一、干细胞研究面临的问题（论文文献综述）
周彤[1]（2021）在《促进Oct4表达的化合物筛选及其维持干细胞干性作用研究》文中进行了进一步梳理干细胞是一类具有分化潜能和自我更新能力的细胞。因其独特的性质在疾病治疗、再生医学、发育生物学等多个领域发挥重要的作用。尽管干细胞在临床治疗中应用已久,但干细胞治疗仍然面临着细胞数量不足、体外培养易于分化等问题,影响干细胞的临床应用。鉴于目前利用添加条件培养基、血清替代物、生长因子等培养方法存在成分不明、性质不稳定、价格高昂等问题,有必要筛选价格低廉、性质稳定的小分子化合物以维持干细胞的多潜能性。Oct4基因是干细胞干性调控的最重要因子,其表达水平的变化直接影响干细胞的干性。因此本研究旨在筛选能通过促进Oct4基因表达来增强干细胞干性的小分子化合物,以作为干细胞二维培养的培养基添加剂,同时为重编程诱导剂的开发奠定基础。本研究首先以p EZX-MT01-Oct4-3’UTR荧光素酶报告质粒转染的细胞为筛选模型,筛选能够在转录后水平上提高Oct4基因表达的小分子化合物;之后通过探究化合物对干性因子表达及干细胞自我更新能力的影响,找到能够促进干细胞干性的小分子化合物;最后对得到的小分子化合物进行了初步的机制研究。1.对Oct4的表达具有转录后调控作用的化合物初筛为寻找能从转录后水平调控Oct4基因表达的化合物,以p EZX-MT01-Oct4-3’UTR荧光素酶报告质粒转染的细胞为筛选模型,对实验室购买的627种已上市药物进行初步筛选。荧光素酶活性检测结果表明,有66种药物都能明显促进荧光素酶的活性。提示这些化合物可能在转录后水平促进Oct4的表达。2.对Oct4的表达具有转录后调控作用的化合物复筛为寻找能真正靶向作用于Oct4 m RNA 3’UTR的化合物,分别将p EZX-MT01-Oct4-3’UTR或p EZX-MT01与p CMV-?-gal质粒共转染入细胞,之后分别加入初筛获得的目标化合物进行刺激。荧光素酶活性检测结果显示,化合物A8-61、A8-66、2A1-20、2A2-52、2A3-6、2A2-11能够明显增强荧光素酶的活性,说明它们可以特异靶向Oct4m RNA3’UTR。3.目标化合物对Oct4表达的影响Oct4蛋白的表达量是最终影响干细胞干性的决定因素。因此我们选取胚胎癌细胞P19作为靶细胞,检测目标化合物对Oct4表达的影响。Western blot检测结果表明,化合物2A1-20、2A2-52、2A3-6不能促进P19细胞中Oct4蛋白的表达,而A8-61、A8-66、2A2-11则可以增加P19细胞中Oct4蛋白的表达,提示这些化合物可能对干细胞的干性具有调控作用。4.目标化合物的无毒浓度分析为探究化合物A8-61、A8-66、2A2-11对P19细胞干性的影响,我们对不同浓度的三种化合物处理过的P19细胞进行细胞活力测定,确定IC10时化合物的浓度,并用低于IC10时的浓度研究化合物对P19细胞干性的影响。MTT检测结果表明,化合物A8-61、2A2-11在实验浓度范围内对P19细胞不具有毒性作用,化合物A8-61在40?g/m L时显着促进P19细胞增殖,化合物A8-66的IC值为7.644+0.182。5.目标化合物对干性因子Oct4、Sox2和Nanog表达的影响根据无毒浓度测定结果,我们选取了2.5?g/m L和5?g/m L作为研究三种化合物对P19细胞干性影响的实验浓度。WB检测结果显示,化合物A8-61、2A2-11在2.5?g/m L和5?g/m L时均能促进Oct4、Sox2和Nanog的表达,而化合物A8-66只在5?g/m L时促进Oct4、Sox2和Nanog的表达。6.目标化合物对P19细胞自我更新的影响上述结果表明,化合物A8-61、A8-66、2A2-11均能促进P19细胞多潜能因子的表达,是否三种化合物也能不同程度地促进P19细胞的自我更新能力呢?为阐明此问题,我们联合使用平板克隆培养方法和碱性磷酸酶染色法来探究P19细胞的自我更新能力。碱性磷酸酶染色结果显示,与对照组相比,化合物A8-61、2A2-11在2.5?g/m L和5?g/m L时均能促进P19细胞克隆的形成,而化合物A8-66只在5?g/m L时增强P19细胞的克隆形成能力。7.目标化合物维持P19细胞干性的信号通路研究为更好地了解化合物是如何促进P19细胞干性的,我们对化合物处理过的P19细胞进行干性相关信号通路研究。我们利用Western blot检测化合物处理P19细胞后干性相关通路PI3K/AKT、MEK/ERK关键因子的变化。结果显示,化合物A8-61在2.5?g/m L和5?g/m L均可促进AKT的磷酸化,提示2.5?g/m L和5?g/m L的A8-61可以通过激活PI3K/AKT信号通路来起到促进P19细胞干性的作用。化合物2A2-11可以促进PI3K和AKT的磷酸化,同时抑制ERK的磷酸化。提示2A2-11通过激活PI3K/AKT信号通路,抑制负向调控干性的MEK/ERK信号通路来促进干细胞干性。综上,本研究从627种上市药物中筛选出3种能够在转录后水平上促进Oct4表达并增强P19细胞干性的化合物,且初步探讨了其中二种化合物促进P19细胞干性维持的机制。本研究为体外大量扩增干细胞提供新的添加剂,同时为重编程诱导剂的开发奠定基础。
刘小刚,李甜,张舵[2]（2021）在《软骨组织工程中种子细胞选择的研究热点》文中研究指明背景:耳、鼻、喉、气管与关节等软骨缺损修复始终是临床治疗所面临的难点之一,软骨组织工程的出现,成为了软骨修复的热门发展方向,其中种子细胞是构建组织工程软骨的关键。目的:文章拟对不同类型的种子细胞特点及其在软骨组织工程中的应用、存在的问题等研究进展做一综述,为软骨组织工程从实验向临床进行转化带来新的思路。方法:第一作者通过检索中国知网、万方、PubMed、Scopus和Web of Science数据库的相关文献,以"种子细胞,组织工程,软骨细胞,干细胞,共培养"为中文检索词,以"seed cells,tissue engineering,chondrocytes,stem cells,co-culture"为英文检索词进行检索。最终选取符合标准的70篇文献进行综述。结果与结论:（1）目前软骨组织工程的实验研究取得了大量的成果,但关于种子细胞的选择问题仍是一大难题,软骨细胞、各种类型的间充质干细胞、胚胎干细胞、诱导多能干细胞等,均具有不同程度的优势,同时也面临着不同的挑战;（2）各种种子细胞的发现、发展与应用均推动了软骨组织工程的进步,其中软骨细胞与干细胞共培养是目前比较热门且具有研究前景的种子细胞选择。
高逸君[3]（2021）在《华夏（中国）公司发展战略研究》文中指出随着近几年我国经济发展飞快、老龄化愈发严重以及医疗水平的高标准发展,干细胞产品逐渐进入普通人民生活中,目前许多国家都已经把干细胞研究及应用列入了国家重点发展项目,我国也不例外,干细胞行业的发展潜力巨大。华夏（中国）公司作为一名干细胞行业的新兵,在新药研发方面具备一定优势,但由于起步较晚,暂时与一些已经在国内发展多年的企业相比综合竞争力还有所不足。但随着这几年国家政策开放,干细胞行业的发展迎来了极大的机遇,尤其干细胞临床医疗市场开放后,出现了空白市场。在这样的背景下,如何让华夏（中国）公司抓住机遇发展壮大,成为了华夏（中国）公司不得不认真思考的一个问题。本文运用PEST分析法、CPM矩阵、波特五力模型等工具对华夏（中国）公司所处的外部环境进行分析;通过对公司企业资源、企业能力、企业经营现状等进行分析确认公司目前的内部环境;最终在上面分析的基础上,确认了华夏（中国）公司在发展中将要面临的机会、威胁、优势与劣势。本文运用EFE矩阵对华夏（中国）公司的外部关键因素进行分析,将公司所面临的的外部机会与威胁进行量化处理;运用IFE矩阵对华夏（中国）公司的内部关键因素进行分析,将公司现存内部优势与劣势进行量化处理;运用SWOT对华夏（中国）公司在发展中所面临的机会与威胁、优势与劣势进行分析,从而为华夏（中国）公司制定出备选战略;最后运用QSPM矩阵对SWOT分析所得出的备选战略进行分析与选择,确定了华夏（中国）公司想要抓住机遇发展壮大可以采用“多元化增长战略”。为确保公司战略的顺利落地,本文提出了产品种类多元化方案、技术开发多元化方案、市场营销多元化方案、融资多元化方案、寻求合作联盟方案等5个实施方案;提出了动态风险控制措施、平衡积分卡等2个战略实施控制办法;提出了品牌文化保障、人力资源保障、组织制度保障、财务资金保障等4个战略实施保障措施。通过以上措施的落地,将有助于华夏（中国）公司抓住发展的机遇。
黄小慧,黄凯琪,张琪,彭亮[4]（2021）在《我国干细胞临床研究管理现状及对策思考》文中研究表明近年来,干细胞治疗已经成为一个极具发展前景的前沿科学研究领域,其治疗方法的发展给患者及家属带来了极大的期望。然而,随着我国干细胞临床研究项目数量的不断增加,干细胞临床研究与应用中存在的伦理和安全问题日益突出,使我国监督管理部门和研究机构面临着前所未有的挑战。本文通过分析我国干细胞临床研究的管理现状和存在的问题,探讨加强干细胞临床研究监督和研究机构内部管理规范的措施,为有效推进我国干细胞临床研究的有序、规范发展提出相应对策。
祝振硕[5]（2020）在《OCT4/SOX2与组蛋白去甲基化酶复合体KDM3A/3B协同调控猪多能干细胞自我更新的机制》文中指出猪既是一种在我国畜牧业生产中占有极大比重的重要经济动物,同时还是生物医学中常用的理想医学模型。然而猪多能干细胞（pluripotent stem cells,PSCs）的建系仍未完全成功,并且对其多能调控机制的了解尚不清楚。因此,深入研究猪多能干细胞的多能调控机制,将为猪多能干细胞的建系提供理论基础。H3K9甲基化修饰是重要的表观抑制标记,在小鼠上的研究表明其是重编程过程中重要的表观障碍。而组蛋白去甲基化酶KDM3A和KDM3B可通过羟基化作用去除H3K9me1/2来维持干细胞的自我更新能力。因此,研究两者在猪多能干细胞中的功能机制,将更深入了解H3K9甲基化对多能干细胞的调控方式,并有利于解决当前猪内源多能调控网络激活不完全的问题。在本研究中,我们以实验室已建立的以药物介导的外源基因表达的猪诱导性多能干细胞为实验材料,分析了H3K9甲基化修饰状态转换对其自我更新能力的影响,并揭示了以KDM3A/KDM3B/OCT4/SOX2为核心的H3K9去甲基化调控机制。实验结果如下:1.全基因组水平的H3K9的低甲基化状态对于猪i PSCs多能性的维持至关重要。本研究以DOX-i PSCs为研究对象,通过撤去DOX及LIF、b FGF、CHIR99021、SB431542,使i PSCs逐渐丧失多能态。研究发现猪i PSCs在该培养条件下,逐步丧失克隆形态且AP染色呈现阴性。外源多能基因已完全沉默,且内源多能基因OCT4、SOX2、LIN28A、NANOG表达量显着下调。此外,在这一分化进程中细胞整体的H3K9me1/2/3水平显着升高,而H3K4 me1/2/3的整体水平显着下降。这些结果表明H3K9甲基化修饰与猪多能干细胞多能性维持紧密相关。2.饲养层细胞与外源多能基因协同维持i PSCs整体H3K9低甲基化状态。我们进行了一系列的体系筛选,结果表明当撤去饲养层细胞（Feeder free,F-）时,i PSCs整体H3K9甲基化水平升高。进一步分析显示在无饲养层体系下,不添加DOX（Feeder and DOX free,FD-）会使i PSCs的H3K9甲基化水平进一步升高。此外,核心多能基因（OCT4/SOX2）整体蛋白水平也显着下降,同时细胞表达外胚层与中胚层的分化标记。EDU染色试验与Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测表明,细胞增殖能力快速下降且出现凋亡现象。转录组测序分析表明Feeder通过促进SOX家族的基因转录来维持猪i PSCs多能性。以上结果表明Feeder可能通过降低猪i PSCs中多能性相关基因区域的H3K9甲基化修饰,进而激活多能基因的表达,维持多能性。并且由DOX所控制的核心转录因子也可能参与了这一调控过程。3.猪i PSCs多能性丧失过程中,H3K9甲基化阻碍关键多能转录因子与其下游靶基因的互作。对正常培养的与FD-处理下的DOX-i PSCs进行H3K9me2/3的Ch IP-seq分析,结果表明整体H3K9甲基化丰度在FD-处理中显着升高。进一步Motif分析显示在FD-特异的H3K9me2区域富集出OCT4、SOX2、ESRRB等多能转录因子的结合模序,而正常培养条件下特异的甲基化区域富集出c-Jun、ATY13等体细胞特异基因结合模序。进一步将Ch IP数据与转录组测序数据联合分析显示,H3K9甲基化不但参与了分化进程中多能基因的沉默进程,同时在多能态下,也参与了体细胞相关基因的沉默。这些试验结果表明核心多能转录因子激活下游基因进程中,多能性相关基因区域的H3K9去甲基化是必要的。4.组蛋白去甲基化酶复合体KDM3A/KDM3B与核心转录因子OCT4/SOX2形成转录驱动复合物维持干细胞多能态。我们在DOX-i PSCs中进行了KDM3A与KDM3B的干扰试验,结果表明两者在H3K9去甲基化作用上存在功能互补现象,只有同时下调两者表达,猪i PSCs的H3K9me2/me3水平才会显着上升,细胞增殖也受到严重抑制并发生凋亡现象,AP染色呈现阴性。此外,过表达试验显示两者均可以显着降低细胞整体的H3K9甲基化水平,但两者之间存在一些表型差异。过表达KDM3A有效的提升了细胞的增殖与抗凋亡能力并促进了多能相关基因的表达,但过表达KDM3B却轻微抑制了细胞的增殖能力且对多能性无显着影响。为进一步解析多能转录因子与H3K9去甲基化作用的关系,我们首先通过单因子回补试验证明了DOX-i PSCs的维持主要依赖于OCT4与SOX2的足量表达。Ch IP-seq分析显示两者共同作用于基因间区与内含子区域的增强子激活多能性相关基因与通路维持多能态,但OCT4/SOX2并未直接调控KDM3A与KDM3B的表达。将H3K9me2/3与OCT4/SOX2的Ch IP-seq进行联合分析,发现在FD-处理后大约20%的OCT4/SOX2的结合区域发生了H3K9me2。对KDM3A与KDM3B使用免疫共沉淀联用质谱分析技术（Immunoprecipitation-Mass Spectrometry,IP-MS）来鉴定并分析两者的关联蛋白。结果表明两者之间存在直接的相互作用,进一步分析发现KDM3A与KDM3B的互作蛋白分别包含有SOX2与OCT4,且富集出大量染色质重塑蛋白,如HMG家族的HMGB2、HMGA1等。这些证据表明OCT4/SOX2与组蛋白去甲基化酶复合物形成一个转录驱动复合物定向激活多能相关基因的表达。综上所述,本研究揭示了以KDM3A和KDM3B为核心的H3K9去甲基化作用在多能性维持中的重要作用,发现了组蛋白去甲基化酶通过形成蛋白复合体的形式来发挥转录激活作用。此外,我们还证明了组蛋白去甲基化的定向作用是通过与多能性转录因子的结合来实现的,这一转录激活机制不仅为猪多能干细胞的建系工作提供了理论基础,而且丰富了人类对于表观遗传激活机制领域的理解。
杨桃[6]（2020）在《人胆囊上皮干性细胞体外诱导为胰腺β样细胞的研究》文中认为糖尿病是以慢性高血糖为特征的代谢性疾病,其发病率逐年上升,日益成为威胁人类健康的重大公共卫生问题。以胰岛移植为代表的β细胞替代治疗在糖尿病治疗方面显示出了巨大的应用前景,但是供体的缺乏限制了其在临床上的大规模运用。获得足够数量的细胞是使其走向临床大规模运用的重要前提,而以多能干细胞分化为胰岛β样细胞的技术路径又存在致瘤的安全风险。寻找其他合适的干/前体细胞可能是解决这些问题的较好选择。研究显示,胆囊上皮存在具有胰腺前体细胞特性的干性细胞,而且这些干性细胞具有向胰岛β细胞方向分化的可能性。然而,现有的细胞分离和培养方法所能获得的干性细胞在数量上都是非常少的,这在很大程度上限制了该领域的研究进展,而且也在很大程度上“朦胧”了以胆囊上皮干性细胞制备胰岛β样细胞的科学设想在转化医学中的潜在意义。为了突破基于胆囊上皮干性细胞向胰岛β样细胞诱导分化体系中的“诱导起始细胞数量有限”这一瓶颈因素,本课题旨在深入认识胆囊与胰腺相互联系的基础上,寻找新的“诱导起始细胞”,并在此基础上发展新的、更为理想的诱导体系,为糖尿病的β细胞替代治疗提供新的思路。为了实现这一目标,本课题从以下几个方面开展了研究:1)探索胆囊与胰腺相互联系:分析以胰十二指肠同源盒1（pancreas duodenal homebox-1,PDX1）、性别决定区框17（sex determining region Y-Box 17,SOX17）、性别决定区框9（sex determining region Y-Box 9,SOX9）和叉头盒蛋白A2（forkhead box protein A2,FOXA2）为代表的胰腺前体细胞特征,以及分别以胰岛素和胰腺淀粉酶为代表的胰腺内、外分泌特征在人原位胆囊上皮的表达情况;2)探索三维培养对于扩增胆囊上皮干性细胞的能力:在无菌条件下,刮取人正常胆囊上皮细胞,包埋入基质胶（matrigel）组成的三维环境中,添加表皮生长因子（epidermal growth factor）、成纤维细胞生成因子10（fibroblast growth factor 10）以及R-脊椎蛋白1（roof plate-specific spondin 1）等生长因子进行培养,评价三维培养扩增胆囊上皮干性细胞的能力;3)探索三维培养胆囊上皮细胞获得的球形克隆的细胞来源:对球形克隆以上皮标志物上皮细胞粘附分子（epithelial cell adhesion molecule,Ep CAM）和细胞角蛋白19（cytokeratin 19）,极性标志物黏蛋白-1（mucin-1）和层黏连蛋白α1（lamininα1）等进行免疫荧光染色和流式分析鉴定,确定球形克隆的细胞起源;4)探索球形克隆细胞干性特征:以包括PDX1、SOX17、FOXA2和SOX9在内的多种胰腺前体细胞标志对球形克隆进行鉴定,了解球形克隆细胞干性表达和分布情况;5)探索球形克隆细胞向胰岛β细胞方向分化的化学诱导方法:基于已有关于胰岛β细胞“胰腺前体细胞—胰腺内分泌前体细胞—胰岛β细胞”发育进程中不同阶段分子表型的认识,将候选的小分子化合物分为对应的三组,分别以PDX1、神经元素3（neurogenin-3,NGN3）和胰岛素的表达高低作为小分子化合物诱导能力的评价指标,筛选出有效的针对不同发育阶段的小分子化合物的组合,为基于球形克隆细胞为“起始细胞”的胰向分化体系的建立准备条件。本课题的研究实现了对胆囊上皮干性细胞基本特性的认识,发现这些干性细胞是比较理想的糖尿病β细胞替代治疗的诱导起始细胞,同时,建立了一个全新的胰向分化的化学诱导体系。在这些进展中,主要的发现有:1)胆囊与胰腺存在紧密的生物学联系,胆囊明显表达胰腺相关特征。在胰腺前体细胞标志物表达方面,胆囊上皮有差异地表达以PDX1、SOX17、FOXA2和SOX9为代表的胰腺前体细胞标志物,且这些标志物在胆囊颈部表达较高,而在胆囊底部表达较少或无表达。而在胰腺内、外分泌相关特征表达方面,胆囊颈部和底部均未见明显胰岛素表达,淀粉酶则见于胆囊底部,胆囊颈部未见明显表达;2)三维培养体系能够支持胆囊上皮细胞生长,并形成大量由较大核质比的单层细胞组成的具有中空结构的球形克隆,这些克隆可以连续传代培养10代以上。而且,三维培养能够获得数量可观的子代细胞,经由连续4周的传代培养可以将细胞数量由起始的104数量级提升到108数量级;3)球形克隆细胞均表达典型的上皮细胞标志,如Ep CAM和CK19,而以Ep CAM为标志进行流式分析,细胞阳性率为99.98%,表明球形克隆仅来源于胆囊上皮成分。同时,球形克隆细胞呈现极性生长方式,具有明显的顶-基底极性,细胞在朝向克隆中心空腔的一面表达顶端极性标志黏蛋白-1（mucin-1）和蛋白激酶C家族ζ异型体（protein kinase Cζ）,而在与基质胶接触的基底面表达层黏连蛋白α1（lamininα1）;4)球形克隆细胞分别经RT-PCR在m RNA水平和免疫荧光染色在蛋白水平进行鉴定,这些细胞除表达胰腺前体细胞标志PDX1、SOX17、SOX9和FOXA2外,还表达其他常见的干性标志物,如LGR5、CD133等。另外,在以经典的胰腺干细胞标志乙醛脱氢酶1（acetaldehyde dehydrogenase 1）催化无色荧光底物发光的荧光示踪实验中,绿色荧光均匀分布在整个克隆中,显示出干性细胞标志在球形克隆分布的均一性;5)分别以胰腺前体细胞标志PDX1,胰腺内分泌前体细胞NGN3和胰岛β细胞特有标志胰岛素的表达为评价指标,筛选出了PDX1诱导剂BRD7552、Notch信号通路抑制剂DBZ和以及甲状腺素T3的小分子化合物组合。以该化合物组合处理球形克隆,在m RNA水平上经q PCR验证,与未分化细胞相比,诱导分化后的细胞主要的胰岛β细胞标志的表达均有明显升高:PDX1升高了47倍,同源盒蛋白NKX6.1（NK homeobox factor 6.1）升高了56倍,神经源分化因子1（neuronal differentiation 1）升高了41倍,胰腺内分泌前体标志NGN3升高了139倍,胰岛素升高了185倍。这些结果也在蛋白层面经免疫荧光染色得到了证实。综上所述,本课题的研究证实了人消化系统内的胆囊与胰腺的生物学背景之间存在一种潜在的联系,胆囊上皮干性细胞具有一定相似于胰腺前体细胞的基本特性,是比较理想的糖尿病β细胞替代治疗的诱导起始细胞,而且,胆囊似乎可以视为胰腺前体细胞的“储备池”;证明了体外三维培养可以支持胆囊上皮干性细胞的生长,并能扩增出足够数量的具有胰腺前体细胞特征的胆囊上皮干性细胞;以这种细胞作为胰向诱导分化的起始细胞,建立了基于“PDX1诱导剂BRD7552、Notch信号通路抑制剂DBZ和甲状腺素T3”小分子化合物组合的新的、有效的胰向诱导分化体系。这些结果的取得,在一定程度上明了了胆囊上皮干性细胞潜在的应用前景,也为临床糖尿病的β细胞替代治疗提供了新的思路。
卢琴[7]（2020）在《孤雌生殖人类胚胎干细胞技术的专利适格性研究》文中认为传统人类胚胎干细胞（HESC）技术不可避免需要破坏人胚胎才能获取HESC。随着干细胞技术的发展,开始出现回避伦理争议的新技术。其中,孤雌生殖HESC技术通过孤雌激活人卵母细胞,无需精子参与就能形成孤雌囊胚,从中获取HESC。大多数国家认为该技术回避了传统技术破坏胚胎的伦理争议,并且具有重大的医学价值。随着科学和伦理的发展变化,2019年11月我国新修正的《专利审查指南》放宽了HESC技术的专利审查标准,但仅仅规定了“利用未经体内发育的受精14天以内的人胚胎”获取HESC的相关发明不违背社会公德,可以授予专利。却未提及孤雌生殖HESC技术在我国能否具备专利适格性的问题。因此,本文将对该新技术的专利适格性问题进行研究。首先,介绍孤雌生殖HESC技术相比其他技术的优势。分析2016年我国知识产权局判定孤雌囊胚属于人胚胎,孤雌生殖HESC技术违背社会公德,因而不具备专利适格性而引发的争议案例。指出2019年《专利审查指南》修正后依然未能解决争议问题。其次,通过分析传统HESC技术与孤雌生殖HESC技术专利适格性审查中具有代表性的司法案例,梳理新旧技术发展的脉络,考察干细胞技术发达的美、欧、中、澳等国家对新旧两类技术的专利适格性认定,同时从传统技术的专利审查中获取对新技术有益的借鉴经验。再次,从我国利益平衡、伦理道德、干细胞产业政策导向和产业发展需要等方面出发,为论证我国应当授予孤雌生殖HESC技术专利权保护的正当性和必要性提供依据。最后,得出孤雌生殖HESC技术在我国具备专利适格性的结论。我国对该新技术的专利审查经验尚不成熟。笔者结合我国的实际情况,以前文作为基础和铺垫,为我国《专利审查指南》提供相应的完善建议。
教育部[8]（2020）在《教育部关于印发普通高中课程方案和语文等学科课程标准（2017年版2020年修订）的通知》文中提出教材[2020]3号各省、自治区、直辖市教育厅（教委）,新疆生产建设兵团教育局:为深入贯彻党的十九届四中全会精神和全国教育大会精神,落实立德树人根本任务,完善中小学课程体系,我部组织对普通高中课程方案和语文等学科课程标准（2017年版）进行了修订。普通高中课程方案以及思想政治、语文、
赵丽雅[9]（2020）在《科研自由的法律规制研究 ——基于当代科技发展的思考》文中研究表明科研自由作为一项宪法基本权利是指研究者自由选择科学的方式、方法进行科学研究,不断地发现、讨论、解决问题和发表科学研究成果的过程。科学有广义、狭义之分,本文基于当代科技发展的思考主要针对的是自然科学领域呈现的问题,所以此处对科学采取狭义的理解,即狭义的科学是指用自然法则研究自然世界的自然科学,本文便对该领域科研自由的法律规制问题进行探讨。当前科技的发展给人类社会带来极大便利的同时也带来了巨大的挑战,科研自由的滥用在一定程度上侵害了生命健康与人性尊严,损害了社会公共利益,对人类生存和社会稳定造成了破坏,也与其他宪法基本权利发生了冲突。基于此,有必要对科研自由进行法律规制。但当前我国对科研自由的法律规制还面临着许多的问题:理论上,对科研自由进行法律规制的价值基础——生命与人性尊严,不但受到自身生命保护起点难以达成共识和人性尊严具有模糊性的内部冲击,还受到来自功利主义和自由主义的外部冲击。在法律实践上,有诸多立法纰漏且立法体系缺失,司法实践民事赔偿和刑事定罪缺乏明确的法律依据,行政机关对其也并未形成有效的监督。面对以上问题,本文在对域外国际组织和他国关于科研自由法律规制经验进行考察和借鉴的基础上,进一步对上述问题加以解决。首先,确立生命与人性尊严的价值优先地位;进一步强化我国科研自由法律规制立法的专门化和体系化建构,从立法的价值、原则、主体、过程、内容和合宪性审查等方面加以考量;完善司法民事赔偿和刑罚制度,对民事赔偿制度予以明确,对刑罚规制加以确立;提高行政机关审查和监督的有效性,要强化卫生行政部门行政许可下的个案审批制度,加大对违法科研行为的责任追究并加强对伦理委员会的监管。从而达到使科研自由有序行使,科技发展真正造福人类的目的。
吴爽[10]（2020）在《TGF-β信号通路对猪类胚胎干细胞PeNK6多能性的影响》文中认为胚胎干细胞是一类来源于早期胚胎,在体外培养条件下具有自我更新和多向分化潜能的细胞。无限增殖和分化形成成体各类组织细胞的能力使其受到再生医学等领域的广泛关注。1981年Evans和Martin等人从小鼠胚胎中成功分离第一株小鼠胚胎干细胞,多年之后人、猴子和大鼠等不同物种的胚胎干细胞也相继成功建立。猪是一种重要的家畜,其在生理、解剖结构和免疫等方面与人有很大的相似性,建立猪胚胎干细胞也受到了广泛关注。过去的30多年间虽然有很多猪胚胎干细胞系被建立,但以生殖系嵌合发育能力为判定标准进行衡量,那么猪胚胎干细胞建系工作目前仍未成功。PeNK6细胞系是本实验室建立的猪早期胚胎来源的多能干细胞系,该细胞有着类似人胚胎干细胞的特征,呈扁平样克隆、表达核心转录因子,体内体外分化实验均可以获得典型的三胚层组织。Pe NK6细胞系中多能性相关信号通路如LIF/STAT3、FGF、WNT和PI3K等的激活情况在实验室前期工作中已被阐明,但关于TGF-β信号的激活情况和作用却尚未得到充分的研究。TGF-β信号通路在小鼠和人胚胎干细胞多能性维持中发挥着重要的作用,但在大型家畜胚胎来源干细胞中的作用仍存在争议。在猪早期胚胎来源干细胞中系统性地阐明TGF-β信号通路与多能性调控关系的报道很少,因此有必要深入地研究猪多能性干细胞中TGF-β信号通路在多能性调控中的作用。在本研究中我们通过单细胞测序和免疫蛋白印迹方法证明了TGF-β信号通路在Pe NK6细胞系中呈激活状态。对猪早期胚胎不同发育阶段RNA-Seq数据的分析发现,猪早期囊胚内细胞团中TGF-β信号通路活性较低,而发育至晚期囊胚其活性则逐渐上调。据此,我们推测在Pe NK6中抑制TGF-β信号可能会对Pe NK6细胞系的多能性有积极影响。因此本次研究通过在Pe NK6细胞系的培养体系（KO培养液）中添加小分子抑制剂SB431542和A83-01抑制TGF-β信号通路活性,检测Pe NK6细胞系的各类生物学指标的变化,从而评判TGF-β信号通路对Pe NK6细胞系生物学特征的影响。研究结果表明,TGF-β信号被抑制后,PeNK6的核心转录因子SOX2和初始态多能性相关因子KLF4,KLF5和TFCP2L1显着上调。同时激发态多能性因子DNMT3B显着下调,这表明抑制TGF-β信号通路后Pe NK6的多能性特征发生改变,表现为部分多能性基因表达模式由激发态转变为类似初始态。同时,抑制TGF-β信号通路对PeNK6细胞系的分化能力也产生影响。抑制TGF-β信号通路后,Pe NK6细胞系的拟胚体形成能力增强;拟胚体（Embryoid body,EB）尺寸和直径均显着提高。在相同的诱导分化条件下,抑制TGF-β信号通路条件下形成的EB中三胚层标记物表达水平整体低于对照组。以上结果表明,抑制TGF-β信号通路能够改善分化条件下猪类胚胎干细胞拟胚体的形成能力。另外,本次研究在TGF-β信号通路抑制培养体系KO+SB/KO+A中,利用5.5天的猪体外受精胚胎建立了新的多能性干细胞系。该细胞系在多能性因子表达模式上与Pe NK6细胞系在TGF-β通路抑制后具有较高的相似性,体外分化形成EB的能力优于Pe NK6,这进一步证实了抑制TGF-β信号通路对猪胚胎干细胞多能性具有积极影响。综上所述,本次研究结果表明,TGF-β信号通路在猪多能性干细胞中具有重要的生物学作用,抑制该信号通路对猪多能性干细胞的多能性相关特征具有正向影响。本次研究为深入理解TGF-β信号通路在猪胚胎干细胞多能性调控中的作用提供了详实的实验证据,对于建立具有生殖系嵌合发育能力的猪初始态胚胎干细胞系具有重要的参考价值。
二、干细胞研究面临的问题（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、干细胞研究面临的问题（论文提纲范文）
（1）促进Oct4表达的化合物筛选及其维持干细胞干性作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一部分 文献综述 |
| 一、干细胞的应用 |
| (一)疾病的治疗 |
| (二)病理机制的探讨 |
| (三)修复受损组织和器官 |
| 二、干细胞应用面临的问题 |
| (一)干细胞的致瘤性 |
| (二)干细胞注射途径 |
| (三)干细胞的数量与质量问题 |
| 三、干细胞的体外培养方法 |
| 四、与维持干细胞干性相关的基因 |
| 五、与干细胞干性相关的信号通路 |
| (一)JAK/STAT信号通路 |
| (二)PI3K/AKT信号通路 |
| (三)MEK/ERK信号通路 |
| 六、Oct4 基因介绍 |
| (一)Oct4 基因简介 |
| (二)Oct4 的表达调控 |
| (三)Oct4 的生物学作用 |
| (四)Oct4 的表达与肿瘤耐药性 |
| 七、本研究的目的及意义 |
| 第二部分 材料和方法 |
| 一、实验材料 |
| (一)仪器与设备 |
| (二)试剂 |
| 二、实验方法 |
| (一)细胞相关试剂的配制方法 |
| (二)细胞培养方法 |
| (三)质粒转染方法 |
| (四)化合物筛选方法 |
| (五)荧光素酶活性检测相关试剂配制方法 |
| (六)荧光素酶活性检测方法 |
| (七) β-半乳糖苷酶活性测定方法 |
| (八)数据处理方法 |
| (九)MTT 法检测细胞活力 |
| (十)提取细胞中蛋白质的方法 |
| (十一)免疫印迹分析相关试剂配制方法 |
| (十二)免疫印迹分析 |
| (十三)平板克隆方法 |
| (十四)碱性磷酸酶染色法 |
| 第三部分 实验结果 |
| 一、对Oct4 m RNA3’UTR具有调控作用的化合物的筛选 |
| (一)PEZX-MT01-Oct4 3’UTR报告载体活性验证 |
| (二)促进 Oct4 表达的化合物的初步筛选 |
| (三)促进 Oct4 表达的化合物的重复筛选 |
| 二、目标化合物对Oct4 表达的影响 |
| 三、目标化合物对 P19 细胞无毒浓度的测定 |
| 四、目标化合物对 P19 细胞中干性因子 Oct4、Sox2、Nanog 表达的影响 |
| 五、目标化合物对P19 细胞自我更新能力的影响 |
| 六、目标化合物维持 P19 细胞干性的信号通路研究 |
| 第四部分 讨论 |
| 第五部分 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（3）华夏（中国）公司发展战略研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 研究背景与意义 |
| 1.1.1 研究背景 |
| 1.1.2 研究意义 |
| 1.2 华夏(中国)公司简介 |
| 1.3 研究工具与方法 |
| 1.3.1 研究工具 |
| 1.3.2 研究方法 |
| 1.4 研究内容与研究思路 |
| 1.4.1 研究内容 |
| 1.4.2 研究思路 |
| 1.4.3 技术路线图 |
| 第二章 相关理论概述 |
| 2.1 战略管理相关理论 |
| 2.1.1 企业战略与企业战略管理的定义 |
| 2.1.2 企业战略管理的内涵 |
| 2.1.3 企业战略管理的框架 |
| 2.2 发展战略相关理论 |
| 2.2.1 发展战略的定义 |
| 2.2.2 五力模型 |
| 2.3 干细胞行业相关理论 |
| 2.3.1 干细胞 |
| 2.3.2 干细胞应用治疗分类 |
| 2.4 相关文献综述 |
| 第三章 华夏(中国)公司外部环境分析 |
| 3.1 宏观环境分析(PEST分析) |
| 3.1.1 政治环境分析(P) |
| 3.1.2 经济环境分析(E) |
| 3.1.3 社会文化环境分析(S) |
| 3.1.4 技术环境分析(T) |
| 3.2 行业与市场环境分析 |
| 3.2.1 干细胞行业总体分析 |
| 3.2.2 干细胞行业竞争结构分析(五力分析) |
| 3.2.3 干细胞行业市场供求分析 |
| 第四章 华夏(中国)公司内部环境分析 |
| 4.1 企业资源分析 |
| 4.1.1 有形资产分析 |
| 4.1.2 无形资产分析 |
| 4.1.3 人力资源分析 |
| 4.2 企业能力分析 |
| 4.2.1 营销服务能力分析 |
| 4.2.2 研发能力分析 |
| 4.2.3 组织管理能力分析 |
| 4.2.4 核心竞争力分析 |
| 4.3 企业经营现状分析 |
| 4.3.1 财务状况分析 |
| 4.3.2 组织结构状况分析 |
| 4.3.3 经营状况分析 |
| 4.4 企业文化分析 |
| 第五章 华夏(中国)公司战略制定与选择 |
| 5.1 华夏(中国)公司战略目标体系 |
| 5.1.1 公司使命 |
| 5.1.2 公司愿景 |
| 5.1.3 公司目标 |
| 5.2 华夏(中国)公司发展战略的制定 |
| 5.2.1 外部因素评价矩阵(EFE矩阵) |
| 5.2.2 内部因素评价矩阵(IFE矩阵) |
| 5.2.3 华夏(中国)公司发展战略SWOT分析 |
| 5.3 华夏(中国)公司发展战略的决策 |
| 5.3.1 华夏(中国)公司发展战略QSPM矩阵分析 |
| 5.3.2 华夏(中国)公司的战略选择 |
| 第六章 华夏(中国)公司战略实施与控制 |
| 6.1 战略实施模式的选择 |
| 6.1.1 华夏(中国)公司战略计划 |
| 6.1.2 战略实施模式 |
| 6.2 战略实施行动方案 |
| 6.2.1 落实产品种类多元化方案 |
| 6.2.2 制定市场营销多元化方案 |
| 6.2.3 实施技术开发多元化方案 |
| 6.2.4 融资多元化方案 |
| 6.2.5 寻求合作联盟方案 |
| 6.3 战略实施控制 |
| 6.3.1 制定公司战略应变计划 |
| 6.3.2 平衡计分卡 |
| 6.4 战略实施保障 |
| 6.4.1 品牌文化保障 |
| 6.4.2 人力资源保障 |
| 6.4.3 组织制度保障 |
| 6.4.4 财务资金保障 |
| 第七章 结论与展望 |
| 7.1 结论 |
| 7.2 展望 |
| 参考文献 |
| 附录A CPM矩阵专家问卷调查过程说明 |
| 附录B EFE矩阵分析过程说明 |
| 附录C IFE矩阵分析过程说明 |
| 附录D QSPM战略定量战略计划分析过程说明 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（4）我国干细胞临床研究管理现状及对策思考（论文提纲范文）
| 1 我国干细胞临床研究现状 |
| 1.1 我国干细胞临床研究相关政策 |
| 1.2 国际干细胞临床研究与应用的准则 |
| 2 干细胞临床研究监管体系 |
| 2.1 国家层面 |
| 2.2 机构层面 |
| 3 我国干细胞临床研究应用管理中存在的主要问题 |
| 3.1 国家干细胞临床研究管理规范的局限和不完善 |
| 3.2 机构内部制度亟待健全 |
| 3.3 干细胞临床研究风险分担机制的缺乏 |
| 4 加强我国干细胞临床研究管理的对策建议 |
| 4.1 明确职能部门责任,加强法律法规建设 |
| 4.2 健全机构内部机制,加强项目审查能力 |
| 4.3 建立补偿机制,切实保障受试者权益 |
| 4.4 开展干细胞临床研究法规培训,确保规范开展研究 |
（5）OCT4/SOX2与组蛋白去甲基化酶复合体KDM3A/3B协同调控猪多能干细胞自我更新的机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 主要符号对照表 |
| 文献综述 |
| 第一章 多能干细胞研究进展 |
| 1.1 多能干细胞的建立及分类 |
| 1.1.1 多能干细胞的概述 |
| 1.1.2 胚胎干细胞研究进展 |
| 1.1.3 细胞重编程的研究进展 |
| 1.1.3.1 诱导性多能干细胞的建立 |
| 1.1.3.2 猪诱导性多能干细胞的研究进展 |
| 1.2 多能干细胞的维持机制研究 |
| 1.2.1 多能性核心转录因子的研究进展 |
| 1.2.1.1核心转录因子Oct4 |
| 1.2.1.2核心转录因子Sox2 |
| 1.2.2 多能性调控通路 |
| 1.2.2.1 细胞因子维持多能性 |
| 1.2.2.2 小分子抑制剂维持多能性 |
| 1.2.2.2.1 Wnt信号通路与多能性维持 |
| 1.2.2.2.2 MAPK/Erk信号通路与多能性维持 |
| 1.2.2.2.3 TGFβ/SMAD信号通路抑制剂SB431542 |
| 1.2.2.3 MEF饲养层细胞 |
| 第二章 H3K9甲基化修饰的研究进展 |
| 2.1 细胞重编程过程中的表观遗传调控 |
| 2.1.1 表观遗传学 |
| 2.1.2 DNA甲基化修饰 |
| 2.1.2 组蛋白共价修饰 |
| 2.1.3.1 组蛋白乙酰化修饰 |
| 2.1.3.2 组蛋白甲基化修饰 |
| 2.2 H3K9甲基化及功能 |
| 2.3 多能态建立过程中H3K9甲基化的作用 |
| 2.3 组蛋白去甲基化酶的研究进展 |
| 2.4 组蛋白去甲基化酶KDM3A与 KDM3B的研究进展 |
| 2.5 多能态建立过程中组蛋白去甲基化酶KDM3A与 KDM3B的作用 |
| 2.6 小结与展望 |
| 试验研究 |
| 第三章 猪iPSCs多能态转换过程中H3K9 甲基化的变化规律 |
| 3.1 材料和方法 |
| 3.1.1 试验材料 |
| 3.1.2 试验方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 撤去DOX及多能培养体系对猪DOX-i PSCs的影响 |
| 3.2.2 piPSCs多能性丧失过程中H3K9与H3K4 甲基化修饰水平的变化 |
| 3.2.3 筛选影响H3K9甲基化的主要因素 |
| 3.2.4 F-与FD-处理下pi PSCs表型检测 |
| 3.2.5 F-与FD-处理下pi PSCs多能基因检测 |
| 3.2.6 F-与FD-处理下pi PSCs组蛋白甲基化修饰水平的变化 |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 小结 |
| 第四章 Feeder与外源基因协同维持猪i PSCs多能性机制解析 |
| 4.1 材料和方法 |
| 4.1.1 试验材料 |
| 4.1.2 试验方法 |
| 4.2 结果 |
| 4.2.1 转录组测序揭示F-与FD-组的基因表达变化 |
| 4.2.2 功能富集分析揭示整个分化过程中转录变化 |
| 4.2.3 H3K9me2/me3 在基因组上的分布情况 |
| 4.2.4 Ch IP-seq分析分化过程中H3K9me2和H3K9me3 的变化情况 |
| 4.2.5 多能性丧失过程中H3K9 甲基化motif变化分析。 |
| 4.2.6 H3K9甲基化与转录组联合分析揭示其作用机理 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 第五章 KDM3A与 KDMB协同调节H3K9 甲基化修饰维持猪多能性调控网络 |
| 5.1 材料和方法 |
| 5.1.1 试验材料与耗材 |
| 5.1.2 试验方法 |
| 5.2 结果 |
| 5.2.1 KDM3A与 KDM3B共干扰导致猪i PSCs丧失多能性 |
| 5.2.2 猪i PSCs中共干扰KDM3A与 KDM3B后的转录组变化 |
| 5.2.2 干扰KDM3A与 KDM3B抑制PI3K-AKT信号通路影响多能性 |
| 5.2.4 KDM3A与 KDM3B过表达对猪i PSCs多能性的影响 |
| 5.2.5 转录组测序揭示KDM3A与 KDM3B过表达的分子作用机制 |
| 5.2.6 KDM3A过表达可抑制F-处理下引发的细胞分化 |
| 5.3 讨论 |
| 5.4 小结 |
| 第六章 转录因子OCT4与SOX2 是维持猪i PSCs多能性调控网络的核心 |
| 6.1 材料和方法 |
| 6.1.1 试验材料与耗材 |
| 6.1.2 试验方法 |
| 6.2 结果 |
| 6.2.1 不同DOX浓度下猪i PSCs的表型变化 |
| 6.2.2 筛选维持猪iPSCs多能性的关键转录因子 |
| 6.2.3 无DOX下过表达OCT4与SOX2 维持猪i PSCs多能性 |
| 6.2.4 Ch IP-seq揭示OCT4与SOX2 维持猪i PSCs多能性机理 |
| 6.2.5 转录因子之间调控网络建立 |
| 6.3 讨论 |
| 6.4 小结 |
| 第七章 OCT4/SOX2 与组蛋白去甲基化酶复合体KDM3A/3B互作维持猪i PSCs多能性 |
| 7.1 材料和方法 |
| 7.1.1 试验材料与耗材 |
| 7.1.2 试验方法 |
| 7.2 结果 |
| 7.2.1 OCT4与SOX2 并未直接调控KDM3A与KDM3B的表达 |
| 7.2.2 H3K9去甲基化作用与核心转录因子之间的协同关系 |
| 7.2.3 转录调控水平揭示KDM3A与 OCT4/SOX2 之间的协作关系 |
| 7.2.4 IP-MS揭示KDM3A与 KDM3B的蛋白互作网络 |
| 7.3 讨论 |
| 7.4 小结 |
| 结论 |
| 论文创新点及下一步研究方向 |
| 创新点 |
| 下一步研究方向 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（6）人胆囊上皮干性细胞体外诱导为胰腺β样细胞的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 一、实验材料 |
| 二、实验方法 |
| 实验结果 |
| 一、人胆囊组织上皮细胞分子特性的鉴定 |
| 二、人胆囊上皮细胞体外三维培养体系的建立 |
| 三、培养的球形克隆上皮特性及极性分析 |
| 四、球形克隆胰腺前体细胞相关特性分析 |
| 五、球形克隆细胞向胰岛β细胞方向的诱导分化 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 综述 类器官的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表论文 |
| 致谢 |
（7）孤雌生殖人类胚胎干细胞技术的专利适格性研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 绪论 |
| 第一节 选题背景及意义 |
| 第二节 文献综述 |
| 一、国内研究现状 |
| 二、国外研究现状 |
| 第三节 研究内容及研究方法 |
| 一、研究内容 |
| 二、研究方法 |
| 第四节 创新点 |
| 第二章 我国孤雌生殖HESC技术的专利审查及现存问题 |
| 第一节 孤雌生殖HESC技术与传统技术的比较 |
| 一、孤雌生殖HESC技术的相关概念 |
| 二、HESC的获取来源 |
| 三、孤雌生殖HESC技术的优势 |
| 四、孤雌生殖HESC技术在我国的专利授权情况 |
| 第二节 《专利审查指南》修改前对孤雌生殖HESC技术的专利适格性认定 |
| 一、湖南光琇公司孤雌生殖HESC技术的专利复审案 |
| 二、专利适格性判断的法律依据 |
| 第三节 《专利审查指南》修改后依然存在的问题 |
| 一、新修正条款 |
| 二、最大的亮点 |
| 三、现存的问题 |
| 本章小结 |
| 第三章 传统与孤雌生殖HESC技术的专利适格性争议 |
| 第一节 干细胞领域专利适格性的判断模式 |
| 一、欧洲模式 |
| 二、美国模式 |
| 第二节 传统HESC技术的专利适格性争议 |
| 一、传统HESC技术的伦理争议 |
| 二、WARF案发明在美、欧、中的专利适格性认定 |
| 三、城户常雄案发明在美、欧、中的专利适格性认定 |
| 第三节 孤雌生殖HESC技术的专利适格性争议 |
| 一、孤雌生殖HESC技术的伦理争议 |
| 二、欧洲认定孤雌生殖HESC技术具有专利适格性 |
| 三、澳大利亚认定孤雌生殖HESC技术具有专利适格性 |
| 四、孤雌生殖HESC技术在其他国家的专利授权情况 |
| 本章小结 |
| 第四章 我国授予孤雌生殖HESC技术专利权保护的正当性与必要性 |
| 第一节 授予专利权保护的正当性 |
| 一、符合利益平衡要求 |
| 二、符合中国伦理指南的指导原则 |
| 三、符合不断变化的社会公德内涵 |
| 第二节 授予专利权保护的必要性 |
| 一、干细胞产业的政策导向 |
| 二、干细胞产业发展的需要 |
| 本章小结 |
| 第五章 对我国孤雌生殖HESC技术专利审查制度的完善建议 |
| 第一节 孤雌生殖HESC技术在我国具有专利适格性 |
| 一、不属于科学发现 |
| 二、不属于疾病的诊断和治疗方法 |
| 三、HESC及其制备方法不属于不可专利的主题 |
| 四、不属于人胚胎的工商业目的的运用 |
| 第二节 对《专利审查指南》的完善建议 |
| 一、在专利审查中将14天研究期限适用于孤雌囊胚 |
| 二、允许以现存孤雌干细胞系进行研究的成果可专利 |
| 三、对具体条款的修改建议 |
| 本章小结 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 附件 |
（9）科研自由的法律规制研究 ——基于当代科技发展的思考（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 研究目的及意义 |
| 1.1.1 研究目的 |
| 1.1.2 研究意义 |
| 1.2 国内外研究现状 |
| 1.2.1 国内研究现状 |
| 1.2.2 国外研究现状 |
| 1.2.3 研究评述 |
| 1.3 研究方法及创新点 |
| 1.3.1 研究方法 |
| 1.3.2 创新点 |
| 第二章 科研自由及其法律规制概述 |
| 2.1 科研自由概述 |
| 2.1.1 科研自由的内涵 |
| 2.1.2 作为宪法基本权利的科研自由 |
| 2.2 科研自由法律规制概述 |
| 2.2.1 科研自由法律规制的含义 |
| 2.2.2 科研自由法律规制的类型 |
| 2.3 科研自由法律规制的正当性 |
| 2.3.1 维护人性尊严 |
| 2.3.2 维护公共利益 |
| 2.3.3 维护人类生存和社会稳定 |
| 2.3.4 平衡基本权利冲突的需要 |
| 第三章 科研自由法律规制面临的问题 |
| 3.1 价值基础面临的挑战 |
| 3.1.1 面临的内部冲击 |
| 3.1.2 面临的外部冲击 |
| 3.2 法律规制的实践问题 |
| 3.2.1 立法纰漏及立法体系的缺失 |
| 3.2.2 司法实践缺乏明确法律依据 |
| 3.2.3 行政机关未形成有效的监督 |
| 第四章 科研自由法律规制域外经验的考察与借鉴 |
| 4.1 域外经验的考察 |
| 4.1.1 国际组织关于科研自由的法律规制 |
| 4.1.2 其他国家关于科研自由的法律规制 |
| 4.2 域外经验的借鉴 |
| 第五章 科研自由法律规制的路径探讨 |
| 5.1 价值基础的挑战应对 |
| 5.1.1 内部冲击的平衡 |
| 5.1.2 外部冲击的解决 |
| 5.2 法律规制的实践构想 |
| 5.2.1 强化立法专门化和体系化建构 |
| 5.2.2 完善司法民事赔偿和刑罚制度 |
| 5.2.3 提高行政审查和监督的有效性 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间取得的科研成果 |
（10）TGF-β信号通路对猪类胚胎干细胞PeNK6多能性的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| 英文摘要 |
| 1 前言 |
| 1.1 干细胞研究进展 |
| 1.1.1 干细胞的特征 |
| 1.1.2 干细胞的分类 |
| 1.1.3 多能性干细胞研究进展 |
| 1.2 猪胚胎干细胞研究概述 |
| 1.2.1 猪胚胎干细胞研究进展 |
| 1.2.2 猪胚胎干细胞研究面临的问题 |
| 1.3 TGF-β信号通路 |
| 1.3.1 TGF-β信号通路概述 |
| 1.3.2 TGF-β信号通路对胚胎干细胞多能性的影响 |
| 1.4 猪类胚胎干细胞PeNK6研究现状 |
| 1.5 本研究的目的意义 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 主要仪器设备 |
| 2.1.3 主要试剂及试剂盒 |
| 2.1.4 主要引物列表 |
| 2.1.5 常用试剂及配置 |
| 2.1.6 生物信息学分析软件 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 猪类胚胎干细胞的培养 |
| 2.2.2 猪类胚胎干细胞的多能性鉴定 |
| 2.2.3 转录组测序数据的获得与分析 |
| 2.2.4 统计分析 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 PeNK6细胞系的生物学特征 |
| 3.1.1 PeNK6细胞系的多能性特征 |
| 3.1.2 PeNK6细胞系中TGF-β信号通路呈激活状态 |
| 3.2 抑制TGF-β信号通路对PeNK6细胞系多能性的影响 |
| 3.2.1 TGF-β抑制剂A83-01 应用于PeNK6细胞系最佳浓度筛选 |
| 3.2.2 不同方案抑制TGF-β信号通路对PeNK6细胞系多能性特征的影响 |
| 3.3 在抑制TGF-β信号培养体系下建立猪类胚胎干细胞系及其生物学特征检测 |
| 3.4 Pe NK6+SB/+A/Pe WKSB细胞系中TGF-β信号通路状态分析 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 |
四、干细胞研究面临的问题（论文参考文献）
- [1]促进Oct4表达的化合物筛选及其维持干细胞干性作用研究[D]. 周彤. 东北师范大学, 2021(12)
- [2]软骨组织工程中种子细胞选择的研究热点[J]. 刘小刚,李甜,张舵. 中国组织工程研究, 2021(31)
- [3]华夏（中国）公司发展战略研究[D]. 高逸君. 兰州大学, 2021(02)
- [4]我国干细胞临床研究管理现状及对策思考[J]. 黄小慧,黄凯琪,张琪,彭亮. 现代医院管理, 2021(01)
- [5]OCT4/SOX2与组蛋白去甲基化酶复合体KDM3A/3B协同调控猪多能干细胞自我更新的机制[D]. 祝振硕. 西北农林科技大学, 2020
- [6]人胆囊上皮干性细胞体外诱导为胰腺β样细胞的研究[D]. 杨桃. 中国人民解放军海军军医大学, 2020(02)
- [7]孤雌生殖人类胚胎干细胞技术的专利适格性研究[D]. 卢琴. 华南理工大学, 2020(07)
- [8]教育部关于印发普通高中课程方案和语文等学科课程标准（2017年版2020年修订）的通知[J]. 教育部. 中华人民共和国教育部公报, 2020(06)
- [9]科研自由的法律规制研究 ——基于当代科技发展的思考[D]. 赵丽雅. 河北大学, 2020(08)
- [10]TGF-β信号通路对猪类胚胎干细胞PeNK6多能性的影响[D]. 吴爽. 东北农业大学, 2020(04)