导读:本文包含了内毒素耐受论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:牙周炎,牙周膜成纤维细胞,内毒素耐受,缺氧
内毒素耐受论文文献综述
武曦,张纲,冯晓丹,冯小倩,谭颖徽[1]（2019）在《缺氧通过HIF-1α抑制hPDLFs内毒素耐受》一文中研究指出目的:观察缺氧对人牙周膜成纤维细胞(human Periodontal Ligament Fibroblasts,hPDLFs)内毒素耐受(Endotoxin Tolerance,ET)的影响并初步探讨其可能作用机制。方法:人牙周膜经组织块和胰蛋白酶消化,原代分离培养hPDLFs并鉴定后,给予缺氧诱导,检测其炎症因子白介素-6(Interleukin 6,IL-6)和白介素-8(Interleukin 8,IL-8)的分泌情况。进一步在常氧环境下通过慢病毒过表达增强缺氧诱导因子-1α(Hypoxia Inducible Factor 1α, HIF-1α)表达或在缺氧环境下利用特异性抑制剂YC-1 (3-(50-Hydroxymethyl-20-furyl)-1-benzylindazole)抑制hPDLFs中HIF-1α表达,分析hPDLFs炎症因子IL-6和IL-8的分泌情况的变化。结果:①缺氧时,脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)再次刺激hPDLFs分泌炎症因子白介素IL-6、IL-8没有明显减少(P>0.05),提示hPDLFs的ET能力受到抑制。②常氧环境下,与HIF-1α未过表达组相比,过表达组的hPDLFs受到LPS再次刺激后,其分泌炎症因子IL-6或IL-8的能力并未显着降低(P>0.05);而在缺氧环境下,hPDLFs HIF-1α表达受到抑制后,LPS再次刺激可以显着抑制hPDLFs分泌IL-6或IL-8(P<0.05)。结论:缺氧可能通过诱导HIF-1α抑制hPDLFs的ET,调节hPDLFs的免疫应答,从而加重牙周组织的免疫损伤。(本文来源于《现代生物医学进展》期刊2019年19期）
陈雪,胡迎春,钟武[2]（2019）在《内毒素耐受相关基因的生物信息学分析》一文中研究指出目的搜寻内毒素耐受相关的核心基因,探讨其在脓毒症中产生及发展的内在机制。方法从GEO数据库下载raw264. 7细胞相关基因表达谱数据GSE8621,筛选出其中的脓毒症模型与内毒素耐受模型的样本芯片数据,将其分为脓毒症组和内毒素耐受组,运用在线数据分析软件GCBI对该芯片数据进行处理,筛选出两组间的差异基因并对差异基因进行基因本体论(GO)功能富集分析、京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路富集分析、基因共表达分析,通过STRING在线平台进行蛋白质的相互作用分析。结果两组数据进行对比后,共有2 584个差异基因被找到(P <0. 05);与脓毒症组相比,内毒素耐受组中有1 618条下调基因、966条上调基因。结果表明差异表达基因主要参与了转录的调节、细胞的凋亡以及蛋白质的磷酸化等生物进程,而功能通路分析显示这些差异基因主要集中于代谢相关通路、MAPK信号通路、PI3K-Akt信号通路、肿瘤相关信号通路、Jak-STAT信号通路、NF-κB信号通路、TLRs信号通路等,并且基因Pik3r2、Nfkb1、Plcg2、Gnai3、Rac3、Src、Rnd1、Edn1、Socs3、Il10被筛选为核心基因。结论通过基因芯片对脓毒症组及内毒素耐受组的转录组学进行测序、分析,发现两组之间的差异基因,通过网络模块的建立,将基因Pik3r2、Nfkb1、Plcg2、Gnai3、Rac3、Src、Rnd1、Edn1、Socs3、Il10筛选为与内毒素相关的核心基因,这其中包括已经被证实的与脓毒症密切相关的基因及部分未被证实的基因,这为脓毒症的预防和治疗提供了新的方向。(本文来源于《山西医科大学学报》期刊2019年06期）
李岩[3]（2019）在《内毒素耐受致中性粒细胞跨内皮迁移障碍及潜在机制研究》一文中研究指出研究目的脓毒症是由严重感染引起的系统性炎症反应综合征,是重症监护病房较常见的疾病和死亡原因之一,而脓毒症免疫抑制是脓毒症患者主要的致死原因。在脓毒症免疫抑制期,免疫细胞常常有内毒素耐受的表现。中性粒细胞是人体血液循环中数量最多的固有免疫细胞,作为机体的第一道防线,中性粒细胞在感染初期即可迅速穿越血管内皮细胞进入感染部位,通过脱颗粒、呼吸爆发以及形成中性粒细胞胞外诱捕网络等多种方式有效清除病原体。然而大量研究证明,严重脓毒症时由于免疫系统功能紊乱,中性粒细胞对感染部位释放的趋化因子反应性显着性降低,跨内皮迁移能力下降,无法发挥其清除病原菌的能力;同时,由于中性粒细胞在脏器微循环中的过度聚集、阻塞,会进一步导致脏器发生微循环障碍,进而促进多器官功能衰竭的发生。在脓毒症时如何增强和改善中性粒细胞迁移功能,并由此改善微循环障碍导致的脏器损伤和脓毒症预后成为这一领域研究的新热点。通过对脓毒症免疫抑制期患者中性粒细胞基因芯片结果的再分析,我们发现已知具有调节细胞迁移功能的蛋白—迁移侵袭抑制蛋白(migration and invasion protein,MIIP),在脓毒症免疫抑制期患者的中性粒细胞中基因表达明显上调。MIIP是一种新发现的抑制细胞迁移和侵袭的蛋白,可以通过多种途径抑制细胞的迁移能力。虽然目前对MIIP的研究主要集中在肿瘤侵袭和转移机制等领域,但有多项研究结果提示MIIP可能参与炎症反应的调节。组蛋白去乙酰化酶6(histone deacetylase 6,HDAC6)对于炎症反应中巨噬细胞和T细胞的功能调节具有重要意义,而MIIP可以与HDAC6结合,抑制其去乙酰化酶的能力。此外,NF-κB的活化及相关细胞因子的基因表达也会受到MIIP的调控。因此,我们推测MIIP可能导致脓毒症中性粒细胞迁移障碍。本研究目的旨在探讨细胞水平上内毒素耐受对中性粒细胞跨内皮迁移能力的影响及其潜在机制,通过对潜在机制的初步探讨希望能从改善中性粒细胞跨内皮迁移功能的角度为脓毒症免疫抑制期患者提供临床治疗新思路和新靶点。研究方法1、鉴于中性粒细胞本身易凋亡的特性,采用二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)诱导HL-60分化而来的类中性粒细胞来替代正常的中性粒细胞。1.3%DMSO诱导HL-60 5d,使其分化为类中性粒细胞;获得的细胞进行台盼蓝染色,分析细胞活性,确保细胞活度大于95%。2、将类中性粒细胞分为Control组(PBS+PBS)、LPS组(PBS+LPS)和ET组(LPS*+LPS)。处理结束后,收集上清和细胞。3、将类中性粒细胞分为Control siRNA Control组、Control siRNA LPS组、Control siRNA ET组、MIIP siRNA Control组、MIIP siRNA LPS组和MIIP siRNA ET组。处理结束后,收集上清和细胞。4、将类中性粒细胞分为Control siRNA ET组、Control siRNA ET+Tubastatin A组、MIIP siRNA ET组和MIIP siRNA ET+Tubastatin A组。处理结束后,收集上清和细胞。5、在2、3、4条件下,使用Transwell检测各组类中性粒细胞跨内皮迁移能力的变化。6、在2的条件下运用qRT-PCR检测下各组细胞中MIIP mRNA的表达。7、在2、3的条件下运用WB检测各组细胞MIIP蛋白的表达;在3的条件下运用WB检测各组细胞HDAC6蛋白的表达;在3、4条件下运用WB检测各组细胞微管蛋白α-tubulin及其乙酰化和p65及其磷酸化的表达。8、在2的条件下,运用ELISA检测各组细胞上清中TNF-α的表达;在3、4条件下,运用ELISA检测各组细胞上清中IL-8及MCP-1的表达情况。9、选用GraphPad Prism 7.0软件处理数据,并进行统计学分析。计量资料以均数±标准差(x±s)的形式表示,两组间差异比较采用t检验,P<0.05视为差异具有统计学意义。实验结果1.ET组类中性粒细胞与LPS组、Control组相比,其迁移数量明显降低,并且随着诱导内毒素耐受剂量的增加,其迁移能力逐渐减弱。MIIP的mRNA及蛋白含量与细胞迁移能力的变化趋势具有一致性。基因芯片结果分析中也发现,脓毒症免疫抑制期患者中性粒细胞中MIIP基因表达增加。2.与Control siRNA ET组相比,抑制MIIP表达可以一定程度改善内毒素耐受组细胞跨内皮迁移障碍,不影响Control组和LPS组的中性粒细胞跨内皮迁移能力;Tubastatin A可以逆转因抑制MIIP表达而引起的内毒素耐受类中性粒细胞跨内皮迁移的能力。3、同Control siRNA ET组相比,抑制MIIP表达可以部分逆转内毒素耐受类中性粒细胞HDAC6蛋白表达下调。4、同Control siRNA ET组相比,抑制MIIP表达可以逆转内毒素耐受类中性粒细胞微管蛋白α-tubulin乙酰化的上调;Tubastatin A可以逆转因抑制MIIP表达而引起的内毒素耐受中性粒细胞微管蛋白α-tubulin乙酰化的上调。5、同Control siRNA ET组相比,抑制MIIP表达可以逆转内毒素耐受类中性粒细胞p65磷酸化水平及细胞因子IL-8和MCP-1的表达下调;Tubastatin A可以逆转因干扰MIIP表达而引起的内毒素耐受中性粒细胞p65磷酸化水平及细胞因子IL-8和MCP-1的表达上调。6、同Control siRNA组相比,抑制MIIP表达不影响p65及其磷酸化和细胞因子IL-8、MCP-1的表达,但可以上调Control组和LPS组细胞微管蛋白α-tubulin乙酰化水平。7、同ET组相比,Tubastatin A可以进一步抑制内毒素耐受类中性粒细胞跨内皮迁移,上调微管蛋白α-tubulin乙酰化水平,下调p65磷酸化水平及细胞因子IL-8和MCP-1的表达。结论内毒素耐受可引起中性粒细胞跨内皮细胞迁移功能的下降,其机制可能与内毒素耐受上调MIIP mRNA及蛋白表达,抑制HDAC6蛋白的量及其去乙酰化酶活性相关。在内毒素耐受中,MIIP可能通过抑制HDAC6去乙酰化酶活性从而上调微管蛋白α-tubulin的乙酰化,还可能通过抑制HDAC6去乙酰化酶活性从而抑制NF-κB的活化、细胞因子IL-8和MCP-1的产生来抑制中性粒细胞迁移。(本文来源于《中国人民解放军海军军医大学》期刊2019-05-22）
李玉龙[4]（2019）在《种公鸡饲粮黄芪多糖对商品代肉鸡内毒素耐受免疫调控效应》一文中研究指出肉鸡在集约化养殖模式下存在一系列免疫和应激问题,尤其在肉鸡养殖前期,各种疫病的发生率高且危害大,这与肉鸡年龄阶段性的免疫功能特性有关。基于此,我们针对性的选取黄芪多糖(Astragalus Polysacchirides,APS)作为免疫营养调控因子,结合营养表观遗传调控策略,利用APS改变父母代种公鸡肠道中的免疫微环境,经长期刺激后研究其免疫相关传代性调控效应及其营养表观遗传调控机制,并分析APS在体外试验中的免疫调节作用及相关信号通路因子,探讨采用APS诱导的父系传代免疫调控效应应对肉鸡前期免疫性能低下问题的可行性。试验一、种公鸡胸腺免疫的年龄阶段差异性本试验采用单因素试验设计,120只1日龄科宝500种公鸡,分为15笼饲喂,每笼8只鸡,用以分析种公鸡胸腺免疫性能的年龄阶段差异性。在2周龄(雏鸡)和40周龄(成年鸡),每笼选取一只接近平均体重的种公鸡进行屠宰试验,采集胸腺样品进行表型分析和转录组测序分析,并对核心调控因子的启动子甲基化修饰进行检验,以解释胸腺免疫功能的年龄阶段差异性及其维持机制。试验结果显示:成年鸡的胸腺质量和形态与雏鸡存在显着差异(P≤0.05);鉴于这种表型差异性,本试验采用RNA-seq方法分析了胸腺中基因在转录水平的基因表达状况,用以确定年龄相关免疫功能差异的分子调控机理,Pearson相关性分析和主成分分析结果均显示成年鸡和雏鸡胸腺中基因在转录组水平的基因表达模式存在显着差异,雏鸡和成年鸡间有1949个差异表达基因(Differentially Expressed Genes,DEGs,其中成年鸡胸腺中有1822个高表达基因,127个低表达基因)。基于DEGs的GO和KEGG功能富集性分析结果筛选获得4个免疫相关显着富集性KEGG信号通路,分别为细胞因子-细胞因子受体互作通路、肠道Ig A合成免疫调控网络、Toll样受体信号通路和糖尿病并发症相关通路,这就说明肉鸡胸腺免疫功能,包括抗原识别、炎症反应及肠道黏膜免疫等均具有发育阶段差异性。与这4条免疫相关信号通路相关的差异表达基因在雏鸡组均显示低表达(P≤0.05)特性,说明2-W雏鸡胸腺中4条免疫相关信号通路均呈现低活性状态。肉鸡胸腺免疫的年龄阶段性差异可维持较长时间,DNA甲基化修饰可满足这一基因表达调控特性,所以我们检验了CD40启动子甲基化修饰状况,CD40与4条免疫信号通路的3条具有高相关性,且与胸腺免疫功能调控紧密相关,且雏鸡胸腺中的CD40启动子甲基化修饰水平极显着(P≤0.01)高于成年鸡,这与基因的表达差异性一致,维持基因在雏鸡阶段的低表达特性和相关通路的低活性。本试验说明肉鸡胸腺免疫功能具有年龄阶段差异性,相比于成年鸡,雏鸡的胸腺免疫处于一种低活性状态,此调控效应与雏鸡胸腺中CD40启动子高甲基化相关的基因表达抑制存在一定相关性。试验二、饲粮添加黄芪多糖对种公鸡免疫性能的影响肉鸡发育前期胸腺TLR信号通路保持低活性状态,影响其免疫功能状态,而APS可适度激活TLR4信号通路,优化机体免疫活性状态,本试验拟探索种公鸡长期摄入APS对其免疫和生产性能的影响。我们检测了饲粮长期(40周)添加APS对种公鸡体重、肠道黏膜组织形态、血清细胞因子、肠道黏膜及脾脏免疫的影响。本试验采用单因素试验设计,160只科宝500种公鸡随机分为5组,在其玉米-豆粕型基础饲粮中分别饲喂0、0.01、0.10、1.00和10.00 g/kg APS,每个处理4重复,每个重复8只鸡,将种公鸡饲喂至44周龄,称量种公鸡体重并采集血清样品,左侧颈静脉放血屠宰后采集各小肠肠段、小肠黏膜和脾脏样品进行试验分析。我们之前的试验发现由于种公鸡饲养过程中需要严格限饲,饲粮中添加APS对种公鸡体重并无显着影响,但饲粮添加10.00 g/kg APS可显着改善种公鸡肠道黏膜组织形态(后续分子指标分析选取10.00g/kg APS处理组),肠道黏膜更新需依赖于APS的免疫刺激作用。所以,本试验首先采用抑菌环和梯度稀释法试检验了APS的直接抑菌效应,试验结果显示APS并无直接抑菌效应,APS免疫调节作用更多源自于其对免疫系统的直接影响,进而我们分析了APS对肠道黏膜和脾脏免疫的影响。试验结果发现种公鸡饲粮添加10.00 g/kg APS对空肠黏膜中TLR4信号通路、细胞因子、内毒素耐受及肠道组织形态相关基因的表达均无显着影响;血清中细胞因子IFN-α、IFN-β和IL-4浓度亦无显着差异性;种公鸡脾脏中,饲粮添加APS对TLR4相关基因的转录亦无系统性影响。总之,种公鸡饲粮中添加10.00 g/kg APS可显着改善其肠道黏膜组织形态,但源于种公鸡免疫系统对饲粮中长期(44周)添加APS的适应性,APS对种公鸡空肠黏膜及脾脏免疫功能均无显着影响。试验叁、种公鸡饲粮添加黄芪多糖对商品代肉鸡免疫的影响由于种公鸡免疫系统对APS长期刺激的适应性,种公鸡日粮添加APS对其本身肠道黏膜和脾脏免疫并无显着影响,本试验旨在探讨种公鸡饲粮添加APS对商品代肉鸡生长状况和免疫性能的传代调控作用。本研究采用单因素试验设计,在基础日粮中分别添加0、0.01、0.10、1.00和10.00 g/kg APS,每个处理4重复,每个重复8只鸡,将种公鸡饲喂至40周龄后每个重复选取一只高繁种公鸡采集精液,并分别为每个重复对应的12只种母鸡输精,在5天里连续3次输精后采集种蛋,每个重复选取重量在65到70 g之间的受精蛋20枚用于孵化试验以获得商品代肉仔鸡,每个重复获得16只商品代肉鸡,商品代肉鸡根据种公鸡处理进行分组,商品代肉鸡饲喂商品颗粒料,不额外添加APS,自由饮水,饲喂于环控仓中且不进行疫苗免疫,商品代肉鸡饲喂至2周龄(采集每天体重数据)时左侧颈静脉放血屠宰后采集血清、小肠肠段、小肠黏膜和脾脏样品。本研究结果发现,种公鸡饲粮添加10.00 g/kg APS可传代性的改善商品代肉鸡养殖前期的体重和空肠黏膜组织形态,基于此表型差异性,选取10.00 g/kg APS处理组进行进一步的分子检验;种公鸡饲粮APS可诱导商品代肉鸡空肠黏膜免疫系统TLR4信号通路产生内毒素耐受样反应状态,APS对TLR4表达无影响,TLR4信号通路下游TRIF通路激活而My D88信号通路保持相对静息状态,NF-κB表达显着(P≤0.05)提高,种公鸡饲粮添加APS显着(P≤0.05)提高了IFN-α和IFN-β的表达,趋势性(0.05≤P≤0.1)提高了IL-4和IL-6的表达,并显着(P≤0.05)提高了IL-4上游调控因子GATA3的表达,内毒素耐受调控因子SOCS1的表达极显着(P≤0.01)升高,IFN-α下游的STAT1表达显着(P≤0.05)升高,总之,种公鸡饲粮添加10.00g/kg APS可通过活化TLR4下游的TRIF通过,并活化IFN-α/β及其下游的内毒素耐受因子SOCS1,诱导商品代肉鸡空肠黏膜免疫系统TLR4信号通路的内毒素耐受样免疫反应;肠道黏膜免疫活性可通过血液循环系统影响系统免疫活性,种公鸡饲粮添加10.00 g/kg APS可显着(P≤0.05)提高商品代肉鸡血清I类干扰素(IFN-α和IFN-β)水平;进一步分析APS对脾脏免疫的父系传代调控作用,与肠道黏膜免疫系统类型,种公鸡饲粮APS可影响商品代肉鸡脾脏中的TLR4信号通路活性,诱导内毒素耐受样免疫反应,其下游通路My D88通路抑制,而TRIF通路被激活,种公鸡饲粮中添加APS对商品代肉鸡脾脏中细胞因子的表达亦有显着影响,可显着(P≤0.05)提高TNF-α和IL-6的表达,并可显着(P≤0.05)提高IL-4及其上游调控因子GATA3的表达,但促炎细胞因子和内毒素耐受调控因子的表达均无显着变化。总之,本试验说明种公鸡饲粮中长期添加高剂量APS可诱导商品代肉鸡空肠黏膜和脾脏免疫的TLR4信号通路内毒素耐受免疫反应,并可通过其免疫调控效应改善商品代肉鸡的肠道黏膜组织形态和生长状况。试验四、黄芪多糖对肠上皮细胞TLR4信号通路活性的影响TLR信号通路是最重要的免疫识别信号通路,基于试验一,我们发现雏鸡胸腺TLR4信号通路处于抑制状态,所以本论文拟采用APS针对性的适度激活TLR4通路,来改善肉鸡免疫性能。试验二、叁结果发现APS可通过父系传代调控作用改善商品代肉鸡的肠道黏膜免疫性能,进而通过血液循环系统影响脾脏免疫功能。本试验选用Caco2细胞作为肠道上皮细胞模型,并构建LPS内毒素耐受免疫模型,结合LPS炎症反应模型,探讨APS对肠道上皮细胞免疫状态的影响,并通过RNA干扰在转录水平抑制TRIF通路活性,分析APS免疫反应类型及其相关信号通路调控因子。试验第一部分采用单因素随机试验设计,分为5组,对照组(C),APS处理组(APS,1mg/m L),LPS处理组(LPS,1 ug/m L),APS+LPS组(AL)及LPS内毒素耐受组(ET),每个处理3个重复。采用q RT-PCR和流式细胞分析方法分别在转录和翻译水平检验TLR4信号通路、细胞因子及内毒素耐受调控因子相关基因的表达状况,并采用ELISA试剂盒检验Caco2细胞IL-1、IL-8及TNF-α的合成和分泌活性。试验结果显示LPS刺激可诱导TLR4-My D88相关炎性细胞毒性反应,活化TLR4信号通路,并显着(P≤0.05)提高促炎细胞因子的表达,促进(P≤0.05)IL-8的合成和分泌活性,而APS可抑制LPS诱导的炎症反应,显着(P≤0.05)降低IL-8的合成和分泌,产生类似于内毒素耐受反应的基因表达特性。第二部分试验采用2×3拉丁方试验设计,两个处理因素分别为TRIF干扰和APS及LPS处理,分别为(对照组、TRIF干扰组)×(对照组、LPS处理组、APS+LPS处理组),分别为对照组(Control)、LPS处理组(LPS)、APS+LPS处理组(AL)以及TRIF干扰组对应的对照组(s-Control)、LPS处理组(s-LPS)和APS+LPS处理组(s-AL),每个处理设置3个重复。分析TRIF抑制状况下APS和LPS刺激对Caco2细胞的调控效应,试验结果显示TRIF敲除后,APS不能有效抑制LPS诱导的炎症反应,TLR信号通路活性及促炎细胞因子的表达均表现出与LPS处理组高度的一致性,促炎细胞因子IL-8仍保持较高的合成和分泌活性。综上,在Caco2细胞模型中,APS可TRIF依赖性的抑制LPS诱导的炎性细胞毒性反应,并显着抑制LPS诱导的促炎细胞因子高表达,进一步可确定APS可影响肠道黏膜免疫系统的活性状态,从侧面验证说明APS的父系传代调控效应是源于其对肠道黏膜免疫的影响。试验五、黄芪多糖父系传代性调控效应中的表观遗传修饰作用本试验采集APS父系传代试验中对照组和10.00 g/kg APS处理组种公鸡空肠黏膜、脾脏及精液样品,和商品代肉鸡空肠黏膜和脾脏样品,并检验其关键调控因子My D88、TRIF和SOCS1的启动子甲基化和组蛋白修饰状况,用以探讨APS以精子为媒介的营养表观遗传修饰作用。试验结果显示就DNA甲基化修饰而言,种公鸡饲粮APS可显着(P≤0.05)降低种公鸡空肠黏膜和精子中的的SOCS1启动子甲基化修饰水平,商品代肉鸡空肠黏膜中的SOCS1启动子甲基化也有一定程度的降低,且SOCS1启动子Cp G富集区段为转录激活因子结合区,APS诱导的低甲基化有利于促进SOCS1的表达,且精子中SOCS1启动子的低甲基化可作为传代调控因子参与APS的父系传代调控效应;APS对My D88、TRIF及脾脏中SOCS1的启动子甲基化修饰并无显着影响,只有组织特异性的低甲基化修饰;种公鸡饲粮中的APS可显着(P≤0.05)影响空肠黏膜和脾脏中My D88和TRIF基因启动子区段的组蛋白修饰(脾脏SOCS1启动子Dimethyl-H3K9修饰亦有显着提高),诱导符合基因表达特性的组蛋白修饰类型。另外,种公鸡饲粮添加APS可显着提高(P≤0.05)精子中My D88的Dimethyl-H3K9修饰水平,并可显着(P≤0.05)降低精子中TRIF的Dimethyl-H3K9修饰水平。总之,在APS诱导的内毒素耐受样父系传代调控过程中,DNA甲基化(空肠黏膜SOCS1)和组蛋白修饰(My D88和TRIF)发挥重要调节作用。试验结论:肉鸡雏鸡阶段的系统免疫活性处于相对抑制状态,而APS可诱导TLR4-TRIF通路相关内毒素耐受样免疫反应,可针对性改善肉雏鸡免疫性能,通过种公鸡饲粮添加APS可通过父系营养表观遗传机制传代诱导商品代肉鸡肠道黏膜免疫系统TLR4信号通路的内毒素耐受免疫反应,并影响外周免疫器官脾脏的免疫状态,进而可优化肉仔鸡前期的肠道形态和生长状况,在肉仔鸡获得期望性状。总之,APS通过父系营养表观遗传机制改善商品代肉鸡免疫和体增重是一种应对肉鸡雏鸡阶段免疫抑制问题的可行性策略。(本文来源于《西北农林科技大学》期刊2019-05-01）
张文锋[5]（2018）在《PI3Kγ/AKT通过Foxo3a-p53/MDM2负反馈弧调控Kupffer细胞内毒素耐受的机制研究》一文中研究指出研究背景:Kupffer细胞(Kupffer cells,KCs)内毒素耐受现象与全身炎症反应综合症等临床感染性疾病的发生密切相关。抑制巨噬细胞中核转录因子κB(nuclear transcriptional factor kappa B,NF-κB)的活性是诱导机体内毒素耐受最有效的方式之一。据报道,磷脂酰肌醇3-激酶γ(phosphoinositide 3-kinaseγ,PI3Kγ)在受到脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激后,一方面能使Toll样受体4(toll-like receptor,TLR4)的亚细胞区室化,限制TLR4炎症信号传导,抑制促炎因子如肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)的分泌以及增强抗炎因子如白介素10(interleukin,IL-10)等的分泌,以抑制机体炎症反应。另一方面,PI3Kγ/AKT被激活后可直接磷酸化叉头蛋白O3a(fork head protein O3a,Foxo3a),并通过p53-鼠双微体蛋白2(murine double mimute,MDM2)泛素化水解foxo3a,从而解除了Foxo3a对NF-κB活性的抑制作用,促进炎症信号的转导。上述两种相互矛盾的现象,提示PI3Kγ/AKT通路在调控内毒素炎症信号传导过程中可能受到来自下游foxo3a和p53/MDM2通路的负反馈调节。但是,foxo3a和p53/MDM_____________________________________本课题受国家自然科学基金资助(No.81701950)通路在KCs内毒素耐受过程中存在何种相互作用关系,以及foxo3a和p53/MDM通路是否是PI3Kγ/AKT通路调控KCs内毒素耐受的平衡机制,目前尚不清楚。因此,本实验将研究PI3Kγ/AKT、foxo3a、p53/MDM在体内外KCs内毒素耐受模型的作用及相互作用的关系。方法:1.分离和培养KCs,建立KCs内毒素耐受和非耐受模型:(1)、利用酶联免疫吸附试法(enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)检测细胞上清中TNF-α和IL-10的含量;(2)、蛋白免疫印迹法(western blotting,WB)检测NF-κB p65和Foxo3a蛋白表达和磷酸化水平;(3)、细胞免疫荧光法观察NF-κB p65和Foxo3a在KCs定位变化的情况。利用Foxo3a-小干扰RNA质粒(Foxo3a small interfering RNA plasmid,Foxo3a-siRNA)和Foxo3a过表达质粒(Foxo3a overexpression plasmid,Foxo3a-OE)分别转染体外KCs 36 h后,再建立KCs内毒素耐受和非耐受模型:(1)、利用ELISA检测细胞上清中TNF-α和IL-10的含量;(2)、WB法检测NF-κB p65和Foxo3a蛋白表达和磷酸化水平;(3)、利用流式细胞仪结合碘化丙啶(propidium iodide,PI)/异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)标记的膜联蛋白annexinⅤ法检测KCs凋亡情况。2.分离和培养KCs,建立KCs内毒素耐受和非耐受模型后,利用WB法分别检测PI3Kγ和AKT的蛋白表达和磷酸化水平。PI3Kγ激动剂重组小鼠胰岛素样生长因子1(insulin-like growth factor 1,IGF-1)蛋白和抑制剂IPI-549预处理KCs后,再建立KCs内毒素耐受和非耐受模型:(1)、利用ELISA检测细胞上清中TNF-α和IL-10的含量;(2)、WB检测NF-κB p65和Foxo3a蛋白表达和磷酸化水平;(3)、利用全自动细胞计数仪检测KCs生存率。利用Foxo3a Foxo3a-OE转染体外KCs36 h,然后利用PI3Kγ激动剂IGF-1预处理KCs,再建立KCs内毒素非耐受模型;或者利用Foxo3a-siRNA转染体外KCs 36 h,然后利用抑制剂IPI-549预处理KCs,再建立KCs内毒素耐受模型;(1)、利用ELISA检测细胞上清中TNF-α和IL-10的含量;(2)、WB法检测NF-κB p65和Foxo3a蛋白表达和磷酸化水平;(3)、利用全自动细胞计数仪检测KCs生存率。利用PI3Kγ激动剂IGF-1和抑制剂IPI-549预处理清洁级小鼠后,再建立小鼠内毒素耐受和非耐受模型:(1)、观察和记录小鼠生存时间;(2)、苏木素伊红染色法(haematoxylin-eosin staining,HE)结合Suzuki评分表评估肝脏组织炎症反应程度;(3)、分离肝脏的KCs后,利用定量聚合酶链反应法(real-time quantitative polymerase chain reaction(PCR),RT-PCR)分别检测TNF-α和IL-10的mRNA表达水平,以及WB法检测NF-κB p65和Foxo3a蛋白表达和磷酸化水平。3.分离和培养KCs,利用Foxo3a-OE转染体外KCs 36 h后,再利用WB法分别检测p53和MDM2的蛋白表达和磷酸化水平。分离和培养KCs,建立KCs内毒素耐受和非耐受模型后,利用WB法分别检测p53和MDM2的蛋白表达和磷酸化水平。利用MDM2-siRNA转染体外KCs 36 h后,再建立KCs内毒素非耐受模型:(1)、利用ELISA检测细胞上清中TNF-α和IL-10的含量;(2)、WB法检测NF-κB p65和Foxo3a蛋白表达和磷酸化水平;(3)、利用全自动细胞计数仪检测KCs生存率。PI3Kγ激动剂IGF-1预处理KCs,然后利用MDM2抑制剂Nutlin-3处理KCs,再建立KCs非耐受模型:(1)、利用ELISA检测细胞上清中TNF-α和IL-10的含量;(2)、WB检测NF-κB p65和Foxo3a蛋白表达和磷酸化水平;(3)、利用全自动细胞计数仪检测KCs生存率。PI3Kγ激动剂IGF-1和预处理小鼠,然后利用MDM2抑制剂预处理小鼠Nutlin-3,再建立小鼠内毒素非耐受模型:(1)、观察和记录生存时间;(2)、HE染色法结合Suzuki评分表评估肝脏组织炎症反应程度;(3)、分离肝脏的KCs后,利用RT-PCR法检测TNF-α和IL-10的mRNA表达水平,以及利用WB检测NF-κB p65和Foxo3a蛋白表达和磷酸化水平。结果:1.与内毒素非耐受模型相比较,KCs内毒素耐受模型中NF-κB通路的活性、Foxo3a磷酸化水平和TNF-α的分泌显著下降,而Foxo3a蛋白表达水平与IL-10的分泌显着提高;过表达Foxo3a可抑制KCs非内毒素耐受模型中NF-κB通路的活性和TNF-α的分泌,提高IL-10的分泌,提高KCs对内毒素的耐受能力;沉默Foxo3a后可提高KCs内毒素耐受模型中NF-κB通路的活性和TNF-α的分泌,抑制IL-10的分泌,降低KCs对内毒素的耐受能力。2.PI3Kγ抑制剂通过抑制AKT的活性,降低KCs中Foxo3a的磷酸化水平,提高Foxo3a的蛋白表达,从而抑制KCs非内毒素耐受模型中NF-κB通路的活性和TNF-α的分泌,提高IL-10的分泌,提高KCs和小鼠对内毒素的耐受能力;PI3Kγ激动剂通过促进AKT的活化,提高KCs中Foxo3a的磷酸化水,降低Foxo3a的蛋白表达,从而抑制KCs内毒素耐受模型中NF-κB通路的活性和TNF-α的分泌,抑制IL-10的分泌,降低KCs和小鼠对内毒素的耐受能力;PI3Kγ激动剂可逆转过表达Foxo3a后抑制KCs内毒素非耐受模型中NF-κB的激活的效果,降低KCs和小鼠对内毒素的耐受能力。3.Foxo3a-p53/MDM2形成负反馈弧,可维持KCs中Foxo3a的蛋白稳定表达。沉默MDM2表达或者抑制MDM2功能后可通过增加Foxo3a蛋白积累,提高KCs和小鼠对内毒素的耐受能力。MDM2抑制剂可逆转由PI3Kγ激动剂介导体内外KCs内毒素耐受模型中NF-κB激活的效果,提高KCs和小鼠对内毒素的耐受能力。结论:1.Foxo3a在核内的蛋白累积可抑制NF-κB的活性,降低炎症因子的分泌,提高KCs和小鼠对内毒素耐受的能力。2.抑制PI3Kγ/AKT磷酸化Foxo3a的作用或者阻断p53/MDM2泛素化降解Foxo3a,均可提高KCs和小鼠对内毒素的耐受能力。3.Foxo3a-p53/MDM2形成的负反馈弧是维持KCs中Foxo3a蛋白稳定的主要机制,也是制约PI3Kγ/AKT诱导Kupffer细胞内毒素耐受的主要平衡机制。(本文来源于《重庆医科大学》期刊2018-05-01）
贾力[6]（2018）在《内毒素耐受状态下胸腺CD4~+SP细胞TCRβ链CDR3区的变化和意义》一文中研究指出本课题中按常规方式建立内毒素耐受模型,初步探讨内毒素耐受状态下胸腺CD4~+SP细胞TCRβ链CDR3区的变化及其意义。研究内容包括以下两个部分,分述如下:目的:第一部分以5mg/kg浓度LPS腹腔注射,建立内毒素耐受模型并鉴定。利用MACS分选模型小鼠胸腺CD4~+SP细胞,结合Illumina Solexa高通量测序技术,分析内毒素耐受状态下胸腺CD4~+SP细胞的TCRβ链CDR3区的变化。第二部分利用OVA转基因模型小鼠,观察内毒素耐受状态下,胸腺发育的CD4~+SP细胞对特异性抗原识别及应答的改变。方法:第一部分:选取6-8周雌性C57BL/6小鼠,以5mg/kg浓度LPS腹腔注射,建立内毒素耐受模型,注射后72h和8d为实验组;以PBS腹腔注射后72h为对照组。为鉴定内毒素耐受(endotoxin tolerance,ET)模型,在LPS耐受模型后72h以10mg/kg浓度LPS大剂量攻击小鼠为耐受组;10mg/kg浓度LPS大剂量攻击小鼠为攻击组。24h后观察两组小鼠生存率变化;HE染色观察两组小鼠肺脏和肝脏脏器病理学变化,利用RT-PCR技术检测耐受组和攻击组肺脏和肝脏组织细胞因子TNF-α、IFN-γ、IL-4和IL-10的mRNA表达水平变化。建立耐受模型后,分离对照组和实验组小鼠的胸腺组织,利用免疫磁珠分选技术(magnetic cell sorting,MACS)分选出胸腺中的CD4~+SP细胞,流式细胞术鉴定分选纯度,提取每组细胞基因组DNA,进行琼脂糖凝胶电泳鉴定;随后将各组样本DNA送Adaptive Biotechnologies Immune SEQ公司(美国华盛顿医学院),运用多重PCR技术扩增各样本CDR3区,并结合高通量技术对各样本TCRβ链CDR3区进行测序。测序结束后,利用生物信息学软件Immuno SEQ对3个实验样本原始序列进行分析。第二部分:选取6-8周的雌性C57BL/6小鼠,在无菌条件下取其骨髓细胞,以20ng/ml浓度GM-CSF体外诱导培养7天,获得巨噬细胞,流式细胞术鉴定其纯度。利用免疫磁珠分选技术,分选OVA转基因(OT-II)小鼠脾脏CD4~+T细胞;将1×10~5Mψ-OVA和4×10~5CD4~+T细胞共培养24h,FACS检测CD4~+T细胞相关功能分子CD62L和CD69的表达水平。以5×10~6 OT-Ⅱ骨髓细胞过继传输(Adoptive cell transfer,ACT)至Rag-1~(-/-)小鼠体内,24h后再次分别过继传输2×10~6 Mψ和2×10~6 Mψ-OVA,24h后以0.5mg/kg浓度LPS腹腔注射,建立内毒素耐受模型,观察各组小鼠体重、胸腺重量,FACS检测胸腺中OVA-specific-CD4~+SP细胞比例及其功能相关分子CD62L、CD69、CD44的表达水平。模型后72h以2mg/kg浓度LPS高剂量攻击小鼠,24h后观察各组小鼠脾脏的重量,HE染色观察小鼠肺脏和肝脏的病理变化;利用RT-PCR技术检测实验组及对照组肺脏和肝脏组织细胞因子TNF-α、IL-1β、IFN-γ、IL-10、IL-4及TGF-β的mRNA表达水平变化。FACS检测脾脏中OVA-specific-CD4~+T细胞比例及其功能相关分子CD62L、CD69、CD44,功能相关分子IFN-γ和IL-4的表达水平。结果:第一部分:耐受组小鼠生存率为100%,而攻击组小鼠精神萎靡,行动缓慢,反应迟钝,竖毛,24h内全部死亡。肺脏和肝脏肉眼可见较为严重的病态变化。HE染色结果显示,与耐受组相比,攻击组小鼠肺泡壁明显增厚,淋巴细胞浸润增多,肝小叶结构紊乱。RT-PCR结果显示,与攻击组相比,耐受组肺脏中促炎因子TNF-α、IFN-γ表达明显下调(P<0.05),抑炎因子IL-10表达下调(P<0.05)然而IL-4的表达无差异。肝脏组织中促炎因子IFN-γ的表达显著下调(P<0.05),抑炎因子IL-4和IL-10的表达明显增加(P<0.05)但促炎因子TNF-α也同时上调(P<0.05)。高通量测序结果分析如下:1、3组样本TCRβ链CDR3序列中Unique Productive序列/Total Productive序列数目分别为:Control组:9993/23102;72h组:9992/21079;8d组:9995/27549。2、各组胸腺CD4~+SP细胞样本反辛普森指数(1/DS)分别为:Control组:59112.08;72h组:37188.8;8d组:29921.15。3、各组胸腺CD4~+SP细胞样本TCRβ链CDR3 AA长度分布均呈现以12个氨基酸长度为主的高斯分布,且均高频取用丝氨酸(S)、丙氨酸(A)和甘氨酸(G)。4、各组样本高频扩增的前10条序列分析显示,Control组和模型8d组存在两条共同的AA序列为:CASSLGQYEQYF和CASSPGTGGYEQYF,而72h组与Control和8d组均无重迭序列。5、Control组中高频扩增的前20条克隆在72h和8d组中大多呈现低表达或无表达;在72h和8d组出现了同样的现象。6、72h与8d实验组和Control组叁组中共有重迭序列208条,其中72h组中高频表达的前20条序列在Control组和8d组中大多呈现低表达。7、叁组样本TCRβ链CDR3区TRBV基因家族均高频取用TRBV13-02、TRBV19-01、TRBV03-01;TRBJ基因家族均高频取用TRBJ02-07、TRBJ02-05、TRBJ02-01。8、叁组样本TCRβ链CDR3区TRBV-TRBJ基因配对分析发现,72h组与Control和8d组均存在共同的优势配对(>2%)为TRBV13-02-TRBJ02-07。此外,相比于对照组,在LPS刺激后72h和8d时,出现了新的V-J基因配对。第二部分:FACS结果显示,体外诱导巨噬细胞纯度达90%以上。显微镜下观察发现,与SP-OVA组相比,Mψ-SP组和Mψ-OVA组中克隆数目显着增多,且Mψ-OVA组中克隆数目增加更为明显;同时,FACS检测得知,活化相关分子CD62L、CD69发生了明显改变(P<0.05)。分别对实验组和对照组小鼠体重及胸腺重量检测发现,Mψ和Mψ-OVA两组小鼠体重在前3天均持续下降,第4天开始恢复,第7天恢复到正常水平;此外,与对照组相比,两组小鼠的胸腺重量在模型后72h显着降低(P<0.05),8d后逐渐恢复至正常水平。流式结果显示,与Control组相比,LPS注射72h后,其OVA-specific-CD4~+SP细胞比例在Mψ和Mψ-OVA组中均显着增加(P<0.05);注射8d后其比例明显下降(P<0.05)。此外,比较Mψ和Mψ-OVA组发现,LPS注射后72h,Mψ-OVA组中OVA-specific-CD4~+SP细胞比例明显低于Mψ组(P<0.05)。我们检测了其活化相关分子的表达水平发现,Mψ组中,与Control组相比,LPS注射后72h和8d CD69的表达无明显变化,CD62L的比例在72h时明显升高(P<0.05),8d时下降(P<0.05),但仍高于Control组(P<0.05);CD44的比例在叁组中均无明显变化。对Mψ-OVA组进行分析发现,相比于Control组,LPS注射后72h,CD69的比例显着升高(P<0.05);CD62L的表达在LPS注射72h后显着上调(P<0.05),而在注射后8d显着下调(P<0.05);CD44则无明显改变。进一步比较Mψ和Mψ-OVA组发现,LPS注射后8d,Mψ-OVA组较Mψ组CD62L的表达明显下降(P<0.05)。其他无明显变化。攻击实验结果分析显示,Mψ组脾脏的体积和重量较Control组和Mψ-OVA组明显增大(P<0.05)。Mψ和Mψ-OVA两组小鼠肺脏和肝脏HE染色提示,与Mψ-OVA组相比,Mψ组肺泡壁明显增厚,肺脏中淋巴细胞浸润增多,肝小叶结构紊乱。RT-PCR检测发现,与Mψ组相比,Mψ-OVA组肺脏中促炎因子IL-1β、IFN-γ、TNF-α的表达明显下调(P<0.05),抑炎因子IL-10和TGF-β的表达明显上调(P<0.05),IL-4无明显改变;而肝脏中细胞因子的表达均无明显差异。随后,流式结果分析显示,与对照组相比,实验组脾脏中OVA-specific-CD4~+T的比例明显增加(P<0.05),且Mψ组其比例高于Mψ-OVA组(P<0.05);此外,进一步对脾脏中OVA-specific-CD4~+T细胞功能相关分子CD62L、CD69、CD44、IFN-γ、IL-4检测发现,与Control组相比,Mψ和Mψ-OVA组CD69和CD44的表达显着增加(P<0.05);此外,与Mψ组相比,Mψ-OVA组中CD69的比例上调更为明显(P<0.05)。同时,攻击实验结果显示:脾脏OVA-specific-CD4~+T细胞功能分子IFN-γ、IL-4的表达情况,与Control组相比,Mψ组中IFN-γ和IL-4的表达明显上调(P<0.05)。此外,与Mψ组相比,Mψ-OVA组IFN-γ和IL-4的表达明显下调(P<0.05)。结论:第一部分:内毒素耐受状态下胸腺CD4~+SP细胞TCRβ链CDR3区发生了改变。第二部分:内毒素耐受状态下胸腺中OVA-specific-CD4~+T细胞对特异性抗原的识别和应答均发生了显着改变,同时有利于内毒素耐受的建立。(本文来源于《遵义医学院》期刊2018-05-01）
刘冀琴,任党利,吴玉秀,杜振华,靳颖[7]（2018）在《2型糖尿病合并全身炎症反应综合征患者内毒素耐受现象分析》一文中研究指出【目的】研究2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)患者并发全身炎症反应综合征(systemic inflammatory response syndrome,SIRS)时机体炎症反应状态及是否发生内毒素耐受现象。【方法】选取单纯全身炎症反应综合征患者(SIRS组)100例,合并T2DM患者(SIRS~+T2DM组)100例,比较两组患者静脉血中细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)、白细胞计数(white blood cell count,WBC)、中性粒细胞百分比(neutrophilic granulocyte percentage,Neu%)、超敏C反应蛋白(hypersensitive c-reactive protein,hsCRP)、降钙素原(procalcitonin,PCT)、免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)G、补体(complement,C)3、白细胞介素(interleukin,IL)-6、白细胞介素(interleukin,IL)-10和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α水平的差异。选取健康体检者(NC组)20名,单纯T2DM患者(T2DM组)20名,分别提取外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)并经LPS刺激,比较两组细胞中IL-6 m RNA和TNF-αmRNA表达及培养上清中IL-6和TNF-α的变化。同时,检测各组PBMC表面HLADR表达量及CD3~+CD4~+/CD3~+CD8~+的比例。【结果】SIRS~+T2DM组与单纯SIRS组比较,血清中hsCRP、IL-6、TNF-α水平降低、IL-10水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与NC组比较,T2DM组PBMC经LPS刺激后产生IL-6、TNF-α减少、HLA-DR表达量减低(P<0.05)。【结论】T2DM患者并发SIRS时机体产生内毒素耐受现象。(本文来源于《武警后勤学院学报(医学版)》期刊2018年04期）
方媛春,祝祥清,顾建雨,尹兰兰,孙颖[8]（2018）在《内毒素耐受对共培养的中性粒细胞和单核细胞分泌TNF-α和IL-8的影响》一文中研究指出目的观察脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导的耐受对共培养的中性粒细胞和人单核细胞株THP-1细胞表达抗炎因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和趋化因子白介素-8(Inter leukin-8,IL-8)水平的影响。方法采用1μg/m L牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis)LPS或1μg/m L大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)LPS分别刺激共培养的中性粒细胞和THP-1细胞24 h,洗脱后,再次刺激24 h,诱导细胞产生耐受。采用ELISA技术检测细胞条件培养液中TNF-α和IL-8表达水平的变化。结果 P.gingivalis LPS或E.coli LPS单次刺激后,共培养的中性粒细胞和THP-1细胞分泌TNF-α和IL-8的水平均较刺激前明显增高(P<0.05);P.gingivalis LPS和E.coli LPS重复刺激后,共培养的中性粒细胞和THP-1细胞分泌的TNF-α水平较单次刺激后明显降低(P<0.05),但IL-8水平较单次刺激后明显增高(P<0.05)。结论共培养的中性粒细胞和单核细胞产生的内毒素耐受可能抑制TNF-α表达,促进IL-8表达,进而可能影响牙周组织的炎症和免疫反应。(本文来源于《口腔医学》期刊2018年03期）
张译尹,李培志,廖锐,龚建平[9]（2017）在《过表达pellino-1在Kupffer细胞内毒素耐受时对TRAF3泛素化及MAPK信号通路的调控》一文中研究指出【目的】探讨上调pellino-1在Kupffer细胞(KC)内毒素耐受时对肿瘤坏死因子受体相关因子3(TRAF3)泛素化、促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路及下游细胞因子分泌情况的影响。【方法】分离、培养C57BL/6小鼠KC,随机分为2组:(1)空载对照组:转染空载质粒48 h后,先给予小剂量LPS(10 ng/mL)刺激24 h,再给予大剂量LPS(300 ng/mL)刺激。(2)过表达组:过表达pellino-1慢病毒转染48 h后,先给予小剂量LPS(10 ng/mL)刺激24 h,再给予大剂量LPS(300 ng/mL)刺激。两组分别于处理后0、5、10、30、60 min收获细胞,蛋白质免疫印迹试验(Western blot)检测pellino-1、K48泛素化(K48ubiquitin,K48-Ub)、TRAF3、JNK、p-JNK、p38、p-p38蛋白水平表达变化;酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养上清液中IL-1β、TNF-α及IL-10的分泌情况。【结果】与空载对照组相比,过表达组pellino-1蛋白表达量在各个时间点均明显升高;K48-Ub水平明显升高;TRAF3蛋白表达量明显降低;JNK、p38蛋白表达量没有明显变化,但p-JNK及p-p38蛋白表达量显着升高;过表达组细胞上清中IL-1β及TNF-α的量明显升高(P<0.05),而IL-10的量则明显降低(P<0.05)。【结论】过表达pellino-1可促进TRAF3蛋白K-48泛素化降解,导致TRAF3蛋白表达量降低,激活下游的MAPK信号,从而抑制内毒素耐受的形成。(本文来源于《中山大学学报(医学科学版)》期刊2017年05期）
张译尹[10]（2017）在《过表达Pellino-1在kupffer细胞内毒素耐受时对TRAF3泛素化及MAPK信号通路的调控》一文中研究指出目的:脓毒症是由感染已发的全身性炎症反应,是世界范围内各类急危重症和创伤患者死亡的最主要原因之一。但机体存在对炎症反应的一种自我保护机制,使机体避免被过度不可控制的炎症反应所损伤,即内毒素耐受(Endotoxin Tolerance,ET)。研究表明,肿瘤坏死因子受体相关因子3(Tumour necrosis factor receptor-associated factors 3,TRAF3)参与了内毒素耐受的诱导。但TRAF3蛋白的功能与泛素化修饰密切相关,我们今天研究的Pellino-1是近年来新发现的一种泛素连接酶,在固有免疫细胞和获得性免疫细胞中参与蛋白降解等,与炎症和自身免疫密切相关。在Kupffer细胞内毒素耐受中,Pellino-1是否参与调节TRAF3的K48泛素化降解,目前还未见报道。本研究旨在观察Kupffer细胞内毒素耐受时,过表达Pellino-1对TRAF3泛素化及MAPK信号通路的影响。方法:分离、培养C57BL/6小鼠Kupffer细胞,随机分为2组:(1)空载对照组:转染空载质粒48h后,先给予小剂量LPS(10ng/ml)刺激24h,再给予大剂量LPS(300ng/ml)刺激。(2)过表达组:过表达Pellino-1慢病毒转染48h后,先给予小剂量LPS(10ng/ml)刺激24h,再给予大剂量LPS(300ng/ml)刺激。两组分别于处理后0,5,10,30,60min收获细胞,蛋白质免疫印迹试验(Western blot)检测Pellino-1、K48泛素化(K48 ubiquitin,K48-Ub)、TRAF3、JNK、p-JNK、p38、p-p38蛋白水平表达变化;酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养上清液中IL-1β、TNF-α及IL-10的分泌情况。结果:与空载对照组相比,过表达组Pellino-1蛋白表达量在各个时间点均明显升高;K48-Ub水平明显升高;TRAF3蛋白表达量明显降低;JNK、p38蛋白表达量没有明显变化,但p-JNK及p-p38蛋白表达量显着升高;过表达组细胞上清中IL-1β及TNF-α的量明显升高(P<0.05),而IL-10的量则明显降低(P<0.05)。结论:过表达Pellino-1可促进TRAF3蛋白K-48泛素化降解,导致TRAF3蛋白表达量降低,激活下游的MAPK信号,从而抑制内毒素耐受的形成。(本文来源于《重庆医科大学》期刊2017-05-01）
内毒素耐受论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的搜寻内毒素耐受相关的核心基因,探讨其在脓毒症中产生及发展的内在机制。方法从GEO数据库下载raw264. 7细胞相关基因表达谱数据GSE8621,筛选出其中的脓毒症模型与内毒素耐受模型的样本芯片数据,将其分为脓毒症组和内毒素耐受组,运用在线数据分析软件GCBI对该芯片数据进行处理,筛选出两组间的差异基因并对差异基因进行基因本体论(GO)功能富集分析、京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路富集分析、基因共表达分析,通过STRING在线平台进行蛋白质的相互作用分析。结果两组数据进行对比后,共有2 584个差异基因被找到(P <0. 05);与脓毒症组相比,内毒素耐受组中有1 618条下调基因、966条上调基因。结果表明差异表达基因主要参与了转录的调节、细胞的凋亡以及蛋白质的磷酸化等生物进程,而功能通路分析显示这些差异基因主要集中于代谢相关通路、MAPK信号通路、PI3K-Akt信号通路、肿瘤相关信号通路、Jak-STAT信号通路、NF-κB信号通路、TLRs信号通路等,并且基因Pik3r2、Nfkb1、Plcg2、Gnai3、Rac3、Src、Rnd1、Edn1、Socs3、Il10被筛选为核心基因。结论通过基因芯片对脓毒症组及内毒素耐受组的转录组学进行测序、分析,发现两组之间的差异基因,通过网络模块的建立,将基因Pik3r2、Nfkb1、Plcg2、Gnai3、Rac3、Src、Rnd1、Edn1、Socs3、Il10筛选为与内毒素相关的核心基因,这其中包括已经被证实的与脓毒症密切相关的基因及部分未被证实的基因,这为脓毒症的预防和治疗提供了新的方向。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
内毒素耐受论文参考文献
[1].武曦,张纲,冯晓丹,冯小倩,谭颖徽.缺氧通过HIF-1α抑制hPDLFs内毒素耐受[J].现代生物医学进展.2019
[2].陈雪,胡迎春,钟武.内毒素耐受相关基因的生物信息学分析[J].山西医科大学学报.2019
[3].李岩.内毒素耐受致中性粒细胞跨内皮迁移障碍及潜在机制研究[D].中国人民解放军海军军医大学.2019
[4].李玉龙.种公鸡饲粮黄芪多糖对商品代肉鸡内毒素耐受免疫调控效应[D].西北农林科技大学.2019
[5].张文锋.PI3Kγ/AKT通过Foxo3a-p53/MDM2负反馈弧调控Kupffer细胞内毒素耐受的机制研究[D].重庆医科大学.2018
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[10].张译尹.过表达Pellino-1在kupffer细胞内毒素耐受时对TRAF3泛素化及MAPK信号通路的调控[D].重庆医科大学.2017