原代培养的乙酰胆碱能神经元的表型表达与在体不同（英文）

论文摘要

为了进一步了解原代培养神经元技术是否可以用于建立可靠的乙酰胆碱能神经元体外培养细胞模型,该实验检测了分别培养自E18胎鼠基底前脑(basal forebrain, BF)和海马(hippocampus,HIP)原代培养神经元中的乙酰胆碱能神经元的标志物,同时比较了离体培养细胞与在体在相同脑区中乙酰胆碱能标志物表达的差异。使用免疫标记荧光方法,检测了来自E18胎鼠的基底前脑脑区和海马脑区的离体原代培养神经元中在DIV 3和DIV 21时间点上表达Ch AT和p75NTR(两种常用的胆碱能神经元标记物)的神经元的数量,分析其占总神经元数量的比例,并与E18胎鼠和成年小鼠相同脑区的在体组织切片中的结果相比较。结果显示, Ch AT和p75NTR均在来自基底前脑和海马的培养神经元的DIV 3和DIV 21中高比例表达。然而,虽然在E18胎鼠和成年小鼠的基底前脑的组织切片中有Ch AT和p75NTR的表达,但是在同时期的海马组织切片中并无Ch AT的表达,并且来自基底前脑和海马脑区的培养神经元中表达乙酰胆碱能神经元标志物的神经元数量占总神经元数量比例与在体并不一致。这些结果显示,乙酰胆碱能标志物在离体原代培养和在体中的表达状况可能存在不同。根据实验结果推测,在体外应用原代培养方法培养乙酰胆碱能标志物免疫阳性神经元可能并不是乙酰胆碱能神经元。除了通过免疫组织化学方法,还需要更多的技术和方法来鉴定培养细胞中的乙酰胆碱能神经元。

论文目录

• 1 Methods
•   1.1 Animals
•   1.2 Neurons primary culture
•   1.3 Fixed tissue preparation,brain slices and cells immunostaining
•     1.3.1 Tissue preparation
•     1.3.2 Cultured cells
•     1.3.3 Immunostaining
•   1.4 Imaging
•   1.5 Data Analysis
• 2 Results
•   2.1 Cholinergic markers expressed both in BF and HIP primary culture neurons in DIV 3
•   2.2 Cholinergic markers expressed both in BF and HIP primary culture neurons in DIV 21
•   2.3 Expression of cholinergic markers in basalforebrain areas but not in hippocampus in E18fetus
•   2.4 Expression of cholinergic markers in basalforebrain areas but not in hippocampus in adult mice
• 3 Discussion
• 4 Conclusion

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 李一梅,王国祥,王云

关键词: 乙酰胆碱能神经元,基底前脑,海马,神经元原代培养

来源: 中国细胞生物学学报 2019年08期

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 复旦大学脑科学研究院

基金: supported by the National Natural Science Foundation of China(Grant No.31471027)~~

分类号: Q42

页码: 1543-1550

总页数: 8

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