转录因子AP-4基因真核表达载体构建及表达分析

论文摘要

本研究利用生物信息学分析AP-4与胃癌患者临床病理信息的相关性,根据GenBank中人AP-4基因cDNA序列设计并合成特异性引物,以胃癌细胞总RNA逆转录的cDNA为模板,利用高保真酶扩增AP-4基因CDS （Coding DNA sequence）序列并构建入pcDNA3.1+载体,并通过限制性内切酶酶切分析和测序法进行进一步验证;脂质体法将AP-4重组表达载体及对照pcDNA3.1+载体转染胃癌细胞,qRT-PCR（Quantitative real time polymerase chain reaction）和Western blotting检测分别检测AP-4在m RNA和蛋白水平的表达。生物信息学分析发现,AP-4的表达与胃癌分期及预后显著相关;酶切及测序分析表明,转录因子AP-4真核表达载体构建成功,并能够在胃癌细胞中实现转录和蛋白水平的高效表达。此研究为深入研究转录因子AP-4在胃癌等肿瘤发生发展中的作用及分子机制奠定了基础。

论文目录

• 1 结果与分析
•   1.1 转录因子AP-4在胃癌组织中呈现高表达且与胃癌分期及预后显著相关
•   1.2 AP-4 CDS区的PCR扩增
•   1.3 AP-4基因真核表达载体鉴定
•   1.4 qRT-PCR法检测AP-4表达载体在真核细胞中的转录水平
•   1.5 Western blotting鉴定AP-4基因真核表达载体在胃癌细胞系的表达
• 2 讨论
• 3 材料与方法
•   3.1 主要材料和试剂
•   3.2 转录因子AP-4的生物信息学分析
•   3.3 AP-4过表达载体的构建和鉴定
•   3.4 细胞培养及质粒转染
•   3.5 q RT-PCR法检测AP-4 mRNA的表达
•   3.6 Western blotting检测AP-4蛋白的表达
•   3.7 统计分析

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 吴华彰,公丕海,吴涛,赵云利,汤必奎,陈文静,刘牧林,樊红

关键词: 转录因子,载体构建,真核表达

来源: 基因组学与应用生物学 2019年05期

年度: 2019

分类: 基础科学,医药卫生科技

专业: 生物学,肿瘤学

单位: 蚌埠医学院生物科学系,东南大学医学院发育与疾病相关基因教育部重点实验室,蚌埠医学院第一附属医院胃肠外科

基金: 国家自然科学基金(21707002),安徽省高校自然科学研究项目(KJ2017A213,KJ2017A219,KJ2015B041by),大学生创新创业项目(201710367028,201610367002)共同资助

分类号: Q78;R735.2

DOI: 10.13417/j.gab.038.002270

页码: 2270-2275

总页数: 6

文件大小: 1662K

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