小鼠Cdc25B基因的真核表达载体构建及鉴定

论文摘要

目的构建含有小鼠Cdc25B基因的真核表达载体pcDNA3.1-3xflag-Cdc.25B,并观察和验证其在真核细胞中的表达。方法目的基因Cdc25B经化学合成后,定向克隆至pcDNA3.1（+）真核表达载体中,经过限制性内切酶KpnⅠ和ApaⅠ进行双酶切和测序鉴定,构建真核表达载体pcDNA3.1-3xflag-Cdc25B,应用脂质体法转染HEK293细胞,通过Western blot检测细胞内Cdc25B的表达。结果 pcDNA3.1-3xflag-Cdc25B真核表达载体构建成功,将其转染HEK293细胞48 h,提取细胞蛋白,利用Western blot检测到细胞内Cdc25B的表达,并且测序结果与预期结果一致。结论成功构建了真核表达载体pcDNA3.1-3xflag-Cdc25B。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•   1.2 试剂与仪器
•   1.3 实验方法
•     1.3.1 目的基因的获取
•     1.3.2 载体双酶切:
•     1.3.3 目的片段与载体连接
•     1.3.4 连接产物转化感受态细胞
•     1.3.5 用质粒小提试剂盒提取质粒
•     1.3.6 质粒酶切鉴定
•     1.3.7 细胞培养和转染
•     1.3.8 Western blot检测pcDNA3.1-3xflag-Cdc25B的表达
• 2 结果
•   2.1 真核表达载体pcDNA3.1-3xflag-Cdc25B的构建及鉴定
•   2.2 真核表达载体pcDNA3.1-3xflag-Cdc25B在HEK293细胞中的表达
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 周晓敏,孟峻,刘岚清

关键词: 真核表达载体,细胞

来源: 山西医科大学学报 2019年08期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学

专业: 生物学

单位: 内蒙古医科大学附属医院临床检验诊断学教研室,内蒙古医科大学附属医院检验科

基金: 国家自然科学基金资助项目(81360109,81660267),内蒙古自然科学基金资助项目(2013MS1163)

分类号: Q78

DOI: 10.13753/j.issn.1007-6611.2019.08.016

页码: 1112-1115

总页数: 4

文件大小: 286K

下载量: 211