导读:本文包含了巨细胞病毒启动子论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:病毒,蛋白,基因,巨细胞,元件,转基因,细胞。
巨细胞病毒启动子论文文献综述
王喜成,贾岩龙,郭潇,张玺,王天云[1]（2016）在《巨细胞病毒和猴空泡病毒40启动子在中国仓鼠卵巢细胞中驱动基因表达效率比较》一文中研究指出目的比较巨细胞病毒(CMV)和猴空泡病毒40(SV40)2种启动子驱动外源基因在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞CHO-K1中的表达效率。方法分别构建由CMV和SV40启动子驱动表达绿色荧光蛋白(EGFP)的真核表达载体pWTY-02和pWTY-03。用阳离子脂质体LipofectamineTM2000将表达载体质粒分别转染CHO-K1细胞,倒置荧光显微镜观察转染后CHO-K1细胞中EGFP的表达情况;流式细胞术检测EGFP的荧光强度,以比较2种启动子驱动外源基因表达的效率。结果 2种启动子均能够驱动EGFP在CHO-K1细胞中表达。转染质粒pWTY-02的CHOK1细胞的平均荧光强度明显高于转染质粒pWTY-03的CHO-K1细胞(P<0.05)。结论 CMV启动子在CHO-K1细胞中驱动EGFP的表达效率较高,为后续CHO表达系统中提高外源基因表达效率启动子的选择提供了依据。(本文来源于《新乡医学院学报》期刊2016年07期）
苗玉发,王叁龙,周晓冰,霍艳,耿兴超[2]（2014）在《巨细胞病毒启动子序列检测的复合实时定量PCR方法的建立》一文中研究指出目的建立和验证用于巨细胞病毒(CMV)启动子序列检测的复合实时定量PCR方法。方法以CMV启动子序列和小鼠管家基因β肌动蛋白基因的cDNA序列为模板分别设计探针和引物,用SYBR GreenⅠ熔解曲线分析引物扩增的特异性。对反应体系进行系统优化,并验证方法的灵敏度、线性和重复性。结果针对CMV启动子序列的上游引物为5'AGACTTGGAAATCCCCGTGAGT3',下游引物为5'CGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGT3',探针为5'AACCGCTATCCACGCCCATTGATG3'。针对β肌动蛋白基因的上游引物为5'CCTGAGGCTCTTTTCCAGCC3',下游引物为5'TAGAGGTCTTTACGGATGTCAACGT3',探针为5'TCCTTCTTGGGTATGGAATCCTGTGGC3'。用CMV启动子标准品制作的标准曲线,反应效率为100%,相关系数为0.9978,定量范围达到1.5×102~1.5×107拷贝,反应体系灵敏度为30拷贝。结论建立了检测CMV启动子序列的复合实时定量PCR方法。(本文来源于《中国药理学与毒理学杂志》期刊2014年02期）
苗玉发,周晓冰,王叁龙,王秀文,王雪[3]（2013）在《巨细胞病毒启动子序列检测的复合实时定量PCR方法的建立》一文中研究指出目的巨细胞病毒(CMV)启动子是启动真核基因表达的强力启动子,常参与构建高效真核表达载体,并广泛应用于基因治疗产品和DNA疫苗的制备。本研究所涉及的基因治疗产品是插入CMV启动子和人粒细胞-巨嗜细胞集落刺激因子(GM-CSF)基因的单纯疱疹病毒载体疫苗,CMV启动子能启动疫苗高效表达GM-CSF,导致局部树突状细胞分裂和成熟,从而诱导和增强抗肿瘤免疫反应。本研究的目的是探索建立CMV启动子序列检测的复合实时定量PCR方法,并期望使建立的方法成为含CMV启动子的基因治疗产品的通用检测方法。方法以CMV启动子序列和小鼠管家基因β肌动蛋白的cDNA序列为模版分别设计探针和引物,用SYBR GreenⅠ熔解曲线分析两对引物扩增的特异性。对反应体系进行系统优化,并验证检测方法的灵敏度、线性和重复性、以及复合反应效率的变化。结果针对CMV启动子序列的上游引物为5′AGACTTGGAAATCCCCGTGAGT3′,下游引物为5′CGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGT3′,探针为5′AACCGCTATC-CACGCCCATTGATG3′。针对β肌动蛋白的上游引物为5′CCTGAGGCTCTTTTCCAGCC3′,下游引物为5′TAGAG-GTCTTTACGGATGTCAACGT3′,探针为5′TCCTTCTTGGGTATGGAATCCTGTGGC3′。两对引物分别对基因治疗产品和小鼠基因组扩增后,在80～85℃间有一特异性的产物峰,没有出现双峰或异常增宽峰。针对CMV启动子序列设计的引物,扩增无模板对照时有一引物二聚体峰,两对引物特性都较高。引物、探针、酶和Mg~(2+)浓度都优化到最佳浓度。用CMV启动子标准品制作的标准曲线,反应效率为100%,相关系数为0.9978,定量范围达到1.5×10~2～1.5×10~7copies,反应体系灵敏度为30 copies。相比于单独PCR反应,基因治疗产品与β肌动蛋白标准品复合PCR反应后扩增效率有所降低。结论建立了检测CMV启动子序列的复合实时定量PCR方法。(本文来源于《2013年（第叁届）中国药物毒理学年会暨药物非临床安全性评价研究论坛论文摘要》期刊2013-07-16）
苗玉发,周晓冰,王叁龙,王秀文,王雪[4]（2013）在《巨细胞病毒启动子序列检测的复合实时定量PCR方法的建立》一文中研究指出目的巨细胞病毒(CMV)启动子是启动真核基因表达的强力启动子,常参与构建高效真核表达载体,并广泛应用于基因治疗产品和DNA疫苗的制备。本研究所涉及的基因治疗产品是插入CMV启动子和人粒细胞-巨嗜细胞集落刺激因子(GM-CSF)基因的单纯疱疹病毒载体疫苗,CMV启动子能启动疫苗高效表达GM-CSF,导致局部树突状细胞分裂和成熟,从而诱导和增强抗肿瘤免疫反应。本研究的目的是探索建立CMV启动子序列检测的复合实时定量PCR方法,并期望使建立的方法成为含CMV启动子的基因治疗产品的通用检测方法。方法以CMV启动子序列和小鼠管家基因β肌动蛋白的cDNA序列为模版分别设计探针和引物,用SYBR GreenⅠ熔解曲线分析两对引物扩增的特异性。对反应体系进行系统优化,并验证检测方法的灵敏度、线性和重复性、以及复合反应效率的变化。结果针对CMV启动子序列的上游引物为5'AGACTTGGAAATCCCCGTGAGT3',下游引物为5'CGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGT3',探针为5'AACCGCTATC-CACGCCCATTGATG3'。针对β肌动蛋白的上游引物为5'CCTGAGGCTCTTTTCCAGCC3',下游引物为5'TAGAG-GTCTTTACGGATGTCAACGT3',探针为5'TCCTTCTTGGGTATGGAATCCTGTGGC3'。两对引物分别对基因治疗产品和小鼠基因组扩增后,在80～85℃间有一特异性的产物峰,没有出现双峰或异常增宽峰。针对CMV启动子序列设计的引物,扩增无模板对照时有一引物二聚体峰,两对引物特性都较高。引物、探针、酶和Mg2+浓度都优化到最佳浓度。用CMV启动子标准品制作的标准曲线,反应效率为100%,相关系数为0.9978,定量范围达到1.5×102～1.5×107 copies,反应体系灵敏度为30 copies。相比于单独PCR反应,基因治疗产品与β肌动蛋白标准品复合PCR反应后扩增效率有所降低。结论建立了检测CMV启动子序列的复合实时定量PCR方法。(本文来源于《中国药理学与毒理学杂志》期刊2013年03期）
宋姗姗,葛菁萍,李梅,高冬妮,金丽颖[5]（2013）在《构建具有巨细胞病毒(CMV)启动子的杆状病毒高效表达载体并利用其在鸡胚原代细胞中表达eGFP基因》一文中研究指出【目的】杆状病毒载体在哺乳动物细胞中不复制,具有极高的生物安全性,而通过引入细胞特异性启动子、"病毒假型化"、添加不同功能调控元件等优化手段,杆状病毒可转导的细胞类型明显增多、转导效率明显增高。优化的重组杆状病毒可以在鸡细胞中表达,确定重组杆状病毒在鸡细胞中高效表达的条件,为禽类基因工程疫苗的开发奠定了坚实的基础。【方法】本研究以增强型绿色荧光蛋白(Enhanced GreenFluorescent Protein,eGFP)为报告基因,构建含巨细胞病毒(Cytomegaoviyns,CMV)启动子启动的重组转座载体,并且通过病毒假型化(TM/CTD of VSV-GED)、添加转录后调控元件(Woodchuck hepatitis virus post-transcriptional regulatory element,WPRE)和腺病毒反向重复序列(Inverted terminal repeats,ITRs)等手段优化重组杆状病毒表达载体,最终利用重组杆状病毒对鸡胚原代细胞的侵染进行eGFP的表达,比较分析不同重组载体对蛋白表达水平的影响。【结果】eGFP表达结果显示,12 h便可在倒置荧光显微镜下检测出eGFP的表达,随着时间的延长,eGFP表达效率先增加后降低。经过VSVGED病毒假型化的重组杆状病毒转导效率从36%增加至48.2%。添加转录后调控元件WPRE的重组杆状病毒介导eGFP的表达效果与添加10mmol/L丁酸盐法基本相同,但对细胞几乎没有毒性。从72 h内的eGFP表达强度看,只有添加ITRs元件的重组杆状病毒的表达强度随时间的延长而极缓慢增加。【结论】eGFP表达结果显示,利用VSVGED病毒假型化手段可以提高杆状病毒转导鸡胚原代细胞的效率;添加转录后调控元件WPRE的重组杆状病毒介导eGFP的表达效果与添加丁酸盐法基本相同,可以增强杆状病毒介导报告基因在鸡胚原代细胞中的表达水平;添加ITRs元件的重组杆状病毒具有延长eGFP表达时间的作用。(本文来源于《微生物学报》期刊2013年06期）
叶景佳,陈萍,贾振宇,李春春,陈丽红[6]（2013）在《巨细胞病毒增强子提高人甲胎蛋白启动子效率的研究》一文中研究指出人巨细胞病毒(CMV)早期转录增强子能够提高其他基因启动子的转录启动效率。CMV早期转录增强子对人甲胎蛋白(AFP)启动子的转录增强的作用及特异性的影响,将决定其是否适用于肝癌靶向性基因治疗。作者利用PCR法分别克隆了人AFP增强子、启动子和CMV早期转录增强子,构建了相应的pGL4.10荧光素酶报告基因载体,与内参照pGL4.74质粒共转染人肝癌细胞Hep3B、HepG2、SMMC7721和人宫颈癌细胞HeLa、乳腺癌细胞Bcap37,利用双荧光素酶检测系统检测分析了这些细胞中AFP增强子—启动子的效率。结果表明,CMV早期转录增强子能够明显增强AFP增强子—启动子在肝癌细胞中的效率(在Hep3B、HepG2和SMMC7721细胞中分别提高33.07、134.22和465.18倍),但是也能提高AFP增强子—启动子在非肝癌细胞中的效率(在HeLa和Bcap37细胞中分别提高335.73和1096.81倍)。因此,CMV增强子虽然可以大大提高AFP增强子—启动子的效率,但无特异性,直接将其用于靶向AFP的肝癌基因治疗时可能会产生由于治疗基因在正常组织中的非特异表达而引起的副作用。(本文来源于《中国细胞生物学学报》期刊2013年04期）
成勇,黄玉政,袁玉国,张信军,张玉峰[7]（2009）在《酪蛋白和巨细胞病毒复合启动子激活人乳铁蛋白cDNA基因在转基因小鼠乳腺中的表达》一文中研究指出为了提高转基因动物乳腺特异性表达水平,构建了两种不同启动子的乳腺特异性表达载体,以比较其乳腺特异性表达效果。应用山羊β-酪蛋白或牛αs1-酪蛋白调控序列、鸡β-球蛋白隔离元件、巨细胞病毒(CMV)基因表达调控元件构建了乳腺特异性表达复合启动/增强子(Pcmv),以单一的酪蛋白启动子作为对照,与人乳铁蛋白cDNA组成乳腺特异性表达载体,并制备了转基因小鼠。经ELISA检测,复合启动/增强子构件指导人乳铁蛋白cDNA在原代转基因小鼠乳腺中重组人乳铁蛋白(rhLF)表达水平(2.0~8.1 g.L-1)明显高于单一酪蛋白启动子构件(0~12 mg.L-1),而在所有转基因小鼠的血清和唾液中未检测到rhLF。结果提示:酪蛋白-Pcmv复合启动/增强子不仅可提高转基因小鼠乳腺特异性表达水平,而且具有良好的乳腺表达特异性。(本文来源于《南京农业大学学报》期刊2009年01期）
沈萍[8]（2006）在《对人类巨细胞病毒极早期基因启动子（HCMV MIEP）的转录调控机制研究及其应用》一文中研究指出人类巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)的感染对人类健康造成严重威胁。HCMV几乎可以感染所有器官,它的感染一方面使细胞吞噬溶解功能、抗原呈递功能、分泌抗病毒细胞因子和调节因子的功能显着降低;另一方面通过抑制Th功能或下调感染细胞MHC—I类抗原表达,使被感染个体免疫功能下降。在感染发生过程中极早期启动子(major immediate early enhancer/promoter, MIEP)是病毒和宿主细胞发生相互作用的通信接口。因此,阐明它的转录调控机制是预防和治疗疾病的关键。另一方面,尽管由于这个启动子能指导基因在大多数的体外培养细胞中瞬时/稳定表达,人们也常利用它在细胞内驱动外源蛋白的表达。然而,在转基因动物中人们发现MIEP指导外源基因表达的范围以及程度都是有限的。因此,对MIEP调控机制的了解,有利于我们对该启动子进行进一步的改造,拓展其在体内的表达范围。人们已经知道,HCMV MIEP上存在着一系列的参与正或负控制的顺式调控元件,例如16-bp、17-bp、18-bp(K位点)、19-bp(P位点)、21-bp重复元件以及SRE、AP1和RA等结合位点。本文的工作主要集中在对其中两类重复出现的调控元件:19-bp和18-bp重复元件的研究上。虽然,目前已有很多研究集中在这两类位点上,但人们对它们的认识仍然不是很明确。我们想了解这两类对MIEP的活性起主导作用的,高度保守的重复序列在功能上是否只是相互备份的冗余元件,还是在功能上存在不同的差异。因此,通过诱饵寡核苷酸(decoy)干涉、依次缺失突变、定点突变以及体外结合等分析手段我们发现各个重复元件的功能确实存在差异。我们的研究还发现,将第一个19-bp元件内部的CG进行颠换能显着增强HCMV MIEP在培养细胞中的活性。这个现象我们在转基因小鼠中也得到证明,同时还显示MIEP在转基因小鼠各组织的表达范围也显着扩大。在本研究中,我们也初步发现了18-bp重复元件和19-bp重复元件之间可能存在的功能交互作用。(本文来源于《中国科学院研究生院（上海生命科学研究院）》期刊2006-05-01）
彭奕冰,王枕亚,孙宏斌,张王月,谈意隽[9]（2005）在《肿瘤坏死因子α启动子基因多态性与巨细胞病毒感染所致婴儿肝炎综合征的关系》一文中研究指出目的探讨血清肿瘤坏死因子α(TNFα)水平及TNFα启动子基因多态性与巨细胞病毒(CMV)感染所致婴儿肝炎综合征(NHS)的关系。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清TNFα水平,同时应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测TNFα启动子基因多态性。结果在NHS患儿中,TNFα基因启动子区-308 G-A单碱基突变频率明显高于健康人群(P<0.01),在NHS患儿母亲中的突变频率也明显高于健康人群(P<0.01),在NHS患儿与NHS患儿母亲中的突变频率差异无显着性。NHS患儿血清TNFα水平[(1 164.00±576.00)pg/m l]显着高于正常同龄婴幼儿[(5.22±2.24)pg/m l,P<0.001];NHS患儿母亲血清TNFα水平[(822.60±506.00)pg/m l]显着高于正常健康成年人[(14.90±8.20)pg/m l,P<0.001],各组内TNFα基因型间TNFα水平比较差异均无显著性(P>0.05)。结论TNFα的基因启动子区-308单碱基多态性可能与NHS的易感性、发病及致病相关。(本文来源于《检验医学》期刊2005年06期）
陈广南,梁希若,吴淑华[10]（1997）在《含巨细胞病毒早期启动子的EPO逆转录病毒表达载体的构建》一文中研究指出本文构建了含巨细胞病毒（CMV）早期启动子的红细胞生成素（EPO）逆转录病毒表达我体。困逆转录病毒表达我体pN2A需用外源启动子才能表达国的基因，故把CMV早期启动手及包括除信号肽中第2、3和4位氨基酸外的所有编码区及两个内含子序列的EPO次全基因片段一起克隆到pN2A载体neo基因下游的多聚接头上的单一酶切位点BglⅡ上，构建成重组质粒pN2ACMVEPO。(本文来源于《广州医学院学报》期刊1997年02期）
巨细胞病毒启动子论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的建立和验证用于巨细胞病毒(CMV)启动子序列检测的复合实时定量PCR方法。方法以CMV启动子序列和小鼠管家基因β肌动蛋白基因的cDNA序列为模板分别设计探针和引物,用SYBR GreenⅠ熔解曲线分析引物扩增的特异性。对反应体系进行系统优化,并验证方法的灵敏度、线性和重复性。结果针对CMV启动子序列的上游引物为5'AGACTTGGAAATCCCCGTGAGT3',下游引物为5'CGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGT3',探针为5'AACCGCTATCCACGCCCATTGATG3'。针对β肌动蛋白基因的上游引物为5'CCTGAGGCTCTTTTCCAGCC3',下游引物为5'TAGAGGTCTTTACGGATGTCAACGT3',探针为5'TCCTTCTTGGGTATGGAATCCTGTGGC3'。用CMV启动子标准品制作的标准曲线,反应效率为100%,相关系数为0.9978,定量范围达到1.5×102~1.5×107拷贝,反应体系灵敏度为30拷贝。结论建立了检测CMV启动子序列的复合实时定量PCR方法。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
巨细胞病毒启动子论文参考文献
[1].王喜成,贾岩龙,郭潇,张玺,王天云.巨细胞病毒和猴空泡病毒40启动子在中国仓鼠卵巢细胞中驱动基因表达效率比较[J].新乡医学院学报.2016
[2].苗玉发,王叁龙,周晓冰,霍艳,耿兴超.巨细胞病毒启动子序列检测的复合实时定量PCR方法的建立[J].中国药理学与毒理学杂志.2014
[3].苗玉发,周晓冰,王叁龙,王秀文,王雪.巨细胞病毒启动子序列检测的复合实时定量PCR方法的建立[C].2013年（第叁届）中国药物毒理学年会暨药物非临床安全性评价研究论坛论文摘要.2013
[4].苗玉发,周晓冰,王叁龙,王秀文,王雪.巨细胞病毒启动子序列检测的复合实时定量PCR方法的建立[J].中国药理学与毒理学杂志.2013
[5].宋姗姗,葛菁萍,李梅,高冬妮,金丽颖.构建具有巨细胞病毒(CMV)启动子的杆状病毒高效表达载体并利用其在鸡胚原代细胞中表达eGFP基因[J].微生物学报.2013
[6].叶景佳,陈萍,贾振宇,李春春,陈丽红.巨细胞病毒增强子提高人甲胎蛋白启动子效率的研究[J].中国细胞生物学学报.2013
[7].成勇,黄玉政,袁玉国,张信军,张玉峰.酪蛋白和巨细胞病毒复合启动子激活人乳铁蛋白cDNA基因在转基因小鼠乳腺中的表达[J].南京农业大学学报.2009
[8].沈萍.对人类巨细胞病毒极早期基因启动子（HCMVMIEP）的转录调控机制研究及其应用[D].中国科学院研究生院（上海生命科学研究院）.2006
[9].彭奕冰,王枕亚,孙宏斌,张王月,谈意隽.肿瘤坏死因子α启动子基因多态性与巨细胞病毒感染所致婴儿肝炎综合征的关系[J].检验医学.2005
[10].陈广南,梁希若,吴淑华.含巨细胞病毒早期启动子的EPO逆转录病毒表达载体的构建[J].广州医学院学报.1997
论文知识图
