葡聚糖精胺阳离子聚合物论文-平渊,马强,陈建海

葡聚糖精胺阳离子聚合物论文-平渊,马强,陈建海

导读:本文包含了葡聚糖精胺阳离子聚合物论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献,主要关键词:葡聚糖-精胺阳离子聚合物,复合物,转染率

葡聚糖精胺阳离子聚合物论文文献综述

平渊,马强,陈建海[1](2007)在《葡聚糖-精胺阳离子聚合物基因载体体外基因转染的研究》一文中研究指出本文研究了葡聚糖-精胺阳离子聚合物(DSP)基因载体的性能及其对体外细胞基因的转染效率。氧化葡聚糖与精胺通过还原胺化法反应制得DSP,所得DSP与质粒pEGFP通过静电吸附形成复合物;当DSP/DNA质量比在4∶1至20∶1,能形成稳定的复合物,复合物粒径为162.6~187.9 nm,zeta电位则从+8.45 mV增至+39.6 mV;DSP能有效保护DNA不受核酸酶I降解,同时在一定pH范围内载体具有较强的缓冲能力;复合物在质量比为8∶1时对SMMC-7721肝癌细胞、BHK-21细胞的转染率分别达到最高,其效果均与Lipofectamine 2000相当。该研究表明葡聚糖-精胺阳离子聚合物是一种高效的基因载体。(本文来源于《药学学报》期刊2007年06期)

平渊[2](2007)在《葡聚糖—精胺阳离子聚合物基因载体体外基因转染的研究》一文中研究指出背景:基因治疗是通过插入治疗基因至病变细胞内而产生特定功能的蛋白质或抑制异常基因表达,从而治疗疾病的一种新方法。基因治疗中首要难题是缺乏高效、安全及靶向的基因导入系统,即能将治疗基因输送至特定的靶细胞内并高效表达的、无毒或低毒的基因载体。目前基因载体的主要分为两类:病毒载体或非病毒载体。虽然非病毒载体在体内外基因转染效率低于病毒载体,且基因表达时间短,但其具有低免疫原性、能携带大分子量DNA及生物安全性高等特点而倍受青睐。阳离子聚合物是非病毒载体中最有潜力的一类载体系统,它们可通过结构修饰改变其物理化学及生物学性质。目的:合成水溶性葡聚糖-精胺阳离子聚合物基因载体DSP,研究以DSP为粘合剂基因枪子弹的制备方法、DSP/DNA复合物和基因枪子弹的生物物理学性质、初步探讨复合物的理化性质对其转染能力的影响。方法:研究以平均分子量为40KDa的葡聚糖作为反应起始物,在室温下经高碘酸钾氧化6个小时,得到了氧化葡聚糖。通过盐酸羟胺法测定了氧化葡聚糖醛基的含量,根据此含量将一定摩尔比的精胺与氧化葡聚糖反应,该反应能生成含希夫氏碱的葡聚糖-精胺亚胺聚合物,所得到的亚胺聚合物在过量硼氢化钠作用下,可还原生成稳定葡聚糖—精胺共价阳离子聚合物(DSP)。DSP的总含氮量及伯胺的含量分别通过元素分析仪及TNBS法测定,并计算了所合成DSP的接枝度及支化度;FT-IR及~1H-NMR鉴定了DSP化学结构。采用激光粒度仪测定复合物溶液的粒径和Zeta电位;琼脂糖凝胶电泳法考察DSP与DNA的结合能力,及DSP对DNA在核酸酶Ⅰ作用下的保护能力;滴定法考察DSP的在酸性条件下的缓冲能力;复合物体外转染SMMC-7721肝癌细胞及BHK-21细胞,通过荧光倒置倒置显微镜观察复合物对两株细胞的转染情况并计算转染率;MTT法考察复合物细胞毒性。在此基础上,研究了以DSP为粘合剂制备的基因枪子弹,并通过琼脂糖凝胶电泳、核酸酶降解试验和MTT法,分别研究了子弹的稳定性,抗核酸酶Ⅰ能力及细胞毒性。结果:所合成氧化葡聚糖醛基含量为8.47±0.15 mmol/g,DSP接枝度为38.9%,支化度为38.5%。DSP能通过其带正电荷的氨基基团能与DNA带负电荷的磷酸基团通过静电吸附而将DNA完全压缩并中和其负电荷,使DNA缩合形成复合物。复合物质量比(DSP/DNA)在4∶1至20∶1之间,能形成稳定的复合物;复合物粒径范围为162.6-187.9nm,Zeta电位则从+8.45mV增至+39.6mV;DSP能充分压缩DNA并与之紧密吸附;DSP能有效保护DNA不受核酸酶Ⅰ降解,同时在一定pH范围内载体具有较强的缓冲能力;复合物在质量比为8∶1时(此时粒径为170.8±23.9nm,Zeta电位为+18.3±1.55mV),对SMMC-7721肝癌细胞、BHK-21细胞的转染率均达到最高,分别为27.0±4.42%及22.2±4.63%,其效果均与Lipofectamine 2000相当;复合物的毒性随质粒浓度及DSP/DNA质量比增加;所制备的基因枪子弹溶液在不同DSP/DNA.及DNA/金比例下均能粘合且能保护质粒不受核酸酶降解;金含量越高,DSP/DNA比例越大,细胞毒性则越大。结论:该研究表明DSP/DNA复合物的粒径、电位、稳定性、抗核酸酶能力、缓冲容量及细胞毒性对其转染能力具有一定影响。所合成的葡聚糖-精胺阳离子聚合物是一种制备工艺简单、高效、低毒的基因载体,有望今后用于临床基因治疗。以DSP制备的基因枪子弹抗核酸酶能力强,有望提高体内基因枪转染效率。(本文来源于《南方医科大学》期刊2007-04-10)

葡聚糖精胺阳离子聚合物论文开题报告

(1)论文研究背景及目的

此处内容要求:

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景,再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题,并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例:

背景:基因治疗是通过插入治疗基因至病变细胞内而产生特定功能的蛋白质或抑制异常基因表达,从而治疗疾病的一种新方法。基因治疗中首要难题是缺乏高效、安全及靶向的基因导入系统,即能将治疗基因输送至特定的靶细胞内并高效表达的、无毒或低毒的基因载体。目前基因载体的主要分为两类:病毒载体或非病毒载体。虽然非病毒载体在体内外基因转染效率低于病毒载体,且基因表达时间短,但其具有低免疫原性、能携带大分子量DNA及生物安全性高等特点而倍受青睐。阳离子聚合物是非病毒载体中最有潜力的一类载体系统,它们可通过结构修饰改变其物理化学及生物学性质。目的:合成水溶性葡聚糖-精胺阳离子聚合物基因载体DSP,研究以DSP为粘合剂基因枪子弹的制备方法、DSP/DNA复合物和基因枪子弹的生物物理学性质、初步探讨复合物的理化性质对其转染能力的影响。方法:研究以平均分子量为40KDa的葡聚糖作为反应起始物,在室温下经高碘酸钾氧化6个小时,得到了氧化葡聚糖。通过盐酸羟胺法测定了氧化葡聚糖醛基的含量,根据此含量将一定摩尔比的精胺与氧化葡聚糖反应,该反应能生成含希夫氏碱的葡聚糖-精胺亚胺聚合物,所得到的亚胺聚合物在过量硼氢化钠作用下,可还原生成稳定葡聚糖—精胺共价阳离子聚合物(DSP)。DSP的总含氮量及伯胺的含量分别通过元素分析仪及TNBS法测定,并计算了所合成DSP的接枝度及支化度;FT-IR及~1H-NMR鉴定了DSP化学结构。采用激光粒度仪测定复合物溶液的粒径和Zeta电位;琼脂糖凝胶电泳法考察DSP与DNA的结合能力,及DSP对DNA在核酸酶Ⅰ作用下的保护能力;滴定法考察DSP的在酸性条件下的缓冲能力;复合物体外转染SMMC-7721肝癌细胞及BHK-21细胞,通过荧光倒置倒置显微镜观察复合物对两株细胞的转染情况并计算转染率;MTT法考察复合物细胞毒性。在此基础上,研究了以DSP为粘合剂制备的基因枪子弹,并通过琼脂糖凝胶电泳、核酸酶降解试验和MTT法,分别研究了子弹的稳定性,抗核酸酶Ⅰ能力及细胞毒性。结果:所合成氧化葡聚糖醛基含量为8.47±0.15 mmol/g,DSP接枝度为38.9%,支化度为38.5%。DSP能通过其带正电荷的氨基基团能与DNA带负电荷的磷酸基团通过静电吸附而将DNA完全压缩并中和其负电荷,使DNA缩合形成复合物。复合物质量比(DSP/DNA)在4∶1至20∶1之间,能形成稳定的复合物;复合物粒径范围为162.6-187.9nm,Zeta电位则从+8.45mV增至+39.6mV;DSP能充分压缩DNA并与之紧密吸附;DSP能有效保护DNA不受核酸酶Ⅰ降解,同时在一定pH范围内载体具有较强的缓冲能力;复合物在质量比为8∶1时(此时粒径为170.8±23.9nm,Zeta电位为+18.3±1.55mV),对SMMC-7721肝癌细胞、BHK-21细胞的转染率均达到最高,分别为27.0±4.42%及22.2±4.63%,其效果均与Lipofectamine 2000相当;复合物的毒性随质粒浓度及DSP/DNA质量比增加;所制备的基因枪子弹溶液在不同DSP/DNA.及DNA/金比例下均能粘合且能保护质粒不受核酸酶降解;金含量越高,DSP/DNA比例越大,细胞毒性则越大。结论:该研究表明DSP/DNA复合物的粒径、电位、稳定性、抗核酸酶能力、缓冲容量及细胞毒性对其转染能力具有一定影响。所合成的葡聚糖-精胺阳离子聚合物是一种制备工艺简单、高效、低毒的基因载体,有望今后用于临床基因治疗。以DSP制备的基因枪子弹抗核酸酶能力强,有望提高体内基因枪转染效率。

(2)本文研究方法

调查法:该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法:用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法:通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法:通过调查文献来获得资料,从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法:依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法:对研究对象进行“质”的方面的研究,这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法:通过具体的数字,使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法:运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法:这是社会科学用来分析社会现象的一种方法,从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法:通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。

葡聚糖精胺阳离子聚合物论文参考文献

[1].平渊,马强,陈建海.葡聚糖-精胺阳离子聚合物基因载体体外基因转染的研究[J].药学学报.2007

[2].平渊.葡聚糖—精胺阳离子聚合物基因载体体外基因转染的研究[D].南方医科大学.2007

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