表面展示狂犬病病毒糖蛋白的重组乳酸菌的构建及其免疫原性的研究

论文摘要

为开发基于乳酸菌载体表达的新型狂犬病口服疫苗,合成狂犬病病毒糖蛋白主要抗原表位区基因RVG,并通过PCR方法在其C′端融合特异性树突状细胞（DC）靶向肽编码基因后插入到乳酸菌表达载体中,以融合无关肽编码基因为对照,分别构建表达RVG基因的重组乳酸菌pSIP-409-pgsA′-RVG-DCpep和p SIP-409-pgsA′-RVG-ctrl。在清酒乳杆菌素的诱导下,表达产物经Western-blot和免疫荧光鉴定后,对小鼠进行口服免疫,通过流式细胞术检测免疫后小鼠脾中树突状细胞和B细胞活化效率,用ELISA检测肠道内sIgA和血清IgG分泌量。结果显示,该抗原表位区在重组乳酸菌中得到了正确表达,并且可锚定于菌体表面,pSIP-409-pgsA′-RVG-DCpep能有效活化小鼠脾中的树突状细胞和B细胞;与其他组相比差异显著（P<0.05）,且肠道内sIgA和血清IgG分泌量显著高于其他组（P<0.05）,表明重组乳酸菌pSIP-409-pgsA′-RVG-DCpep能够更好地激活黏膜免疫反应,具有良好的免疫原性。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 质粒、细菌与实验动物
•   1.2 试剂
•   1.3 目的基因的克隆与序列分析
•   1.4 重组乳酸菌表面表达质粒的构建
•   1.5 重组乳酸菌表面表达质粒的Western-blot鉴定
•   1.6 重组乳酸菌表面表达质粒间接免疫荧光检测
•   1.7 重组乳酸菌免疫效果评价
• 2 结果
•   2.1 目的基因RVG-DCpep和RVG-ctrl的扩增及鉴定
•   2.2 重组表达质粒的构建
•   2.3 重组蛋白的Western-blot检测
•   2.4 间接免疫荧光检测
•   2.5 流式细胞术检测
•   2.6 ELISA检测
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 赵维静,赵建伟,胡译文,谢静,刘琼,王春凤,王建忠,钱爱东

关键词: 乳酸菌,狂犬病病毒糖蛋白,黏膜免疫

来源: 中国兽医科学 2019年04期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 吉林农业大学动物科学技术学院吉林省动物微生态制剂工程研究中心动物生产及产品质量安全教育部重点实验室

基金: 国家重点基础研究发展计划(973)项目(2017YFD0501000),国家自然科学基金项目(31672528,31602092),吉林省科技发展计划项目(20160519011JH,20170204034NY,20180201040NY),吉林省产业创新专项资金项目(2016C063),吉林农业大学博士启动基金项目(201703)

分类号: S852.65

DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2019.0072

页码: 432-439

总页数: 8

文件大小: 1620K

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