柴胡属药用植物多重实时荧光PCR检测方法的建立

论文摘要

目的用实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)方法测定正品柴胡,为柴胡的分子鉴定提供依据。方法从柴胡根茎中提取总DNA,根据ITS2序列,设计合成针对南柴胡和北柴胡的特异性引物和探针以及柴胡的通用引物与探针,通过对荧光聚合酶链式反应反应体系和反应条件的优化筛选,建立了多重实时荧光聚合酶链式反应方法,在同一聚合酶链式反应反应体系中可以同时鉴别南、北柴胡。结果结果表明本试验设计的引物和探针具有很好的物种特异性,且灵敏度高,DNA检出限为0.08 ng。对46份样品检测,其中17份检出北柴胡源性成分,5份为南柴胡,其他样品均检测为伪品柴胡,检测结果与DNA测序结果一致。结论该方法可以有效地鉴别出南、北柴胡源性成分,及伪品柴胡,对于保证柴胡药材的质量及用药安全具有重要意义。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 供试材料
•   1.2 试剂与仪器
•   1.3 方法
•     1.3.1 引物与探针的设计
•     1.3.2 柴胡干根DNA的提取
•     1.3.3 单重荧光PCR检测方法的建立
•     1.3.4 多重荧光PCR检测方法的建立
•     1.3.5 多重实时荧光PCR特异性试验
•     1.3.6 多重实时荧光PCR灵敏度试验
•     1.3.7 实际样品检测
• 2 结果
•   2.1 单重荧光PCR检测方法的建立
•   2.2 多重荧光PCR检测方法的建立
•   2.3 多重荧光PCR特异性试验
•   2.4 多重荧光PCR灵敏度试验
•   2.5 实际样品检测
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 张全芳,范阳阳,刘艳艳,陈雪燕,谭晴晴,胡悦,刘国霞,汪冰,林永强,步迅

关键词: 基因,南柴胡,北柴胡

来源: 药学研究 2019年12期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技

专业: 中药学

单位: 山东省农业科学院生物技术研究中心山东省农业科学院应用生命科学实验室,山东省食品药品检验研究院国家药品监督管理局胶类产品质量评价重点实验室

基金: 山东省重点研发计划(No.2018GSF119002,GG201809150023),山东省创新公共服务平台计划(No.2018JGX111),山东省农业科学院农业科技创新工程(No.CXGC2018D03)

分类号: R282.5

DOI: 10.13506/j.cnki.jpr.2019.12.003

页码: 693-696+708

总页数: 5

文件大小: 1202K

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