3A蛋白104–115位氨基酸缺失口蹄疫A型标记病毒的构建

论文摘要

【目的】构建一株含3A非结构蛋白104–115位氨基酸缺失的口蹄疫A型标记病毒,分析其生物学特性和发展标记疫苗的潜力。【方法】采用融合PCR技术,在当前流行毒株A/Sea-97/CHA/2014全长感染性克隆p QAHN中引入3A104–115位氨基酸的缺失,构建全长重组质粒。全长质粒经NotI线化后转染表达T7RNA聚合酶的稳定细胞系,拯救标记病毒。RT-PCR、序列分析、间接免疫荧光和Western blotting鉴定标记病毒。噬斑表型和一步生长曲线分析标记病毒的生物学特性,并用实验室开发的针对3A优势表位（AEKNPLE）的阻断ELISA方法分析其区分亲本和标记病毒感染的动物。【结果】成功拯救到一株含3A 104–115位氨基酸缺失的口蹄疫A型标记病毒,3A表位的缺失没有影响标记病毒的噬斑表型和一步生长曲线。3A单抗阻断ELISA可以明显区分标记病毒和亲本病毒感染的动物。【结论】本研究构建的3A蛋白104–115位氨基酸缺失的标记病毒可以作为发展口蹄疫鉴别诊断疫苗的候选毒株,用于我国未来口蹄疫A型的有效防控。

论文目录

• 1 材料和方法
•   1.1 质粒和细胞
•   1.2 主要试剂和动物
•   1.3 引物
•   1.4 3A蛋白104–115位氨基酸缺失FMDV全长c DNA克隆的构建
•   1.5 病毒的拯救
•   1.6 标记病毒的鉴定
•     1.6.1 RT-PCR和序列的测定:
•     1.6.2 间接免疫荧光:
•     1.6.3 Western blotting分析结果:
•   1.7 标记病毒的噬斑表型和一步生长曲线
•   1.8 动物实验
• 2 结果和分析
•   2.1 3A蛋白104–115位氨基酸缺失FMDV全长c DNA克隆的构建
•   2.2 病毒的拯救
•   2.3 拯救病毒的鉴定
•     2.3.1 RT-PCR:
•     2.3.2 间接免疫荧光分析:
•     2.3.3 Western blotting分析:
•     2.3.4 拯救病毒遗传稳定性分析:
•   2.4 标记病毒的噬斑表型和一步生长曲线
•   2.5 动物实验和抗体检测
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 李平花,马雪青,袁红,袁子文,孙普,白兴文,卢曾军,刘在新

关键词: 蛋白,位氨基酸缺失,口蹄疫型,标记病毒,构建

来源: 微生物学报 2019年05期

年度: 2019

分类: 基础科学,农业科技

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室,甘肃农业大学动物医学院

基金: 牛羊重大动物疫病基因工程疫苗及防控研究(2017YFD0500902)~~

分类号: S852.65

DOI: 10.13343/j.cnki.wsxb.20180347

页码: 907-915

总页数: 9

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