导读:本文包含了重组卡介苗论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:卡介苗,免疫,基因,病毒,结核,白介素,菌株。
重组卡介苗论文文献综述
李婷[1]（2019）在《两株不含c-di-GMP代谢相关基因的重组卡介苗菌株引起的免疫应答对不同毒力的结核菌株的抵抗作用》一文中研究指出菌膜是一种生物膜,作为一种类似于结核分枝杆菌感染过程中出现的某些特征的结构,如抗生素耐药性和感染的长期性,以及作为感染豚鼠的体液反应抗原的来源,在结核病领域重新引起了人们的兴趣。有充分的证据表明,在其他细菌中,第二信使c-di-GMP调节从浮游细胞到生物膜形成的转变。在这项工作中,作者使用牛分枝杆菌活疫苗BCG来确定与c-di-GMP代谢相关的基因缺失是否会影响与巨噬细胞的相互作用,在小鼠细胞系和小鼠中诱导免疫应答的能力,以及在表面膜的(本文来源于《微生物学免疫学进展》期刊2019年03期）
裴杰[2]（2019）在《IL-2与EB病毒LMP1融合基因重组卡介苗的构建与鉴定》一文中研究指出目的本研究将LMP1与人IL-2基因融合后构建重组质粒,并将构建的重组质粒载体通过电转导入感受态卡介苗(BCG),获得能够稳定表达融合蛋白的重组BCG(rBCG),通过对构建的EB病毒阳性鼻咽癌动物模型肿瘤生长的抑制情况检测rBCG的免疫效果,为研发既能抗结核病又能对EB病毒阳性肿瘤产生免疫的双价疫苗奠定了基础。方法从EB病毒阳性的B95-8细胞中提取总RNA,通过RT-PCR获得cDNA,以此为模板扩增获得LMP1,以IL-2 pMalLP质粒为模板扩增获得IL-2,利用重迭PCR(overlap-PCR)将两段基因进行融合获得融合基因,将酶切后的融合基因与酶切的穿梭表达质粒pMV261进行连接,对获得的重组质粒进行酶切、PCR、测序鉴定,将鉴定正确的重组质粒通过电转导入BCG感受态细胞。通过温度诱导促进融合基因的表达,利用western-blot检测目的蛋白的表达。构建EB病毒阳性鼻咽癌动物模型,利用获得的rBCG对实验动物进行免疫,定期测量肿瘤组织长径和短径并计算其体积。一段时间后将实验动物处死,获取肿瘤组织,称重并计算肿瘤组织抑制率,HE染色观察炎性细胞浸润情况。结果从B95-8细胞中提取的总RNA经琼脂糖凝胶电泳检测条带清晰,明暗分明,质量较好,利用PT-PCR获得了LMP1全长cDNA,并以cDNA为模板设计特引物扩增获得了1225 bp的LMP1。以含目的基因IL-2的质粒为模板扩增获得453 bp IL-2,利用overlap-PCR扩增获得1623bp IL-2-LMP1融合基因。将融合基因连接到质粒pMV261,经筛选、克隆后进行PCR、酶切、测序鉴定。PCR扩增获得1600bp左右的片段,与融合基因大小基本一致,酶切获得1600bp与4500bp左右两条片段,大小与预期一致,测序结果显示该融合基因序列与已知序列一致性为100%。利用电转仪将构建好的重组质粒导入BCG感受态细胞,经温度诱导后利用western-blot可以检测到外源基因融合蛋白的表达。在动物实验中rBCG组、BCG组、PBS组成瘤时间无明显差异,各组肿瘤体积无明显差异。免疫接种后同一时间rBCG组肿瘤体积小于PBS组和BCG组,BCG组小于PBS组。rBCG组平均瘤重小于BCG组、PBS组,BCG组与PBS组之间无明显差异,rBCG组肿瘤抑制率38.00%高于BCG组11.91%。肿瘤组织HE染色结果显示,rBCG组肿瘤组织有明显的淋巴细胞、中性粒细胞浸润。结论构建获得了pMV261-IL-2-LMP1重组质粒,并成功将重组质粒导入BCG,获得了能够稳定表达融合蛋白的rBCG,构建的rBCG对EB病毒阳性鼻咽癌肿瘤具有抑制作用。(本文来源于《济南大学》期刊2019-05-01）
于艳辉,杨升,姜鑫,信彩岩,李显赫[3]（2018）在《猪弓形虫重组卡介苗的构建及其免疫保护性》一文中研究指出目的构建弓形虫Rhomboid基因和猪IL-2基因的重组卡介苗(BCG),并分析其免疫保护效果。方法应用RT-PCR技术分别扩增弓形虫Rhomboid基因和猪IL-2基因,克隆至p MD18-T载体中,双酶切鉴定及测序正确后,将弓形虫Rhomboid基因和猪IL-2基因串联后分别连接至穿梭表达载体pMV261和整合表达载体pMV361中,电转化BCG,制备重组BCG pMV261-IL-2-Rho和pMV361-IL-2-Rho。分别经颈部肌肉注射免疫猪,共3次,每次间隔2周,免疫剂量均为108 CFU/只,采用ELISA法检测免疫前后猪体内抗体(IgG)滴度、Th1型及Th2型细胞因子的变化情况;第3次免疫后2周通过腹腔注射的方式接种弓形虫China I株速殖子1×108个/只进行攻虫试验,观察重组BCG对猪的免疫保护效果。结果成功构建了重组BCG p MV261-IL-2-Rho和p MV361-IL-2-Rho。重组BCG免疫猪后,随着免疫次数的增加,血清中抗体滴度也逐渐升高,且与PBS对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01)。3次免疫后,pMV261-IL-2-Rho组血清Th1型细胞因子IL-2、IFNγ和IL-12的表达水平均明显提高,与PBS对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05),而pMV361-IL-2-Rho组血清IL-2、IFNγ和IL-12的水平虽略有升高,但与PBS对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05);各组在免疫过程中Th2型细胞因子IL-4水平均未发生明显变化。攻虫后各组猪出现精神沉郁,食欲下降,体温升高等症状,耐过发病期后的猪,食欲逐渐恢复,体温渐趋正常,各种症状减轻,且各组猪在攻虫后20 d均无死亡。结论构建的基因重组BCG pMV261-IL-2-Rho对猪弓形虫感染具有一定的免疫保护作用。(本文来源于《中国生物制品学杂志》期刊2018年07期）
孟凡爽[4]（2018）在《分枝杆菌RD-1区部分基因重组卡介苗的构建及其免疫活性的研究》一文中研究指出肺结核是由结核分枝杆菌引起的一类人畜共患慢性传染疾病,严重威胁人类及患病动物的健康。目前,卡介苗仍然是世界范围内公认的肺结核疫苗,但是由于地域、年限的差异导致卡介苗的保护效力不断的下降,这可能是由于传代过程中某些功能基因的缺失,因此人们积极寻求卡介苗的改良方法以期提高其保护力。结核分枝杆菌的RD-1区(Region of difference,1)是卡介苗同致病性分枝杆菌相比缺失的区域,由Rv3871-Rv3879c 9个基因构成,RD-1区编码的蛋白在结核分枝杆菌侵染机体的过程中发挥巨大的作用。随着结核分枝杆菌基因组测序工作的完成,对结核分枝杆菌的研究进入分子水平,将RD-1区基因重组载体导入卡介苗表达蛋白或为肺结核疫苗的改良提供新的思路。本实验首先运用分子生物学技术获得大肠杆菌-分枝杆菌穿梭载体pMV261-RD-1区基因重组质粒6个,利用电穿孔法将构建成功的部分重组质粒转化至卡介苗中,构建重组卡介苗,经培养得到重组卡介苗菌株。利用培养的重组卡介苗免疫动物,分别在免疫后的第6周和第12周对样品进行检测,通过检测实验动物脾淋巴细胞增殖情况,抗体水平变化情况以及小鼠脾淋巴细胞培养上清中的细胞因子IFN-γ、NO含量来观察小鼠体内免疫情况并对数据进行分析,实验结果如下所示:1、本实验利用分子生物学技术获得6个RD-1区重组穿梭质粒即pMV-261-Rv3872、pMV-261-Rv3873、pMV-261-Rv3874、pMV-261-Rv3875、pMV-261-Rv3876、pMV261-Rv3877。2、利用电转化技术成功获得3个重组卡介苗即rBCG:ESAT-6、rBCG:EspI、rBCG:Snm4,重组卡介苗的生长曲线同卡介苗相比未发生明显的变化,可以用于后续免疫实验。3、免疫后每周称量实验动物的体重,发现注射卡介苗、重组卡介苗的小鼠同注射PBS组的小鼠相比,体重未发生明显变化,注射的重组卡介苗没有影响动物的生长。4、抗体效价检测结果:免疫6周后,各实验组组血清中IgG水平同PBS组相比均极显着上升(P<0.01),免疫12周后,抗体效价有所降低,BCG组及rBCG:ESAT-6组血清中IgG水平同PBS组相比显着上升(P<0.05)。rBCG:ESAT-6免疫动物血清的效价稍低于BCG组,但是能够保持长时间的高水平抗体效价。5、脾淋巴细胞增殖实验结果表明同PBS组相比,rBCG:ESAT-6组的脾淋巴细胞在受到PPD刺激时,能够在免疫后第六周极明显(P<0.01)的刺激脾淋巴细胞增殖;免疫12周后,PPD刺激后rBCG:ESAT-6组SI(实验组与对照组吸光度的比值,比值大于1则为阳性)极为显着(P<0.01),BCG组差异显着(P<0.05)。同PBS组以及BCG组相比,rBCG:ESAT-6组能够维持较高的细胞免疫水平。6、INF-γ检测结果表明:免疫6周、12周后,同PBS组相比较,各实验组小鼠脾细胞上清中IFN-γ的产量均显著增加(P<0.01)。7、NO检测结果表明:免疫6周后,各实验组的脾淋巴细胞受到PPD刺激时,NO的表达水平同PBS组相比均极为显着(P<0.01);免疫12周后,BCG组及rBCG:ESAT-6组的脾细胞受到PPD刺激时,NO的表达水平同PBS组相比均极为显着(P<0.01),rBCG:EspI、rBCG:Snm4组NO生成量差异显着(P<0.05)。(本文来源于《吉林农业大学》期刊2018-05-01）
郭衍冰,曹利利,姚新华,董航,姜旭[5]（2017）在《堆型艾美耳球虫cSZ1基因重组卡介苗的抗球虫保护效果》一文中研究指出本试验将已构建的含有堆型艾美耳球虫cSZ1基因的重组卡介苗p MV361-cSZ1分别以滴鼻、口服和颈部皮下注射的方式免疫雏鸡,经检测各组体液和细胞免疫水平、OPG、相对增重率及ACI等指标,对重组卡介苗的抗球虫保护效果做出评价,为制备相关疫苗的研究奠定基础。(本文来源于《吉林畜牧兽医》期刊2017年10期）
罗文武,宫鹏涛,李建华,杨举,李赫[6]（2016）在《弓形虫Rhomboid-IL-2基因重组卡介苗的构建及其对犬的免疫效果》一文中研究指出目的构建弓形虫Rhomboid以及犬白介素2基因重组卡介苗,并观察其对免疫犬的免疫效果。方法将鉴定正确的弓形虫Rhombiod基因和犬IL-2基因一起克隆到大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭表达载体和整合表达载体中,构建重组质粒pMV261(361)-IL2-Rho。将重组质粒转入卡介苗中,对表达产物进行SDS-PAGE电泳分析及Western blot鉴定。分别用重组卡介苗pMV261(361)-IL2-Rho和pMV261(361)-Rho经皮下免疫犬,检测免疫犬体液及细胞免疫水平变化并观察其存活时间。结果成功构建pMV261(361)-IL2-Rho重组质粒,弓形虫Rhomboid基因在重组卡介苗中稳定表达46ku的目的蛋白,Western blot显示该蛋白能被弓形虫感染鼠血清识别。动物实验表明,rBCGpMV261(361)-IL2-Rho能诱导产生较强的体液免疫和Th1型细胞免疫应答反应,rBCGpMV361-IL2-Rho免疫组感染弓形虫后的存活时间组为(14.40±4.50)d,rBCGpMV261-IL2-Rho免疫组感染弓形虫后的存活时间组为(13.00±4.75)d,较BCG对照组存活时间(8.20±5.45)d有所延长。结论 rBCGpMV261(361)-IL2-Rho蛋白具有免疫原性。该重组卡介苗对犬弓形虫感染有一定保护效果。(本文来源于《中国病原生物学杂志》期刊2016年08期）
罗文武,刘姣,朱元东,刘贵军,于高水[7]（2016）在《重组卡介苗的应用研究及进展》一文中研究指出卡介苗(Bacillus Calmette-Guerin Vaccine,BCG)是牛结核分枝杆菌的突变株。上世纪二十年代卡介苗(Bacillus Calmette-Guerin Vaccine,BCG)被用于接种新生儿来预防结核病。在其安全性被确定后,卡介苗被在全世界范围内推广应用,是目前官方承认的预防结核病最安全有效的疫苗[2],是WHO推荐的,出生时预防接种的疫苗之一。到目前为止,卡介苗已经在全球近200个国家和地区(本文来源于《山东畜牧兽医》期刊2016年04期）
张海峰,方习静,闭兰[8]（2016）在《重组卡介苗-BE1726D的鉴定及其免疫原性评价》一文中研究指出目的鉴定重组卡介苗-BE1726D(rBCG-BE1726D)特异性蛋白的表达,并评价其在小鼠体内的免疫原性。方法将冻干的菌株BCG-SSI和rBCG-BE1726D扩大培养后,超滤浓缩收集上清,超声破碎离心后收获菌体,Western blot法进行特异性蛋白检测。用rBCG-BE1726D和BCG-SSI菌株经腹股沟皮下免疫BALB/c小鼠6周后,分离小鼠脾淋巴细胞,ELISPOT及ELISA法检测脾淋巴细胞干扰素γ(interferonγ,IFNγ)的分泌水平;流式细胞术检测小鼠脾淋巴细胞CD4~+和CD8~+ T细胞的比例。结果菌株rBCG-BE1726D中存在Ag85B、ESAT-6、RV2626c蛋白;菌株BCGSSI中仅存在Ag85B蛋白。经Ag85B刺激后,BCG-SSI组和rBCG-BE1726D组产生的细胞斑点数均明显高于PBST对照组(P<0.05);经PPD刺激后,rBCG-BE1726D组产生细胞斑点数量显着高于BCG-SSI组和PBST对照组(P<0.000 1);各组间ESAT-6、Rv2626c、Rv1733c、RpfD刺激所产生的细胞斑点数差异无统计学意义(P>0.05)。经Ag85B刺激后,BCG-SSI组和rBCG-BE1726D组产生IFNγ的水平显著高于PBST对照组(P<0.05);经PPD刺激后,rBCG-BE1726D组的IFNγ分泌水平与BCG-SSI组差异无统计学意义(P>0.05);各组间ESAT-6、Rv1733c、Rv2626c、RpfD刺激产生的IFNγ分泌水平差异无统计学意义(P>0.05)。rBCG-BE1726D组CD4~+、CD8~+细胞总比例及CD4~+ T/CD8~+ T比值明显低于BCG-SSI组和PBST对照组(P<0.05),CD8~+ T细胞比例明显高于BCG-SSI组和PBST对照组(P<0.05)。结论 rBCG-BE1726D有较强的免疫原性,可明显提高BALB/c小鼠的免疫应答水平,但与BCG-SSI比较,其免疫原性无明显优势,需对疫苗的保护力进行进一步研究。(本文来源于《中国生物制品学杂志》期刊2016年02期）
时坤,孙凡婷,张妍,李晶,刘菲[9]（2015）在《19ku脂蛋白信号肽优化表达的牛病毒性腹泻病毒E2基因重组卡介苗初步免疫研究》一文中研究指出为评价19ku脂蛋白信号肽优化表达的牛病毒性腹泻病毒(BVDV)重组卡介苗对小鼠的免疫效果,本研究将已构建的rBCG/19ku-E_2、rBCG/E_2、rBCG/pMV261(pMV261空载体构建的rBCG作为实验对照组)、卡介苗(BCG)及BVDV灭活苗免疫小鼠,通过检测血清抗体效价、T淋巴细胞亚群含量及细胞因子水平,评价其体液免疫与细胞免疫效果。结果显示,rBCG/19ku-E_2可以引起BVDV特异性抗体的产生,并且抗体水平要高于rBCG/E_2、rBCG/pMV261组。对CD4~+、CD8~+T淋巴细胞亚群含量的检测结果表明,rBCG免疫小鼠对CD4~+、CD8~+T淋巴细胞亚群没有显着影响。通过对IL-4、IL-10、IL-12和IFN-γ细胞因子检测结果表明,rBCG主要诱导Th1型细胞免疫应答,rBCG/19ku-E_2诱导的细胞因子水平低于BCG免疫组,但均高于细胞因子的平均水平。结果表明,rBCG/19ku-E_2可以诱导小鼠产生较好的特异性体液免疫应答和细胞免疫应答,为BVDV新型疫苗研究奠定基础。(本文来源于《中国预防兽医学报》期刊2015年12期）
孙凡婷,张云,张妍,李晶,刘菲[10]（2015）在《牛病毒性腹泻病毒E_0-E_2融合基因重组卡介苗的构建》一文中研究指出为了增强重组卡介苗对牛病毒性腹泻黏膜病的免疫效果,本研究将敲除疏水氨基酸及密码子优化的E0基因与去除了C末端的疏水序列E2截短基因采用重迭延伸PCR的方法进行融合后,将其分别与p MV261/p MV361载体连接,电转化至卡介苗中,构建重组卡介苗。45℃热诱导重组卡介苗表达,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blotting分析。结果证明E0-E2融合基因在卡介苗中成功表达,目的蛋白大小为66.5 ku,且具有反应原性。(本文来源于《畜牧与兽医》期刊2015年10期）
重组卡介苗论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的本研究将LMP1与人IL-2基因融合后构建重组质粒,并将构建的重组质粒载体通过电转导入感受态卡介苗(BCG),获得能够稳定表达融合蛋白的重组BCG(rBCG),通过对构建的EB病毒阳性鼻咽癌动物模型肿瘤生长的抑制情况检测rBCG的免疫效果,为研发既能抗结核病又能对EB病毒阳性肿瘤产生免疫的双价疫苗奠定了基础。方法从EB病毒阳性的B95-8细胞中提取总RNA,通过RT-PCR获得cDNA,以此为模板扩增获得LMP1,以IL-2 pMalLP质粒为模板扩增获得IL-2,利用重迭PCR(overlap-PCR)将两段基因进行融合获得融合基因,将酶切后的融合基因与酶切的穿梭表达质粒pMV261进行连接,对获得的重组质粒进行酶切、PCR、测序鉴定,将鉴定正确的重组质粒通过电转导入BCG感受态细胞。通过温度诱导促进融合基因的表达,利用western-blot检测目的蛋白的表达。构建EB病毒阳性鼻咽癌动物模型,利用获得的rBCG对实验动物进行免疫,定期测量肿瘤组织长径和短径并计算其体积。一段时间后将实验动物处死,获取肿瘤组织,称重并计算肿瘤组织抑制率,HE染色观察炎性细胞浸润情况。结果从B95-8细胞中提取的总RNA经琼脂糖凝胶电泳检测条带清晰,明暗分明,质量较好,利用PT-PCR获得了LMP1全长cDNA,并以cDNA为模板设计特引物扩增获得了1225 bp的LMP1。以含目的基因IL-2的质粒为模板扩增获得453 bp IL-2,利用overlap-PCR扩增获得1623bp IL-2-LMP1融合基因。将融合基因连接到质粒pMV261,经筛选、克隆后进行PCR、酶切、测序鉴定。PCR扩增获得1600bp左右的片段,与融合基因大小基本一致,酶切获得1600bp与4500bp左右两条片段,大小与预期一致,测序结果显示该融合基因序列与已知序列一致性为100%。利用电转仪将构建好的重组质粒导入BCG感受态细胞,经温度诱导后利用western-blot可以检测到外源基因融合蛋白的表达。在动物实验中rBCG组、BCG组、PBS组成瘤时间无明显差异,各组肿瘤体积无明显差异。免疫接种后同一时间rBCG组肿瘤体积小于PBS组和BCG组,BCG组小于PBS组。rBCG组平均瘤重小于BCG组、PBS组,BCG组与PBS组之间无明显差异,rBCG组肿瘤抑制率38.00%高于BCG组11.91%。肿瘤组织HE染色结果显示,rBCG组肿瘤组织有明显的淋巴细胞、中性粒细胞浸润。结论构建获得了pMV261-IL-2-LMP1重组质粒,并成功将重组质粒导入BCG,获得了能够稳定表达融合蛋白的rBCG,构建的rBCG对EB病毒阳性鼻咽癌肿瘤具有抑制作用。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
重组卡介苗论文参考文献
[1].李婷.两株不含c-di-GMP代谢相关基因的重组卡介苗菌株引起的免疫应答对不同毒力的结核菌株的抵抗作用[J].微生物学免疫学进展.2019
[2].裴杰.IL-2与EB病毒LMP1融合基因重组卡介苗的构建与鉴定[D].济南大学.2019
[3].于艳辉,杨升,姜鑫,信彩岩,李显赫.猪弓形虫重组卡介苗的构建及其免疫保护性[J].中国生物制品学杂志.2018
[4].孟凡爽.分枝杆菌RD-1区部分基因重组卡介苗的构建及其免疫活性的研究[D].吉林农业大学.2018
[5].郭衍冰,曹利利,姚新华,董航,姜旭.堆型艾美耳球虫cSZ1基因重组卡介苗的抗球虫保护效果[J].吉林畜牧兽医.2017
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[7].罗文武,刘姣,朱元东,刘贵军,于高水.重组卡介苗的应用研究及进展[J].山东畜牧兽医.2016
[8].张海峰,方习静,闭兰.重组卡介苗-BE1726D的鉴定及其免疫原性评价[J].中国生物制品学杂志.2016
[9].时坤,孙凡婷,张妍,李晶,刘菲.19ku脂蛋白信号肽优化表达的牛病毒性腹泻病毒E2基因重组卡介苗初步免疫研究[J].中国预防兽医学报.2015
[10].孙凡婷,张云,张妍,李晶,刘菲.牛病毒性腹泻病毒E_0-E_2融合基因重组卡介苗的构建[J].畜牧与兽医.2015
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