导读:本文包含了冰核蛋白论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:核蛋白,表面,蛋白,细菌,丁香,胞菌,脂肪。
冰核蛋白论文文献综述
罗砚曦,蒋依俐,阎辉[1]（2017）在《利用冰核蛋白N-端结构域在大肠杆菌表面展示人存活蛋白》一文中研究指出存活蛋白(survivin)是高度特异的广谱肿瘤相关抗原,利用冰核蛋白(ice nucleation protein,INP)表面展示系统研究在大肠杆菌细胞表面展示人存活蛋白的可行性。将人存活蛋白基因片段和报告基因Cherry融合到冰核蛋白N-端,构建表面展示载体p ET-INP-CHY-SUV并转化大肠杆菌BL21(DE3)。重组菌经IPTG诱导后可检测到红荧光,荧光强度在胰蛋白酶的作用下降低,完整细胞ELISA实验及免疫荧光实验可检测和观察到绿荧光,表明人存活蛋白在重组菌中得到表达,并且成功展示于细胞表面,为进一步研制新型的肿瘤DNA疫苗奠定基础。(本文来源于《中国细胞生物学学报》期刊2017年12期）
付玮,李友国,李一星[2]（2014）在《基于黄单胞菌冰核蛋白N端的表面展示体系建立》一文中研究指出为了建立一个自主、高效的细菌表面展示体系,利用野油菜黄单胞菌冰核蛋白N端结构域,将短小芽孢杆菌脂肪酶展示于大肠杆菌Rosetta 2(DE3)表面.采用细胞分级、脂肪酶活测定和His-tag In-gel stain分析等检测了重组蛋白的表达情况,并进一步检测了不同底物、温度、pH和有机溶剂对酶活稳定性的影响.结果显示融合蛋白在大肠杆菌细胞外膜成功展示,重组菌脂肪酶活为(74.6±4.5)U/g冻干细胞,展示水平为每个细胞表面19 267个脂肪酶分子;展示酶对中长链脂肪酸酯表现出较高的水解活性,最适pH为11.0,最适温度为40℃,且在40℃保温一周仍保持80%以上的酶活.本研究表明基于野油菜黄单胞菌冰核蛋白N端的展示体系是一种高效、稳定的细菌表面展示体系.(本文来源于《应用与环境生物学报》期刊2014年03期）
王经[3]（2014）在《影响丁香假单胞菌冰核蛋白InaQ分泌活性效应基因的研究》一文中研究指出丁香假单胞菌是一种常见植物致病菌,可以引发多种植物产生超敏反应,而且该菌还是一种冰核细菌,可使植物在较高温度下产生冻害。诱发植物冻害的关键因素为其分泌的一种蛋白,冰核蛋白(Ice nucleation protein, INP)。本课题以一株具有高冰核活性的丁香假单胞菌MB03为研究对象,构建了一个转座突变文库,对影响丁香假单胞菌冰核蛋白分泌的相关活性效应基因的进行了研究。丁香假单胞菌MB03是本实验室所分离保存的一株具有高冰核活性的丁香假单胞菌,其INP基因inaQ已完成克隆测序。本实验利用“自杀性”转座子pUT-mini Tn5-Km2,采用双亲本接合的方法构建了丁香假单胞菌MB03的突变文库。根据inaQ基因序列设计引物扩增得到其N端,连接pET-28a表达载体,获得INPN蛋白并制备其抗血清,然后利用免疫学方法对INP分泌进行分析。先用膜杂交的方法对突变文库中菌株进行初步筛选,从中筛选出INP分泌发生明显变化的菌株,再对这些菌株进行Cy5流式细胞仪检测验证,从而得到INP分泌明显增强和明显减弱的菌株。对突变菌株的转座子插入位点鉴定采用改进的TAIL-PCR方法,通过已知序列上3个嵌套的特异性引物分别和简并引物组合进行连续的PCR循环,选择性地扩增得到目标片段,扩增产物直接测序。通过TAIL-PCR,从几株InaQ分泌活性增强或减弱突变株中扩增到疑似插入位点侧翼基因。经对其测序和将测序结果与MB03基因组序列进行对比,最终鉴定出mini-Tn5插入失活的基因柠檬酸合成酶基因(glt A)、一种糖基转移酶基因和一种2-氧代酸脱氢酶基因等。本研究选取其中的柠檬酸合成酶基因(gltA)进行了表达补偿,通过Real time-qPCR和Western blot分析比较,测定了表达补偿菌株与野生菌株的冰核蛋白InaQ表达活性与表达量,初步证实gltA基因的中断可导致InaQ表达的降低。(本文来源于《华中农业大学》期刊2014-06-01）
张秋香,侯慧丽,芦颖,陈卫,钟瑾[4]（2013）在《基于冰核蛋白的乳酸菌表面展示系统的构建》一文中研究指出【目的】验证来源于丁香假单胞菌的冰核蛋白在乳酸乳球菌表面展示外源蛋白的可能性。【方法】以绿色荧光蛋白(Green Fluorescence Protein,GFP)基因gfp为报告基因,以冰核蛋白基因的N末端和NC端作为展示单元,构建乳酸菌表面展示载体pHZ101和pHZ102,并转化大肠杆菌(Escherichia coli)JM109和乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)MG1363。【结果】荧光显微镜观察显示重组大肠杆菌和乳酸乳球菌均能检测到绿色荧光。Western blot结果表明GFP蛋白在重组大肠杆菌和乳酸乳球菌中均得到表达,并且INPN-GFP蛋白多数滞留于乳酸乳球菌细胞质内,而INPNC-GFP蛋白则大部分定位于乳酸乳球菌的细胞膜上。【结论】以上结果表明丁香假单胞菌的冰核蛋白能引导外源蛋白定位于乳酸乳球菌的细胞膜上,为乳酸菌表面展示系统的构建提供了新的方向。(本文来源于《微生物学报》期刊2013年04期）
梁波,李亮,刘爱骅[5]（2012）在《基于冰核蛋白的木糖脱氢酶细菌展示系统的构建及其在D-木糖检测中的应用》一文中研究指出采用冰核蛋细菌展示系统,将木糖脱氢酶(XDH)高效地表达在菌体表面,该蛋白具有XDH酶活高、稳定性好、特异性高等特点。利用此菌体结合紫外-可见吸收光谱方法,实现了D-木糖的检测,检测范围是(本文来源于《中国化学会第28届学术年会第9分会场摘要集》期刊2012-04-13）
周世豪,袁哲明[6]（2012）在《冰核蛋白和昆虫抗冻蛋白在虫体抗寒中的作用》一文中研究指出为了冰核蛋白和昆虫抗冻蛋白共同维持虫体在寒冬中的动态平衡。尝试着从冰核蛋白和昆虫抗冻蛋白的结构和功能出发,阐述两者在虫体中的抗寒作用,有助于日后更为深入的研究。(本文来源于《中国农学通报》期刊2012年09期）
陶站华,张搏[7]（2012）在《利用冰核蛋白N末端结构域在大肠杆菌表面展示粘质沙雷氏菌脂肪酶》一文中研究指出【目的】利用细胞表面工程技术将活性脂肪酶展示于大肠杆菌细胞表面并对展示脂肪酶的酶学性质进行研究。【方法】将丁香假单胞菌冰核蛋白N末端结构域序列与粘质沙雷氏菌脂肪酶编码基因融合,构建成脂肪酶表面展示载体,并转化大肠杆菌BL21(DE3)。【结果】重组菌以终浓度0.05 mmol/L异丙基硫代-D-半乳糖苷(IPTG)、25°C条件下诱导培养,16 h后表面展示脂肪酶活力达到最大值1 852 U/g细胞干重。表面展示酶的最适pH为9.0,最适反应温度为40°C,表面展示酶热稳定性较游离酶有较大提高,在40°C孵育1 h后仍能保持90%以上的酶活力。【结论】以上结果表明细菌表面展示技术为脂肪酶固定提供了一个很有前景的替代方法。(本文来源于《微生物学通报》期刊2012年03期）
孟姗[8]（2011）在《丁香假单胞菌MB03冰核蛋白基因低温依赖型启动子转录活性的研究》一文中研究指出丁香假单胞菌(Pseudomonas syringae)是多种植物中常见的一种病原细菌,可引发宿主植物发生超敏反应(Hypersensitive response)或发生冻害病变,其中导致植物组织和细胞内的水分形成冰晶的致病分子——冰核蛋白(Ice nucleation protein, INP),就是该菌在受到信号分子激发后所合成的一种诱导表达型分泌蛋白。因此,研究该蛋白基因的转录活性与调控因子,对于深入理解丁香假单胞菌冰核活性的发生与致病机制,以及发掘相应的植病生防机制将具有重要意义。丁香假单胞菌MB03是一株具有高冰核活性的菌株,其冰核基因inaQ已通过原位杂交的方法克隆(GenBank登录号：EU360731)。本研究以该冰核基因的启动子作为研究对象,以绿色荧光蛋白(Green fluorescence protein, GFP)为报告蛋白,研究了在不同培养基、不同培养温度和不同外源化学诱导物作用下,该启动子分别在丁香假单胞菌、大肠杆菌(Escherichia coli)和恶臭假单胞菌(P. putida AB92019)中的转录与表达活性,从而确定了该启动子为一种低温依赖型启动子,且启动活性受3,5-二硝基水杨酸等外源诱导物显着性调控。冰核基因inaQ包含上游522 bp序列和完整的编码1200 aa的结构基因。通过生物信息学方法分析发现,inaQ启动子序列与3个已报道的冰核基因启动子有较高的相似性。对其启动子的特征区域进行预测,得到了与大肠杆菌启动子的-35区和-10区类似的保守序列,分别为TTGCTG (B box)和GGTTAAATT (Abox)。利用RT-qPCR对冰核基因inaQ转录活性进行相对定量分析,通过分别在16℃和28℃培养条件下其生长阶段的基因转录活性水平的比较,结果显示该启动子在16℃培养下冰核基因的转录水平明显高于丁香假单胞菌的正常培养温度28℃下的水平,在对数生长中后期前者是后者的将近两倍,而到稳定期中期则达到接近6倍,并且在16℃下有利于冰核基因的持续转录表达。利用SOE-PCR的方法将冰核基因上游522 bp启动子序列和绿色荧光蛋白(GFP)融合片段,插入到载体质粒pUCP18的PstⅠ/EcoR I位点,获得了重组载体PInaQ522GFP,用于在大肠杆菌和恶臭假单胞菌中分析inaQ启动子活性。通过显微镜观察和SDS-PAGE的检验,在大肠杆菌和恶臭假单胞菌中均可以表达GFP蛋白,并使细胞产生可见荧光,证明全长的启动子具有启动活性。通过删除全长启动子不同预测的活性区,得到2个长度分别为297 bp和111 bp的截短的启动子片段,并分别构建得到表达GFP的重组质粒,经过荧光活性检测,发现全长的启动子的重组菌和297bp截短启动子的重组菌的荧光强度分别为356.7和352.5,而含有111bp的截短启动子则未检测到荧光,证明启动子的2个活性区(A box和B box)直接决定了是否转录作用,而其远端序列长度则对对启动子活性影响不大。选择了1种在大肠杆菌和假单胞菌等革兰氏阴性菌中广泛存在的oprL基因的启动子为对照,比较了两者在常规培养条件下的启动活性,在大肠杆菌中含有冰核基因启动子的重组菌最大荧光强度为456.7,平均荧光强度值为330.1而含有oprL基因启动子的荧光强度分别为323.7和188.9,说明在大肠杆菌中冰核基因启动子明显优于oprL基因启动子,而在恶臭假单胞菌中,两者有相近活性分别为平均荧光强度分别为99.2和130.9,oprL启动子略优。选择不同的培养基,不同的温度和不同的外源化学诱导物对启动子进行诱导,探究该冰核基因启动子的表达条件。在培养基选择方面,采用KB培养基和NAD培养基培养时,比相同条件下LB培养荧光强度提高了32.5%和27.3%。在温度方面,16℃培养时,大肠杆菌和恶臭假单胞菌稳定期中期的荧光强度分别较28℃提高17.9%和30.1%,说明在相对较低温度下,该基因有相对较高的表达活性,起到了上调作用。在诱导物方面,不同诱导物对该启动子的活性具有上调和下调作用,其中具有上调作用的分别是硫酸钠、硝酸钠、3,5-二硝基水杨酸、对苯二酚、4-羟基-3硝基苯乙酸,其中3,5-二硝基水杨酸具有最大上调活性。研究亦证实芥菜籽的热水抽提物和4-羟基-3硝基苯乙酸具有类似的诱导活性,通过高效液相分析诱导物的化学组成,初步证实了4-羟基-3硝基苯乙酸是芥菜籽热水抽提物中的活性成分而诱导了该启动子的转录活性。(本文来源于《华中农业大学》期刊2011-06-01）
李友国,付玮,雷磊,方彩云,谢福莉[9]（2010）在《一种基于黄单胞菌冰核蛋白细菌表面展示体系的建立及其初步应用研究》一文中研究指出本研究以野油菜黄单胞菌为实验材料,克隆了其具有细菌表面展示活性的冰核蛋白N末端结构域(inaXN),并以猴金属硫蛋白α结构域四聚体(MT4α)为靶蛋白,采用细胞分级、重金属吸附、SDS-PAGE及Invision~(TM)His-tag In-gel stain、免疫荧光等实验测定技术证实了目标融合蛋白可在重组菌细胞表面成功展示。利用重金属镉响应启动子CadR,构建了诱导表达型细菌表面展示载体pCIM。通过电转化将pCIM导入具有多种重金属抗性的恶臭假单胞菌株X4而获得目标工程菌。镉胁迫生长曲线测定结果表明:工程菌X4/pCIM比对照菌具有更高(本文来源于《第十一届全国土壤微生物学术讨论会暨第六次全国土壤生物与生物化学学术研讨会第四届全国微生物肥料生产技术研讨会论文（摘要）集》期刊2010-10-18）
郭恒,刘娟,李慧萍,王学林,孙树民[10]（2010）在《基于冰核蛋白的狂犬病毒糖蛋白细菌表面展示》一文中研究指出为验证冰核蛋白表面展示系统的可行性与优越性,将编码狂犬病毒(Rabies virus,RV)主要免疫保护性抗原糖蛋白G基因片段融合到丁香假单胞菌冰核蛋白截断的N端,构建表面展示载体pET28a-INP-RVG。转化大肠埃希菌BL21(DE3)后16℃低温诱导表达,SDS-PAGE检测表明在约78 ku和56 ku处有明细的蛋白带出现,大小与理论值相符。完整细胞ELISA实验结果表明,重组蛋白在大肠埃希菌表面成功展示。为进一步研制基于沙门菌的多抗原表位展示性重组疫苗、新型狂犬病疫苗奠定基础。(本文来源于《动物医学进展》期刊2010年S1期）
冰核蛋白论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
为了建立一个自主、高效的细菌表面展示体系,利用野油菜黄单胞菌冰核蛋白N端结构域,将短小芽孢杆菌脂肪酶展示于大肠杆菌Rosetta 2(DE3)表面.采用细胞分级、脂肪酶活测定和His-tag In-gel stain分析等检测了重组蛋白的表达情况,并进一步检测了不同底物、温度、pH和有机溶剂对酶活稳定性的影响.结果显示融合蛋白在大肠杆菌细胞外膜成功展示,重组菌脂肪酶活为(74.6±4.5)U/g冻干细胞,展示水平为每个细胞表面19 267个脂肪酶分子;展示酶对中长链脂肪酸酯表现出较高的水解活性,最适pH为11.0,最适温度为40℃,且在40℃保温一周仍保持80%以上的酶活.本研究表明基于野油菜黄单胞菌冰核蛋白N端的展示体系是一种高效、稳定的细菌表面展示体系.
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
冰核蛋白论文参考文献
[1].罗砚曦,蒋依俐,阎辉.利用冰核蛋白N-端结构域在大肠杆菌表面展示人存活蛋白[J].中国细胞生物学学报.2017
[2].付玮,李友国,李一星.基于黄单胞菌冰核蛋白N端的表面展示体系建立[J].应用与环境生物学报.2014
[3].王经.影响丁香假单胞菌冰核蛋白InaQ分泌活性效应基因的研究[D].华中农业大学.2014
[4].张秋香,侯慧丽,芦颖,陈卫,钟瑾.基于冰核蛋白的乳酸菌表面展示系统的构建[J].微生物学报.2013
[5].梁波,李亮,刘爱骅.基于冰核蛋白的木糖脱氢酶细菌展示系统的构建及其在D-木糖检测中的应用[C].中国化学会第28届学术年会第9分会场摘要集.2012
[6].周世豪,袁哲明.冰核蛋白和昆虫抗冻蛋白在虫体抗寒中的作用[J].中国农学通报.2012
[7].陶站华,张搏.利用冰核蛋白N末端结构域在大肠杆菌表面展示粘质沙雷氏菌脂肪酶[J].微生物学通报.2012
[8].孟姗.丁香假单胞菌MB03冰核蛋白基因低温依赖型启动子转录活性的研究[D].华中农业大学.2011
[9].李友国,付玮,雷磊,方彩云,谢福莉.一种基于黄单胞菌冰核蛋白细菌表面展示体系的建立及其初步应用研究[C].第十一届全国土壤微生物学术讨论会暨第六次全国土壤生物与生物化学学术研讨会第四届全国微生物肥料生产技术研讨会论文（摘要）集.2010
[10].郭恒,刘娟,李慧萍,王学林,孙树民.基于冰核蛋白的狂犬病毒糖蛋白细菌表面展示[J].动物医学进展.2010
论文知识图
