蟾蜍灵论文_孔翠翠,李艳兰,宫鹏超,田昕

导读:本文包含了蟾蜍灵论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译,主要关键词:蟾蜍,肾小管,细胞,庆大霉素,干细胞,凋亡,胶质瘤。

蟾蜍灵论文文献综述

孔翠翠,李艳兰,宫鹏超,田昕[1](2019)在《蟾蜍灵诱导人宫颈癌C33A细胞自噬作用的机理研究》一文中研究指出目的:探讨蟾蜍灵诱导人宫颈癌C33A细胞自噬的作用。方法:不同浓度梯度的蟾蜍灵处理人宫颈癌C33A细胞,选用CCK-8法检测蟾蜍灵对人宫颈癌C33A细胞的杀伤作用。透射电镜观察给药后C33A细胞的自噬现象。流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)水平,蛋白免疫印迹法检测自噬LC3蛋白表达及相关信号通路JNK、p-JNK蛋白表达。结果:蟾蜍灵对人宫颈癌C33A细胞的生长抑制作用呈时间-剂量依赖性。蟾蜍灵给药后可诱导C33A细胞发生自噬,蛋白印迹实验结果表明LC3蛋白表达随药物浓度升高而增加。蟾蜍灵诱导C33A细胞自噬发生与其促ROS水平升高激活了JNK信号通路有关。结论:蟾蜍灵诱导C33A细胞自噬的机制可能与通过ROS/JNK通路促进细胞自噬有关,以此发挥其抗肿瘤的作用。(本文来源于《现代肿瘤医学》期刊2019年24期)

刘晓丹[2](2019)在《蟾蜍灵诱导叁阴性乳腺癌耐药细胞程序性坏死和逆转耐药的机制研究》一文中研究指出目的:叁阴性乳腺癌较其他类型乳腺癌恶性程度高,药物治疗效果不理想,原发耐药比例高,继发耐药时间短、预后差。叁阴性乳腺癌是困扰临床治疗已久的乳腺癌类型,始终缺乏效果明显而副作用小的治疗药物问世。肿瘤细胞产生耐药性的重要原因是抗凋亡蛋白的过表达和凋亡信号传导障碍,此外还受到多药耐药抵抗、肿瘤干细胞介导的肿瘤耐药和肿瘤微环境的影响。多药耐药的叁阴性乳腺癌的临床治疗更是面临巨大的挑战。传统上克服耐药的主要思路,是针对不同凋亡障碍靶点设计药物,来试图恢复肿瘤细胞的凋亡能力,但由于凋亡机制本身极其复杂,加之肿瘤细胞固有的异质性,导致这方面的努力始终没有获得重大突破。近年来的研究表明,除凋亡外,肿瘤细胞还能够通过如程序性坏死等后备死亡机制死亡,并且肿瘤细胞为了躲避凋亡而设置的障碍对程序性坏死并不会造成影响。蟾蜍灵是从中华大蟾蜍或黑眶蟾蜍的耳后腺及皮肤腺的干燥分泌物中提取的主要活性成分之一,其抗肿瘤作用在众多文献中得到了报道。本课题组前期工作中,用生物素化壳聚糖纳米粒装载蟾蜍灵(Bufalin biotin modified chitosan nanoparticles,Bu-BCS-NPs),制成了平均直径为171.6nm的大分子药物颗粒,使得该大分子药物颗粒能够在体内环境下,最大限度地利用实体瘤的高通透性和滞留效应,抑制裸鼠体内乳腺癌移植瘤。前期工作中偶然发现蟾蜍灵可以诱导乳腺癌细胞发生程序性坏死。这种坏死并不依赖于Caspase,因此并不会被Caspase的广谱抑制剂z-VAD-fmk所抑制;还具备特殊的超微结构特点:细胞膜早期出现崩解,细胞浆内大量线粒体内部嵴结构消失,呈现低电子密度的空泡样结构,并出现自噬体,但细胞核未见明显改变等。基于国内外学者的研究结果以及本课题组前期的研究发现,本研究试图阐明:(1)蟾蜍灵是否可以有效杀灭叁阴性乳腺癌细胞,特别是耐药的叁阴性乳腺癌细胞;(2)蟾蜍灵是否确实可以诱导程序性坏死;(3)蟾蜍灵是通过何种分子机制实现诱导乳腺癌细胞程序性坏死;(4)蟾蜍灵是否可以恢复耐药细胞化疗敏感性;(5)蟾蜍灵是否可以协同、增敏化疗药物的作用。研究方法:本研究的主要研究方法包括:(1)MTT检测细胞活性;(2)AV/PI双染法观察细胞存活状态;(3)Hoechst33342/PI双染法荧光显微镜下观察细胞核形态及细胞生存状态;(4)活性氧检测试剂盒检测细胞内活性氧含量;(5)PI染色法检测死亡细胞比例;(6)透射电镜观察细胞微观形态;(7)JC-1染色法检测线粒体膜电位变化;(8)Real-time PCR和Western-blot检测基因在RNA水平和蛋白水平的表达;(9)裸鼠体内肿瘤种植及药物干预实验,包括肿瘤种植、观察、测量、解剖等;(10)实验过程中应用的抑制剂主要包括程序性坏死抑制剂Nec-1、凋亡抑制剂z-VAD-fmk、活性氧抑制剂NAC、磷脂酶A2抑制剂溴烯醇内酯、脂氧合酶抑制剂AA861、线粒体呼吸链复合体I抑制剂Rotenone、复合体III抑制剂Antimycin以及ATP合成酶抑制剂Oligomycin;(11)Image J进行灰度值测定;(12)Graphpad进行图片编辑;(13)SPSS22.0进行数据统计,P<0.05提示显着差异。结果:通过MTT检测我们发现,蟾蜍灵对叁阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞系和耐药细胞系MDA-MB-231/ADR、MDA-MB-231/DOC均存在剂量/时间依赖性杀伤作用。通过对MDA-MB-231/ADR细胞的进一步研究我们发现,蟾蜍灵的杀伤作用是通过诱导程序性坏死实现的,具体表现在蟾蜍灵作用后:(1)Hoechst33342/PI双染法观察到的死亡细胞中,以程序性坏死为主;(2)这种细胞死亡可以被程序性坏死抑制剂Nec-1显着抑制;(3)细胞内活性氧含量显着升高,活性氧抑制剂NAC抑制活性氧的含量后,可以显着降低细胞的死亡比例;(4)透射电镜下可以观察到细胞多表现为坏死样形态学改变,包括:1)细胞核肿胀但形态完整,未发生核固缩、碎裂;2)细胞膜完整性丧失,且不以“发芽或气泡”的方式形成凋亡小体;3)细胞浆大量空泡化;4)细胞内形成双层膜结构的自噬空泡;5)线粒体明显肿胀。为了探究蟾蜍灵诱导程序性坏死的可能机制,我们进行了进一步的研究。结果提示,蟾蜍灵作用MDA-MB-231及MDA-MB-231/ADR细胞后:(1)细胞内ROS含量显着升高,并且ROS的升高与蟾蜍灵的作用浓度存在剂量依赖关系;(2)线粒体功能障碍,具体表现为JC-1检测下,线粒体膜电位显着下降;(3)PLA2/LOXs的抑制剂并不能抑制细胞内ROS含量的升高;(4)线粒体呼吸链复合体III抑制剂Antimycin以及ATP合成酶抑制剂Oligomycin不能抑制ROS含量的升高,但线粒体呼吸链复合体I抑制剂Rotenone可以抑制ROS的升高。本研究同时发现,无毒剂量蟾蜍灵可以逆转叁阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231/ADR和MDA-MB-231/DOC多药耐药,恢复耐药细胞的化疗敏感性。蟾蜍灵能够降低耐药细胞系多药耐药蛋白P-gp、BCRP以及MRP1的表达,这可能是其发挥逆转耐药作用的途径。通过对裸鼠腋下种植MDA-MB-231/ADR细胞,成瘤后给予蟾蜍灵或阿霉素或联合用药的药物干预实验发现,无毒剂量的蟾蜍灵在裸鼠体内可以降低种植瘤耐药蛋白P-gp、BCRP和MRP1的表达,并且可以恢复耐药细胞对阿霉素的治疗敏感性,发挥逆转耐药的作用。结论:1、蟾蜍灵能够有效杀伤叁阴性乳腺癌细胞及其耐药细胞,并且这种杀伤是通过诱导细胞程序性坏死途径实现的。2、蟾蜍灵可以破坏叁阴性乳腺癌细胞线粒体功能,使线粒体呼吸链功能发生障碍,进而导致细胞内活性氧含量增加,最终诱导细胞发生程序性坏死。3、蟾蜍灵可以通过降低叁阴性乳腺癌耐药细胞的多药耐药蛋白的表达,实现逆转耐药。(本文来源于《中国医科大学》期刊2019-03-01)

齐海燕[3](2018)在《蟾蜍灵与康艾在胃癌细胞中的抗肿瘤作用机理研究》一文中研究指出目的:胃癌是当今世界范围内发病率及死亡率均较高的恶性肿瘤。在我国,胃癌是肿瘤死亡的主要原因之一。外科手术仍是治疗早期胃癌的最有效手段,但多数患者确诊时已属进展期,其中很多患者失去了手术的机会,不能手术的进展期胃癌患者的治疗包括化疗、靶向治疗、免疫治疗等。化疗是进展期胃癌的主要治疗手段,但疗效不理想,中位生存期不足1年,5年生存率只有4%,而且联合化疗往往会降低病人的生活质量。近年来靶向治疗及免疫治疗应用于胃癌的治疗,取得了一定的疗效,但疗效仍然很有限。因此,有待进一步研制出疗效满意且毒副作用较低的药物用于胃癌的治疗。传统的中医药治疗已有几千年的历史,近年来,中药制剂在肿瘤的治疗方面取得了很多进展。本研究探讨两种药物的抗肿瘤机制,一种是从中药蟾酥中提纯的单品蟾蜍灵,另一种是中药复方制剂康艾。蟾酥是一种传统的中药,是蟾蜍耳后腺及表皮腺体的分泌物,而蟾蜍灵(Bufalin)是蟾酥中分离提取的蟾毒配基之一,既往的研究显示蟾蜍灵对多种实体瘤及血液系统肿瘤具有杀伤作用,包括前列腺癌、肝癌、胃癌、卵巢癌及白血病等。作用机制涉及以下几方面:抑制细胞增殖、诱导分化、诱导凋亡、破坏细胞周期、抑制肿瘤血管生成、逆转多药耐药及调节免疫反应等。在我国,作为蟾酥的可注射用的盐溶液,华蟾素注射液已被正式批准上市,并广泛应用于临床用来治疗多种肿瘤。有资料显示,华蟾素不仅能够提高胃癌患者的化疗反应率(RR),而且能够提高患者的生活质量。因此,蟾酥相关药物具有临床应用前景,蟾蜍灵作为蟾酥的有效抗癌成分,作用机制复杂,仍需进一步深入研究。自噬是目前生物学领域的研究热点,作为一种细胞的基本生命活动,是细胞本身的代谢需要和某些细胞器的更新方式,自噬起始于单层或双层膜包裹待降解物形成的自噬体,之后被运送到溶酶体形成自噬溶酶体,在自噬溶酶体内对待降解物进行多种酶的消化及降解。自噬是在基因严密调控下的一种主动过程。适度的自噬有利于细胞的存活,然而过多或持续的自噬会导致细胞死亡,因此,自噬又被称为II型程序性细胞死亡。近年来对自噬的研究不断深入和发展,研究者们越来越关注其在的肿瘤发生、发展中的作用。自噬对于肿瘤细胞的作用受到很多因素的影响,在不同的生物学背景下,自噬能够起到抑制肿瘤细胞或者保护肿瘤细胞的作用。自噬的形成及调控机制复杂,涉及多个分子及信号通路参与,具体机制未完全阐明,仍需进一步深入研究。同一个细胞内,自噬与凋亡通常会同时存在,并且两者之间相互影响、制约和平衡,因此自噬和凋亡之间的关系非常复杂,尤其在肿瘤细胞内,因此自噬对于决定细胞的生存或死亡起到重要的作用。不同的细胞系以及不同的状态下可产生不同的结果,二者关系复杂,报道不一。自噬如何调控细胞生存及死亡的分子机制需要深入的研究。有研究显示蟾蜍灵不仅可以诱导胃癌细胞凋亡,而且可以诱导胃癌细胞发生自噬,然而蟾蜍诱导胃癌细胞发生自噬的机制尚未完全清楚。本研究第一部分以自噬为入手点,旨在探讨蟾蜍灵诱导胃癌细胞自噬的分子机制以及自噬与凋亡的关系,为蟾蜍灵的临床应用提供理论基础。实验结果显示蟾蜍灵通过Cbl-b调控抑制PI3K/Akt/mTOR/p70S6K信号通路、活化ERK1/2信号诱导胃癌MGC803细胞发生保护性自噬。本研究中第二部分要探讨的是一种中药复方制剂-康艾,主要成分为黄芪、人参及苦参,功用以益气扶正、提高免疫力为主,同时还具有抑制肿瘤、减轻化疗毒副反应及改善机体一般状态的作用,目前已广泛应用于临床用于多种肿瘤的治疗,包括原发性肝癌、肺癌、淋巴瘤、妇科恶性肿瘤、结直肠癌、胃癌、食管癌等。基础及临床研究均显示出康艾能够改善和提高肿瘤患者的生活质量,提高免疫力,与化疗药联用能提高疾病控制率、减轻化疗副反应以及延长PFS和MST,并且康艾还能抑制肿瘤细胞增殖。因而,康艾在肿瘤治疗中具有较高的临床应用价值,但其疗效及机理仍不十分清楚,值得进一步研究探讨,以便取得更好的抗癌效果。本部分研究我们以胃癌MGC803细胞及BGC823细胞为模型,研究和探讨康艾在胃癌细胞中是否具有抗肿瘤作用,并进一步研究其中所涉及的相关机制。研究结果显示康艾能够通过抑制IL-6/STAT3通路及细胞周期阻滞而起到抑制胃癌细胞增殖的作用。研究方法:1、采用MTT法测定细胞活力,绘制增殖曲线。2、采用流式细胞仪通过Annexin V-PI双染法检测凋亡、通过PI单染法检测细胞周期的变化情况。3、采用荧光显微镜和透射电子显微镜观察自噬小体及自噬溶酶体的形态。4、应用蛋白免疫印迹技术(Western blot)检测目的蛋白的表达。5、采用RT-PCR的方法检测目的基因表达。6、统计学处理:以上实验统计学处理:每次实验重复3次,数据以均数±标准差(X±S)表示,采用SPSS 17.0用软件进行t检验。结果:第一部分:1、蟾蜍灵能够以时间及浓度依赖的方式抑制胃癌细胞系MGC803、BGC823及SG7901增殖。2、蟾蜍灵能够诱导胃癌细胞MGCC803、BGC823及SGC7901发生凋亡及自噬。3、自噬相关蛋白Beclin 1、Atg12-Atg5、Atg 9及Atg16L1在蟾蜍灵诱导自噬发生的过程中发生了动态变化,参与了蟾蜍灵诱导MGC803细胞自噬的形成。4、蟾蜍灵通过抑制PI3K/Akt/mTOR/p70S6K信号通路及活化ERK1/2信号诱导自噬。5、Cbl-b通过抑制mTOR及活化ERK正性调节自噬。蟾蜍灵作用MGC803细胞后Cbl-b蛋白表达水平逐渐升高,Cbl-b敲减后,LC3的表达水平较对照组明显下降,磷酸化mTOR的表达上调,而磷酸化ERK的表达下调。6、蟾蜍灵诱导胃癌细胞发生的自噬对凋亡起到抑制作用,是保护性自噬。第二部分:1、康艾能够以浓度依赖的方式抑制MGC 803及BGC 823细胞增殖。2、康艾将胃癌细胞的周期阻滞于G1期,同时可减少S期细胞的比例。3、康艾抑制STAT3的表达,而Akt及ERK的表达无明显变化。4、康艾作用胃癌细胞后导致IL-6的表达下调。5、康艾与IL-6联用后,对细胞的增殖抑制减弱,同时STAT3的表达较单独应用康艾上调。结论:第一部分:1、蟾蜍灵能够抑制胃癌细胞MGC803、BGC823及SGC7901增殖并诱导凋亡与自噬。2、自噬相关分子Beclin 1、Atg12-Atg5、Atg 9及Atg 16L1参与蟾蜍灵诱导胃癌细胞MGC803自噬的过程。3、蟾蜍灵通过抑制PI3K/Akt/mTOR/p70S6K信号通路及活化ERK1/2信号诱导胃癌细胞MGC803自噬。4、Cbl-b通过抑制mTOR及活化ERK1/2阳性调节自噬。5、蟾蜍灵诱导胃癌细胞发生的自噬抑制凋亡,是一种保护性自噬。第二部分:1、康艾能够以剂量依赖的方式抑制胃癌细胞MGC803、BGC823增殖。2、康艾阻滞细胞周期于G1期抑制胃癌细胞增殖。3、康艾通过抑制IL-6基因表达进而抑制STAT3,从而抑制胃癌细胞增殖。(本文来源于《中国医科大学》期刊2018-12-01)

刘佳[4](2018)在《蟾蜍灵诱导人胶质瘤干细胞凋亡并提高替莫唑胺敏感性的研究》一文中研究指出目的:研究蟾蜍灵(Bufalin)对胶质瘤细胞生长和增殖的抑制作用,对人胶质瘤干细胞的抑制和诱导凋亡的作用及作用机制,并探究蟾蜍灵对替莫唑胺的敏感性的影响。材料与方法:取人胶质瘤U87MG、LN-229细胞和肝细胞LO2分别加入不同浓度的蟾蜍灵,细胞增殖抑制实验(MTT)检测蟾蜍灵处理24、48和72小时后,对细胞生存率的影响;克隆形成实验观察蟾蜍灵在不同浓度时对胶质瘤细胞增殖能力的影响;用低粘附的细胞培养板,无血清细胞培养基培养胶质瘤干细胞,倒置光学显微镜观察细胞形态;加入蟾蜍灵处理后观察干细胞形态变化及干细胞球体积和数量变化;PI荧光染色观察蟾蜍灵处理后的干细胞死亡情况;应用流式细胞术检测不同浓度蟾蜍灵处理后的胶质瘤干细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测不同浓度蟾蜍灵处理后,胶质瘤干细胞的凋亡相关蛋白表达水平的变化;蟾蜍灵和替莫唑胺单独和联合处理细胞后,应用MTT、流式细胞术、Western blot检测胶质瘤干细胞增殖和凋亡情况。结果:1.MTT结果显示,不同浓度蟾蜍灵处理U87MG和LN-229细胞24、48和72小时后,细胞生存率明显下降。U87MG细胞在蟾蜍灵处理24、48和72h时的IC50分别为85.3,34.5和16.7 n M,LN-229细胞在蟾蜍灵处理24、48和72h时的IC50分别为184.2,96.1和32.7 n M。蟾蜍灵对肝细胞LO2的抑制作用不明显。U87MG和LN-229细胞的克隆形成结果显示,加入蟾蜍灵20n M的细胞克隆数明显低于10n M和对照组,并且在U87MG细胞的20n M组中,几乎看不到细胞克隆。2.U87MG和LN-229细胞可以成球,并且成球细胞的干细胞标志蛋白表达量明显比正常细胞高。蟾蜍灵处理后的胶质瘤细胞形成的干细胞球明显比对照组形成的小,且干细胞球数量也明显减少。干细胞形成后,蟾蜍灵处理组的细胞球明显变松散甚至周围出现细胞碎片。PI染色可以看到随着蟾蜍灵浓度的升高,胶质瘤干细胞死亡越多。蟾蜍灵处理后的胶质瘤干细胞,经流式细胞仪检测后发现凋亡比例明显比对照组高,并存在剂量时间依赖性,Western blot检测凋亡蛋白表达量同样增加;3.MTT检测蟾蜍灵和替莫唑胺(Temozolomide,TMZ)联合应用后的胶质瘤干细胞生存率明显低于单独用药组;流式细胞仪检测蟾蜍灵和替莫唑胺联合用药组的细胞凋亡比例,同样高于单独蟾蜍灵或替莫唑胺用药组;Western blot检测线粒体凋亡途径的促凋亡蛋白P-Bad和Cleaved-Caspase-9表达量升高,抑凋亡蛋白Bcl-2和Bcl-xl的表达水平明显下降。结论:1.蟾蜍灵抑制胶质瘤细胞生长和增殖,对肝细胞LO2几乎没有毒性作用。2.蟾蜍灵抑制胶质瘤干细胞活性并杀伤胶质瘤干细胞;蟾蜍灵可以诱导胶质瘤干细胞发生凋亡。3.蟾蜍灵提高胶质瘤干细胞对替莫唑胺的敏感性,其机制可能是上调促凋亡蛋白的表达,下调抑凋亡蛋白表达。(本文来源于《辽宁中医药大学》期刊2018-06-01)

张滢[5](2018)在《蟾蜍灵对人脑胶质瘤细胞增殖及端粒酶催化亚基hTERT表达的影响》一文中研究指出目的:脑胶质瘤在中枢神经系统最多见,属原发性肿瘤,约占成人脑内肿瘤的45%-60%。恶性神经胶质瘤呈浸润性生长,易导致肿瘤细胞增殖、复发、迁移,使其难以完全治愈。治疗方法为手术切除,辅以术后放、化疗等。随着现代医学的进步,技术的发展,越来越多的手段被逐渐应用于胶质瘤的治疗中。药物治疗胶质瘤的相关机制尚不完全明了。胶质瘤在中医学属于脑瘤范围,我国古代文献中对“脑肿瘤”无明确病名记载,但在真头痛、癫痫、中风、眩晕、呕吐、厥逆等疾病中有一些类似症状的记述。依据传统医学观:整体观念和辩证论治,虽无“脑肿瘤”病名,但仍可采用“扶正祛邪”、“调整阴阳”的治疗原则。而蟾蜍灵的抗肿瘤作用是近几年的研究热点。本研究通过将蟾酥中提取的有效成分蟾蜍灵,分组处理脑胶质瘤细胞U87、U251,在时间、浓度各异的情况下,采用不同实验方法检测蟾蜍灵对脑胶质瘤细胞的影响,探索蟾蜍灵治疗脑胶质瘤的机制,为以后的研究者提供参考和思路。材料与方法:将购于中国科学院细胞库的人脑胶质瘤细胞株U87、U251进行体外培养,依据既往文献记录,配置浓度适宜的蟾毒灵,分别取6个浓度梯度,作用于两种胶质瘤细胞,分别培养24、48、72h,采用CCK-8法检测蟾蜍灵对胶质瘤细胞增殖抑制率,求出IC_(50)。依据IC_(50)计算出蟾蜍灵的适宜给药浓度。克隆形成实验检测胶质瘤细胞的增殖抑制,Western-blot测定人端粒酶逆转录酶(hTERT)的蛋白表达,real time PCR检测hTERT基因表达水平,CCK-8法检测蟾蜍灵对人原代胶质瘤细胞的杀伤作用,为临床采用蟾蜍灵治疗胶质瘤提供理论依据。结果:1.蟾蜍灵浓度在5~60nmol/L时,对U251细胞都有一定的抑制作用;蟾蜍灵浓度在20~160nmol/L时,抑制U87细胞的增殖,且呈时间和剂量依赖性,蟾蜍灵浓度越高,作用时间越长,对两种胶质瘤细胞的抑制作用越明显。2.克隆形成实验结果显示,蟾蜍灵能够有效地抑制U251及U87细胞的克隆形成,呈时间和剂量依赖性。3.Western-blot结果显示,与对照组(不加蟾蜍灵组)相比,蟾蜍灵组明显抑制胶质瘤细胞hTERT蛋白表达,且随药物浓度增加而蛋白表达水平降低。4.实时荧光定量PCR结果显示,与对照组(不加蟾蜍灵组)相比,蟾蜍灵组U87、U251细胞hTERT-mRNA的表达降低明显。5.体外实验证明,蟾蜍灵对人原代胶质瘤细胞具有明显的杀伤作用。结论:1蟾蜍灵对体外培养的人脑胶质瘤细胞U87、U251以及人原代胶质瘤细胞都具有抑制增殖的作用,且呈时间和剂量依赖性。2蟾蜍灵对人hTERT的表达产生明显的影响,抑制hTERT的表达,进而降低端粒酶的活性,促进胶质瘤细胞的死亡。(本文来源于《辽宁中医药大学》期刊2018-06-01)

王佳宝[6](2018)在《华蟾毒配基和蟾蜍灵抑制AURKs引起肝癌细胞G_2/M期阻滞并诱导细胞凋亡的机制探索》一文中研究指出目的探索华蟾毒配基(Cinobufagin)和蟾蜍灵(Bufalin)两种蟾酥活性成分下调极光激酶(AURKs)引起肝癌细胞周期阻滞并诱导凋亡的相关机制,并初步构建AURKA过表达及敲除的肝癌稳定细胞系。方法第一部分对肝癌患者(癌症基因信息数据库TCGA)生存期与极光激酶A(AURKA)和极光激酶B(AURKB)mRNA表达水平进行分析,判断相互关系;培养肝癌HepG2、Huh7和SMMC7721叁种肝癌细胞株,运用Cinobufagin和Bufalin干预后,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖水平;流式细胞术PI单染和Annexin V/PI双染法分别检测细胞周期和细胞凋亡变化;蛋白免疫印迹技术(Western Blot)检测周期相关蛋白(Cyclin B1和CDK1),凋亡相关蛋白Bcl-2,极光激酶家族蛋白(AURKA,AURKB),Xklp2靶向蛋白(TPX2)和癌基因蛋白c-MYC表达水平。第二部分运用pLVX-puro和lentiCRISPRv2质粒结合慢病毒包装技术构建AURKA过表达和敲除肝癌细胞系;Western Blot验证稳定细胞系中AURKA表达水平。结果肝癌患者生存期与AURKA和AURKB的mRNA表达水平呈现明显负相关,即AURKA和AURKB表达越高,肝癌患者生存期越短;Cinobufagin和Bufalin对HepG2、Huh7和SMMC7721叁种肝癌细胞干预24h后,对它们的生长水平具有明显抑制作用,随着药物浓度的升高,对细胞生长水平的抑制作用更加明显(R~2﹥0.9);且均能引起HepG2、Huh7和SMMC7721细胞G_2/M期阻滞;诱导HepG2、Huh7和SMMC7721细胞凋亡;在不同干预时间则不同程度地引起周期相关蛋白(Cyclin B1和CDK1),凋亡相关蛋白Bcl-2,极光激酶家族蛋白(AURKA,AURKB),Xklp2靶向蛋白(TPX2)和癌基因蛋白c-MYC表达水平改变(P<0.05)。经测序分析成功构建pLVX-AURKA过表达质粒和CRISPR/CAS9-AURKA敲除质粒,并成功构建pLVX-AURKA-HepG2和pLVX-AURKA-SMMC7721过表达细胞系,以及CRISPR/CAS9-AURKA-HepG2敲除细胞系。结论1、肝癌患者生存期与AURKA和AURKB转录水平呈负相关。2、蟾酥活性成分Cinobufagin和Bufalin均能抑制HepG2、Huh7和SMMC7721叁种肝癌细胞细胞增殖,并呈现浓度依赖性关系。3、Cinobufagin和Bufalin可以通过调控AURKs表达,进一步下调TPX2、c-MYC、CDK1、Cyclin B1和Bcl-2表达水平引起HepG2、Huh7和SMMC7721叁种肝癌细胞G_2/M期周期阻滞,并诱发凋亡。(本文来源于《锦州医科大学》期刊2018-03-01)

刘佳,孔令凯,孙舒岚,李晓曦,张桂荣[7](2017)在《蟾蜍灵对人胶质瘤细胞U87MG及其成球细胞增殖和凋亡影响的研究》一文中研究指出目的观察蟾蜍灵对人胶质瘤细胞系U87MG及U87MG成球细胞增殖和凋亡作用的影响。方法取对数生长期的U87MG细胞,制成细胞悬液,分别向细胞悬液中加入不同浓度的蟾蜍灵,另设DMSO作为对照组,MTT检测细胞存活情况;克隆形成2周后,观察不同浓度蟾蜍灵对细胞增殖的影响;蟾蜍灵处理U87MG细胞12 h和48 h后,流式细胞仪检测细胞凋亡情况;Western blot检测蟾蜍灵处理U87MG细胞48 h后凋亡相关蛋白Cleaved-caspase-3和Cleaved-PARP表达水平;分别用成球培养基和含有蟾蜍灵的成球培养基培养U87MG细胞7 d,显微镜下观察细胞是否成球及其形态、成球体积大小变化和数量变化;成球的U87MG细胞加入不同浓度蟾蜍灵72 h后,PI避光染色1 h,荧光显微镜下观察细胞死亡情况。结果加入蟾蜍灵处理的U87MG细胞生存率较空白对照组和DMSO组明显下降,24 h、48 h和72 h的IC50分别为85 nmol/L、34 nmol/L和22 nmol/L。蟾蜍灵处理后克隆形成数量低于空白对照组。U87MG细胞经蟾蜍灵处理后,细胞凋亡比例增加,并存在药物浓度时间依赖性;凋亡相关蛋白Cleaved-caspase-3和Cleaved-PARP表达量较空白对照组增加;U87MG细胞在成球培养基中培养后可以成球;加蟾蜍灵干预后,细胞成球体积明显比空白对照组小,且数量减少。PI染色观察到随药物浓度增加,细胞球死亡比例增加。结论蟾蜍灵可以抑制U87MG细胞生长和增殖,并能促进其凋亡;蟾蜍灵可以抑制胶质瘤U87MG成球,并能杀伤干细胞。(本文来源于《中国中医急症》期刊2017年11期)

丁玲[8](2017)在《蟾蜍灵对体外庆大霉素诱导的大鼠肾小管上皮细胞自噬的影响》一文中研究指出研究背景急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)在临床并不少见,部分病例属于危重病症,甚至可能出现慢性肾功能不全,进展为终末期肾病(end stage renal disease,ESRD)的患儿也不在少数,只能肾脏替代治疗,对于家庭个体和社会都造成严重的经济和精神负担。AKI治疗的方法一直在不断改善中,但是部分病例预后仍然不好,因此,众多学者都在寻找AKI诊治及改善预后的新方法。庆大霉素(Gentamicin,GM)是临床上常用的氨基糖苷类抗生素(AGs),主要用于治疗革兰氏阴性杆菌感染,肾毒性是其主要的副作用,也是制备AKI体外模型的主要药物之一。本课题组长期从事蟾蜍灵在肾脏疾病中的作用研究,前期研究已经发现,蟾蜍灵(Bufalin)通过调控系膜细胞增殖和凋亡、保护足细胞损伤、调控细胞自噬水平、降低蛋白尿等发挥肾脏保护作用。本文拟研究蟾蜍灵对体外庆大霉素诱导的肾小管上皮细胞自噬及肾损伤分子1(kidney injury molecular-1,KIM1)表达的影响,探讨肾损伤标志物的变化及蟾蜍灵治疗AKI的作用,为临床AKI的诊治提供初步的理论基础。研究方法1.体外培养大鼠肾小管上皮细胞,研究分组如下:①对照组②庆大霉素组(2mg/mL)③蟾蜍灵组(10-8mol/L)④庆大霉素+蟾蜍灵组(庆大霉素2mg/mL+蟾蜍灵 10-8mol/L)2.通过透射电子显微镜方法检测各组大鼠肾小管上皮细胞的自噬水平3.Western Blot方法检测庆大霉素刺激及蟾蜍灵干预对肾小管上皮细胞自噬标志蛋白LC3-Ⅱ、P62及肾损伤分子1(KIM1)蛋白表达的影响研究结果1.透射电子显微镜观察结果显示:与对照组相比,庆大霉素组大鼠肾小管上皮细胞自噬相关形态指标自噬体、自噬泡等数量明显增加;蟾蜍灵干预后,大鼠肾小管上皮细胞自噬体数量较庆大霉素刺激组明显减少2.Western Blot结果显示:与对照组相比,庆大霉素组自噬标志蛋白LC3-Ⅱ及P62相对表达量上升(P<0.05);KIM1蛋白相对表达量也上升(P<0.05);蟾蜍灵干预后,LC3-Ⅱ、P62蛋白及KIM1蛋白相对表达量较庆大霉素组下降(P<0.05)研究结论高浓度的庆大霉素可促进大鼠肾小管上皮细胞自噬的发生,提高肾损伤分子1蛋白的表达;蟾蜍灵可部分缓解庆大霉素诱导的大鼠肾小管上皮细胞自噬的发生及减少肾损伤分子1蛋白的表达,对肾脏损伤起到一定的保护作用。(本文来源于《南京医科大学》期刊2017-11-01)

丁玲,施会敏,张爱青,甘卫华[9](2017)在《蟾蜍灵对体外庆大霉素诱导的大鼠肾小管上皮细胞自噬的影响》一文中研究指出目的:观察蟾蜍灵对体外庆大霉素诱导的大鼠肾小管上皮细胞自噬的影响。方法:体外培养大鼠肾小管上皮细胞,分为正常对照组、庆大霉素组(2 mg/m L)、蟾蜍灵组(1×10~(-8)mol/L)、庆大霉素+蟾蜍灵组(庆大霉素2 mg/mL+蟾蜍灵1×10~(-8) mol/L)。应用透射电镜观察各组大鼠肾小管上皮细胞的自噬水平;Western blot检测庆大霉素及蟾蜍灵对肾小管上皮细胞自噬标志蛋白LC3Ⅱ、P62及肾损伤分子1(kindey injury molecule-1,KIM1)表达的影响。结果:透射电镜下观察:与对照组相比,庆大霉素组自噬相关形态指标自噬体、自噬泡等数量明显增加;蟾蜍灵干预后,细胞自噬体数量较庆大霉素组明显减少。Western blot结果显示,与对照组相比,庆大霉素组自噬标志蛋白LC3Ⅱ、P62、KIM1的蛋白相对表达量均升高(P<0.05),蟾蜍灵干预后,LC3Ⅱ、P62及KIM1蛋白相对表达量较庆大霉素组下降(P<0.05)。结论:庆大霉素可促进大鼠肾小管上皮细胞发生自噬、提高KIM1蛋白的表达;蟾蜍灵可部分缓解庆大霉素诱导的肾小管上皮细胞自噬的增加及KIM1蛋白表达量的提高,提示这可能是其发挥肾脏保护作用的机制之一。(本文来源于《南京医科大学学报(自然科学版)》期刊2017年09期)

张翠利,付丽娜[10](2017)在《蟾蜍灵联合阿霉素对人肺癌A549细胞体外增殖和凋亡的影响》一文中研究指出目的:探讨天然药物蟾蜍灵、阿霉素以及两者联用对非小细胞肺癌A549细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法:采用四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法观察蟾蜍灵、阿霉素以及两者联用对A549细胞增殖的影响;采用赫斯特(Hoechst 33342)染色法观察细胞核形态变化;采用流式细胞仪检测蟾蜍灵、阿霉素以及两者联用对A549细胞凋亡和细胞周期的影响;采用Western印迹检测凋亡蛋白的表达。结果:蟾蜍灵和阿霉素单独用药均能抑制A549细胞的增殖,且呈剂量与时间依赖关系;与蟾蜍灵和阿霉素单独用药相比,1,20,100 nmol/L蟾蜍灵分别与1.0μg/m L阿霉素联合作用A549细胞24,48,72 h的抑制率显着升高(均P<0.05)。蟾蜍灵和阿霉素均可在一定程度上诱导细胞凋亡,两药联用后诱导细胞凋亡作用显着增强。蟾蜍灵和阿霉素联用可将细胞周期阻滞在S期,并上调凋亡蛋白caspase-3的表达。结论:蟾蜍灵联合阿霉素可显着抑制A549细胞的增殖,其抗肿瘤的机制可能与诱导细胞凋亡、细胞周期S期阻滞及凋亡蛋白caspase-3的上调有关。(本文来源于《中南大学学报(医学版)》期刊2017年07期)

蟾蜍灵论文开题报告

(1)论文研究背景及目的

此处内容要求:

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景,再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题,并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例:

目的:叁阴性乳腺癌较其他类型乳腺癌恶性程度高,药物治疗效果不理想,原发耐药比例高,继发耐药时间短、预后差。叁阴性乳腺癌是困扰临床治疗已久的乳腺癌类型,始终缺乏效果明显而副作用小的治疗药物问世。肿瘤细胞产生耐药性的重要原因是抗凋亡蛋白的过表达和凋亡信号传导障碍,此外还受到多药耐药抵抗、肿瘤干细胞介导的肿瘤耐药和肿瘤微环境的影响。多药耐药的叁阴性乳腺癌的临床治疗更是面临巨大的挑战。传统上克服耐药的主要思路,是针对不同凋亡障碍靶点设计药物,来试图恢复肿瘤细胞的凋亡能力,但由于凋亡机制本身极其复杂,加之肿瘤细胞固有的异质性,导致这方面的努力始终没有获得重大突破。近年来的研究表明,除凋亡外,肿瘤细胞还能够通过如程序性坏死等后备死亡机制死亡,并且肿瘤细胞为了躲避凋亡而设置的障碍对程序性坏死并不会造成影响。蟾蜍灵是从中华大蟾蜍或黑眶蟾蜍的耳后腺及皮肤腺的干燥分泌物中提取的主要活性成分之一,其抗肿瘤作用在众多文献中得到了报道。本课题组前期工作中,用生物素化壳聚糖纳米粒装载蟾蜍灵(Bufalin biotin modified chitosan nanoparticles,Bu-BCS-NPs),制成了平均直径为171.6nm的大分子药物颗粒,使得该大分子药物颗粒能够在体内环境下,最大限度地利用实体瘤的高通透性和滞留效应,抑制裸鼠体内乳腺癌移植瘤。前期工作中偶然发现蟾蜍灵可以诱导乳腺癌细胞发生程序性坏死。这种坏死并不依赖于Caspase,因此并不会被Caspase的广谱抑制剂z-VAD-fmk所抑制;还具备特殊的超微结构特点:细胞膜早期出现崩解,细胞浆内大量线粒体内部嵴结构消失,呈现低电子密度的空泡样结构,并出现自噬体,但细胞核未见明显改变等。基于国内外学者的研究结果以及本课题组前期的研究发现,本研究试图阐明:(1)蟾蜍灵是否可以有效杀灭叁阴性乳腺癌细胞,特别是耐药的叁阴性乳腺癌细胞;(2)蟾蜍灵是否确实可以诱导程序性坏死;(3)蟾蜍灵是通过何种分子机制实现诱导乳腺癌细胞程序性坏死;(4)蟾蜍灵是否可以恢复耐药细胞化疗敏感性;(5)蟾蜍灵是否可以协同、增敏化疗药物的作用。研究方法:本研究的主要研究方法包括:(1)MTT检测细胞活性;(2)AV/PI双染法观察细胞存活状态;(3)Hoechst33342/PI双染法荧光显微镜下观察细胞核形态及细胞生存状态;(4)活性氧检测试剂盒检测细胞内活性氧含量;(5)PI染色法检测死亡细胞比例;(6)透射电镜观察细胞微观形态;(7)JC-1染色法检测线粒体膜电位变化;(8)Real-time PCR和Western-blot检测基因在RNA水平和蛋白水平的表达;(9)裸鼠体内肿瘤种植及药物干预实验,包括肿瘤种植、观察、测量、解剖等;(10)实验过程中应用的抑制剂主要包括程序性坏死抑制剂Nec-1、凋亡抑制剂z-VAD-fmk、活性氧抑制剂NAC、磷脂酶A2抑制剂溴烯醇内酯、脂氧合酶抑制剂AA861、线粒体呼吸链复合体I抑制剂Rotenone、复合体III抑制剂Antimycin以及ATP合成酶抑制剂Oligomycin;(11)Image J进行灰度值测定;(12)Graphpad进行图片编辑;(13)SPSS22.0进行数据统计,P<0.05提示显着差异。结果:通过MTT检测我们发现,蟾蜍灵对叁阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞系和耐药细胞系MDA-MB-231/ADR、MDA-MB-231/DOC均存在剂量/时间依赖性杀伤作用。通过对MDA-MB-231/ADR细胞的进一步研究我们发现,蟾蜍灵的杀伤作用是通过诱导程序性坏死实现的,具体表现在蟾蜍灵作用后:(1)Hoechst33342/PI双染法观察到的死亡细胞中,以程序性坏死为主;(2)这种细胞死亡可以被程序性坏死抑制剂Nec-1显着抑制;(3)细胞内活性氧含量显着升高,活性氧抑制剂NAC抑制活性氧的含量后,可以显着降低细胞的死亡比例;(4)透射电镜下可以观察到细胞多表现为坏死样形态学改变,包括:1)细胞核肿胀但形态完整,未发生核固缩、碎裂;2)细胞膜完整性丧失,且不以“发芽或气泡”的方式形成凋亡小体;3)细胞浆大量空泡化;4)细胞内形成双层膜结构的自噬空泡;5)线粒体明显肿胀。为了探究蟾蜍灵诱导程序性坏死的可能机制,我们进行了进一步的研究。结果提示,蟾蜍灵作用MDA-MB-231及MDA-MB-231/ADR细胞后:(1)细胞内ROS含量显着升高,并且ROS的升高与蟾蜍灵的作用浓度存在剂量依赖关系;(2)线粒体功能障碍,具体表现为JC-1检测下,线粒体膜电位显着下降;(3)PLA2/LOXs的抑制剂并不能抑制细胞内ROS含量的升高;(4)线粒体呼吸链复合体III抑制剂Antimycin以及ATP合成酶抑制剂Oligomycin不能抑制ROS含量的升高,但线粒体呼吸链复合体I抑制剂Rotenone可以抑制ROS的升高。本研究同时发现,无毒剂量蟾蜍灵可以逆转叁阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231/ADR和MDA-MB-231/DOC多药耐药,恢复耐药细胞的化疗敏感性。蟾蜍灵能够降低耐药细胞系多药耐药蛋白P-gp、BCRP以及MRP1的表达,这可能是其发挥逆转耐药作用的途径。通过对裸鼠腋下种植MDA-MB-231/ADR细胞,成瘤后给予蟾蜍灵或阿霉素或联合用药的药物干预实验发现,无毒剂量的蟾蜍灵在裸鼠体内可以降低种植瘤耐药蛋白P-gp、BCRP和MRP1的表达,并且可以恢复耐药细胞对阿霉素的治疗敏感性,发挥逆转耐药的作用。结论:1、蟾蜍灵能够有效杀伤叁阴性乳腺癌细胞及其耐药细胞,并且这种杀伤是通过诱导细胞程序性坏死途径实现的。2、蟾蜍灵可以破坏叁阴性乳腺癌细胞线粒体功能,使线粒体呼吸链功能发生障碍,进而导致细胞内活性氧含量增加,最终诱导细胞发生程序性坏死。3、蟾蜍灵可以通过降低叁阴性乳腺癌耐药细胞的多药耐药蛋白的表达,实现逆转耐药。

(2)本文研究方法

调查法:该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法:用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法:通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法:通过调查文献来获得资料,从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法:依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法:对研究对象进行“质”的方面的研究,这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法:通过具体的数字,使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法:运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法:这是社会科学用来分析社会现象的一种方法,从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法:通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。

蟾蜍灵论文参考文献

[1].孔翠翠,李艳兰,宫鹏超,田昕.蟾蜍灵诱导人宫颈癌C33A细胞自噬作用的机理研究[J].现代肿瘤医学.2019

[2].刘晓丹.蟾蜍灵诱导叁阴性乳腺癌耐药细胞程序性坏死和逆转耐药的机制研究[D].中国医科大学.2019

[3].齐海燕.蟾蜍灵与康艾在胃癌细胞中的抗肿瘤作用机理研究[D].中国医科大学.2018

[4].刘佳.蟾蜍灵诱导人胶质瘤干细胞凋亡并提高替莫唑胺敏感性的研究[D].辽宁中医药大学.2018

[5].张滢.蟾蜍灵对人脑胶质瘤细胞增殖及端粒酶催化亚基hTERT表达的影响[D].辽宁中医药大学.2018

[6].王佳宝.华蟾毒配基和蟾蜍灵抑制AURKs引起肝癌细胞G_2/M期阻滞并诱导细胞凋亡的机制探索[D].锦州医科大学.2018

[7].刘佳,孔令凯,孙舒岚,李晓曦,张桂荣.蟾蜍灵对人胶质瘤细胞U87MG及其成球细胞增殖和凋亡影响的研究[J].中国中医急症.2017

[8].丁玲.蟾蜍灵对体外庆大霉素诱导的大鼠肾小管上皮细胞自噬的影响[D].南京医科大学.2017

[9].丁玲,施会敏,张爱青,甘卫华.蟾蜍灵对体外庆大霉素诱导的大鼠肾小管上皮细胞自噬的影响[J].南京医科大学学报(自然科学版).2017

[10].张翠利,付丽娜.蟾蜍灵联合阿霉素对人肺癌A549细胞体外增殖和凋亡的影响[J].中南大学学报(医学版).2017

论文知识图

蟾蜍灵对PDGF-BB诱导的系膜细胞C...蟾蜍灵诱导EC9706细胞hTERT核-线...蟾蜍灵处理诱导EC9706细胞周期阻...蟾蜍灵抑制HL-60细胞活力蟾蜍灵蟾蜍灵诱导EC9706细胞凋亡

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蟾蜍灵论文_孔翠翠,李艳兰,宫鹏超,田昕
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