 25-30

总页数: 6

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