药物研究
摘要：目的初步建立母鸡油制三七饮片的质量标准。方法 采用HPLC 测定饮片中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1 及三七皂苷R1 的含量；对10 批次三七生品及制品的水分、总灰分、酸不溶性灰分、醇溶性浸出物、Rg1、Rb1 和R1 进行含量测定，并进行分析评价。结果建议母鸡油制三七饮片水分不超过3.9%，总灰分不超过3.0%，酸不溶性灰分不超过0.9%，以干品计醇溶性浸出物不得少于14.2%，人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1 及三七皂苷R1 的总含量不得少于3.4%。结论初步建立母鸡油制三七饮片量化质控标准评价体系。
关键词：三七；质量标准；皂苷；HPLC
0 引言
三七为五加科植物三七Panax notoginseng（Burk.）F.H.Chen的干燥根和根茎。甘、微苦，温。归肝、胃经。具有散瘀止血，消肿定痛等功效。可用于咯血，吐血，胸腹刺痛，跌扑肿痛等[1]。主要成分有皂苷类、多糖类、黄酮类等成分[2-4]，其有效成分以皂苷类和三七素为主，具有止血、补血、抗炎、抗肿瘤、提高免疫力[5-8]等功效。近年来，三七作为药食同源的药材，存在“生熟异治”的特点，是很多成药的原料之一，是临床常用大品种[9-10]，多生用，但市场上的熟三七日渐增多。1985 年至今，各版《中国药典》仅收录三七粉作饮片规格，其他标准均未对三七饮片进行描述和规定。熟三七炮制方法有焙、炒、蒸、油炸法等[11-13]。母鸡油制三七为贵州特色炮制方法 取净三七，分开大小块，用母鸡油炸至表面棕黄色，取出，沥去油，放凉，研细粉。该特色炮制方法收载于《贵州省中药饮片炮制规范》。本研究使用贵州特色炮制方法对 10 批不同产地的三七生品进行炮制，并进行质量标准研究，建立母鸡油制三七的质量标准，为三七规范化生产及质量控制提供科学依据。
通过对10所普通本科院校旅游管理专业人才培养方案的调查分析，可以发现，目前旅游管理专业实践教学体系存在一些共性的问题。
1 材料及仪器
1.1仪器
UltiMate3000 高效液相色谱仪（赛默飞）；ME204E 型万分之一电子天平（上海梅特勒-托利多）；HH-2 型数显恒温水浴锅（常州澳华）；HS10260D 型超声波清洗机（天津恒奥）；CS101-1C 型鼓风干燥箱（重庆四达）。
1.2试剂
乙腈为色谱纯；水为哇哈哈纯净水；甲醇、浓硫酸为分析纯；其它试剂均为分析纯。人参皂苷Rb1 对照品（批号110704-201625）、人参皂苷Rg1（批号：110703-201731）、三七皂苷R1（批号：110745-201619）均购自中国食品药品检定研究院。
与JME发病有关的神经递质，主要包括乙酰胆碱、GABA。乙酰胆碱主要存在于神经肌肉接头处，其受体包括烟碱和毒蕈碱受体。GABA是一种抑制性递质，JME患者中常染色体GABA al受体亚基（A322D）存在突变，而A322D突变的GABA受体产生的抑制电流较正常受体产生的电流小，导致癫痫发生。Hattingen等[12]发现，JME患者中丘脑GABA浓度低于正常，而额叶中GABA增高，也证实了JME患者脑中神经递质的功能障碍。
1.3药材
各产地药材经贵阳中医学院魏升华教授鉴定为Panax notoginseng (Burk.) F.H.Chen的干燥根和根茎，三七样品信息见表1。
表1 十批三七样品信息表
样品编号 产地 头数 样品编号 产地 头数SQ-01 云南文山县 35 头 SQ-06 云南文山县 50 头SQ-02 云南文山县 30 头 SQ-07 云南文山县 40 头SQ-03 云南文山县 无数头 SQ-08 云南砚山县 50 头SQ-04 云南文山县 80 头 SQ-09 云南砚山县 68 头SQ-05 云南文山县 60 头 SQ-10 云南砚山县 80 头
1.4样品制备
2.2.2 对照品溶液制备
2 方法与结果
2.1检查
2.1.1 水分
按照 2015 版中国药典四部通则 0832 项下“水分测定法”测定，结果见表4。
2.1.2 灰分
按照 2015 版中国药典四部通则 2302 项下“灰分测定法”测定总灰、酸不溶性灰分，结果见表4。
又黑又壮的警卫连长陈大勇手里端着汤姆逊，腰上还别着一把匣子炮，他蹑手蹑脚走过十数米远的地方，感觉四周安全了，再朝后挥挥手。
在快慢车运营模式下，采用站站停模式的慢车需要在部分避让站待避，以便让快车不停站通过。快车虽然节省了直达客流的出行时间，但同时增加了慢车乘客的等待时间。对于1条拟开行快慢车的线路而言，应根据全日快慢车的开行计划，分别计算这两项时间。
2.2.4 线性关系考察
2.2皂苷含量测定[1]
色谱柱：WondaSil C18-WR （4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：乙腈-水进行梯度洗脱，洗脱程序如表2；检测波长为203 nm；流速：1 mL/min 进样量10μL。
Hello Time 2 sec Max Age 20 sec Forward Delay 15 sec
2.2.1 色谱条件
表2 洗脱程序表
时间/min 流动相乙腈/% 水/%0～12 19 81 12～60 19 →36 81 →64
取净三七，分开大小块，用母鸡油炸至表面棕黄色，取出，沥去油，放凉，研细粉。
精密称取人参皂苷Rg1 对照品4.00 mg、人参皂苷Rb1 对照品3.90 mg 及三七皂苷R1 对照品1.00 mg，加甲醇制成每1 mL 含人参皂苷Rg1 0.40 mg、人参皂苷Rb1 0.39 mg、三七皂苷R1 0.10 mg的混合溶液，即得。
2.1.3 浸出物
2.2.3 供试品溶液制备
采用宝玑游丝，摆轮安装四颗补偿螺丝。调校时秒针可以归零。值得一提的是，这款表是该品牌的首款设计师签名表，设计师的名字取代了原有的品牌名。据设计师本人介绍：这款表体现了他在钟表制造中所珍视的所有价值：“关注每一个可见和不可见的细节，还原最纯粹的时间本质。”该款表的境外参考定价为玫瑰金55,500瑞郎，铂金为58,000瑞郎。
反向传播算法（BP算法）与人工神经网络（ANN）相结合，就产生了BP神经网络算法。它由输入层、中间层（隐含层）和输出层构成，隐含层可以有一层或多层，每层可以由若干神经元构成。在网络学习训练的过程中，输出值与期望值的误差进行反向传播，直到第一层隐含层，即最靠近输入层的隐含层为止，在反向传播的过程中，对神经元间的连接权重进行调整。BP神经网络结构图如图2所示。
取样品粉末（过四号筛）约0.6 g，精密称定，加入甲醇50 mL，称定重量，放置过夜，置80 °C 水浴上保持微沸2 小时，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补重，摇匀，过滤，用 0.45 μm 的微孔虑膜滤过，即得。
按照 2015 版中国药典四部通则 2201 项下“浸出物测定法”，测定醇溶性浸出物，以甲醇作溶剂，结果见表4。
精 密 量 取 混 合 对 照 品 溶 液4、6、8、10、12、14、16 μL，在“2.2.1”的色谱条件下，依次进样进行测定，以峰面积Y，进样质量（X）进行线性回归，得回归方程为三七皂苷R1：y=5.5444x-0.2565(r =0.9998)，人 参 皂 苷Rg1：y=6.5382x-0.0559(r=0.9998)人参皂苷Rb1：y=4.4398x-0.812(r=0.9996)，三者的r 值均大于0.999。结果表明三七皂苷R1 在 0.40～1.60 μg、人参皂苷Rg1 在1.60～6.40 μg、人参皂苷Rb1 在1.56～6.24 μg 内成良好的线性关系。
2.2.7 稳定性试验
取样品SQ-05 粉末6 份，每份约0.6 g，精密称定，按2.2.3 项下方法制备供试品溶液，分别进样测定峰面积积分值，得三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1 的RSD 分别为0.77、0.33、1.57%。结果表明，测定方法重现性良好。
2.2.6 精密度试验
取样品SQ-05 粉末1 份约0.6 g，精密称定，按2.2.3 项下方法制备供试品溶液，进样6 次，测定，得三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1 的峰面积的RSD 分别为1.21、1.68、1.83%。结果表明，精密度良好。
2.2.5 重复性试验
取样品SQ-05 粉末1 份约0.6 g，精密称定，按2.2.3 项下方法制备供试品溶液，分别在0、2、4、6、8、10、12 h，进样，测定，得三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1 的峰面积的RSD 分别为1.77、2.07、2.09%。结果表明，供试品溶液在12 h 内稳定。
2.2.8 加样回收率试验
补救措施：在浇筑混凝土的过程中一旦发现浮笼现象，则需立马减慢浇筑速度，并用挖掘机或装载机等重载机械增加钢筋笼竖向荷载，使之下降归位，并且将钢筋笼的主筋与护筒进行焊接处理，使之形成整体，防止再次上浮，然后加快浇筑速度，直至完成。如进行此操作后仍有上浮现象，则只能将钢筋笼提出，作断桩论。
取已知含量的样品SQ-05 粉末6 份，每份约0.3 g，精密称定，分别按1：1 比例精密加入三七皂苷R1 对照品、人参皂苷Rg1 对照品、人参皂苷Rb1 对照品适量，得三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1 的平均回收率分别为94.66 %、94.26 %、98.41 %，RSD 分别为2.13、1.54、1.41 %。表明方法测定准确度较高，结果见表3。
表3 加样回收率试验( n=6)
成分 称样量/g样品中的含量/mg加入对照品量/mg测得的含量/mg回收率/%平均回收率/% RSD/%三七皂苷R1 0.3000 2.411 2.42 4.66 92.93 94.66 2.13 0.3001 2.411 2.42 4.68 93.76 0.3001 2.411 2.42 4.65 92.52 0.3000 2.411 2.42 4.70 94.59 0.3000 2.411 2.42 4.77 97.48 0.3001 2.411 2.42 4.75 96.65人参皂苷Rg1 0.3000 9.015 9.03 17.40 92.86 94.26 1.54 0.3001 9.015 9.03 17.63 95.40 0.3001 9.015 9.03 17.58 94.85 0.3000 9.015 9.03 17.41 92.97 0.3000 9.015 9.03 17.43 93.19 0.3001 9.015 9.03 17.71 96.29 0.3000 8.722 8.72 17.21 97.34 98.41 1.41 0.3001 8.722 8.72 17.25 97.80 0.3001 8.722 8.72 17.42 99.75 0.3000 8.722 8.72 17.24 97.68 0.3000 8.722 8.72 17.21 97.34 0.3001 8.722 8.72 17.49 100.55人参皂苷Rb1
2.2.9 样品含量测定
分别取10 批次三七饮片和母鸡油制三七饮片粉末，照2.2.3项下方法制备供试品溶液，精密吸取10 μL，照2.2.1 项下色谱条件，依次测定各产地中人参皂苷Rg1，人参皂苷Rb1，三七皂苷R1的含量，以干品计算，结果见表4。
表4 三七生品与制品各项测定指标含量结果表（%）
生品 制品水分 灰分 酸不溶性灰分 醇溶性浸出物 Rg1、Rb1、R1编号总百分含量 水分 灰分 酸不溶性灰分 醇溶性浸出物 Rg1、Rb1、R1总百分含量样品1 10.92 2.63 1.18 23.16 7.8 5.83 2.66 1.09 23.22 7.0样品2 8.41 2.48 0.94 25.49 7.8 5.55 2.50 0.71 21.55 6.8样品3 11.63 2.40 0.85 20.19 6.3 2.45 2.64 0.94 17.06 3.4样品4 11.47 2.14 0.65 16.88 5.8 2.51 2.41 0.82 16.47 3.1样品5 10.06 2.25 0.75 17.09 7.5 2.71 2.34 1.01 16.49 4.0样品6 11.91 2.03 0.53 17.69 7.5 2.48 2.17 0.51 16.39 3.4样品7 10.21 2.18 0.62 18.23 8.4 2.50 2.36 0.61 17.22 3.7样品8 11.03 2.23 0.44 18.17 7.5 2.69 2.33 0.44 16.55 3.8样品9 10.74 2.21 0.66 16.90 6.9 2.46 2.41 0.76 16.37 4.0样品10 11.41 1.98 0.78 16.11 6.0 3.04 2.28 0.70 16.55 3.3
3 结论与讨论
10 批母鸡油三七制品水分平均值为3.22%，总灰分平均值为2.41%，酸不溶性灰分平均值为0. 76%，浸出物平均值为17.79%，Rg1、Rb1、R1 含量总和的总平均值为4.3%。根据实验结果及中药饮片质量标准制定原则，拟定母鸡油制三七饮片的质量标准为：水分不得过3.9%，总灰分不得过3.0%，酸不溶性灰分不得过0.9%，醇溶性浸出物不得少于14.2%；以干品计，人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1 及三七皂苷R1 的总含量不得少于3.4%。由结果分析可知：炮制品的水分均较低，制品减失水分为34%～79%，各批次生品与制品水分差异较大；炮制品的总灰分含量均较生品大，炮制品浸出物含量大多小于生品浸出物含量，变化量小于18%；酸不溶性灰分含量大多大于炮制品，变化量为1%～34%；10 批次总皂苷含量均减少，制品减少10%～45%。各批次饮片水分、灰分、皂苷含量在生品与制品间的差值变化趋势相似。饮片各指标含量变化可能受水分影响较大，应严格控制该变量。生品三七与母鸡油制三七在临床上的差异是否由皂苷成分比例和含量发生改变或产生其他有效成分还需进一步研究。
本研究中采用简便可靠的方法对10 批次三七生品饮片和母鸡油制三七饮片的水分、灰分、酸不溶性灰分、醇溶性浸出物、皂苷等指标进行研究及分析评价，初步建立母鸡油制三七饮片量化质控标准评价体系。
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Study on Quality Standards of Decoction Pieces of Panax Notoginseng Processed with Hen Oil
LIU Ya-Qin,ZHAO Jing,LI Wei*,ZHANG Min, WANG Xian-ju, DU Hong-zhi
(Guizhou university of traditional Chinese medicine, Guiyang Guizhou )
ABSTRACT:Objective To establish the quality standard of prepared slices of panax notoginseng processed with hen oil. Methods The contents of Rg1,Rb1and R1 were determined by HPLC.The contents of water,total ash,acid-insoluble ash,alcohol-soluble extractive,Rg1,Rb1and R1 were determined in 10 batches of Raw and processed products of panax notoginseng . And analysis and evaluation are carried out. Results It is suggested that the water content in the processed products shall not exceed 3.9%, the total ash content shall not exceed 3.0%, the acid-insoluble ash content shall not exceed 0.9%；the alcohol-soluble extractive shall not be less than 14.2%, the total content of Rg1,Rb1 and R1 in processed products shall not be less than 3.4%. Conclusion The evaluation system of the quantitative quality control standards for the processed products was established.
KEY WORDS: Panax notoginseng； Quality standards； Saponins； HPLC
中图分类号：R28
文献标识码：B
DOI:10.19613/j.cnki.1671-3141.2019.86.161
本文引用格式：刘娅琴,赵静,李玮,等.母鸡油制三七质量标准初步研究[J].世界最新医学信息文摘,2019,19(86):262-263.
基金项目：国家中医药管理局省级中药炮制技术传承基地项目：国中医药科技[2015]86 号；贵州省国内一流建设学科项目：（中药学）（GNYL[2017]008 号-7）；贵州省一流学科建设项目子课题项目（项目号：GNYL[2017]008 号-7-Y）。
作者简介：刘娅琴（1994-），女，在读硕士研究生，中药及民族药资源分类鉴定与质量控制。
通讯作者＊：李玮（1964-），男，教授，研究方向为中药炮制。
标签：皂苷论文; 人参论文; 灰分论文; 样品论文; 含量论文; 医药论文; 卫生论文; 中国医学论文; 中药学论文; 中药化学论文; 《世界最新医学信息文摘》2019年第86期论文; 国家中医药管理局省级中药炮制技术传承基地项目:国中医药科技[2015]86号 贵州省国内一流建设学科项目:(中药学)(GNYL[2017]008号-7) 贵州省一流学科建设项目子课题项目(项目号:GNYL[2017]008号-7-Y)论文; 贵州中医药大学论文;