导读:本文包含了转染真核表达载体论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:生长分化因子5,真核表达载体,HEK293细胞
转染真核表达载体论文文献综述
穆继宏,张浩,杨玲,余雷,吴宣树[1]（2019）在《GDF5基因真核表达载体的构建及稳定转染HEK293细胞系的建立》一文中研究指出目的构建pEGFP-N1-GDF5真核表达载体,建立稳定转染的HEK293细胞系并检测其表达情况。方法以Genbank中人GDF5序列为模板,通过PCR扩增GDF5序列,插入pEGFP-N1空载体,构建pEGFP-N1-GDF5真核表达载体,进行双酶切图谱分析和DNA测序鉴定。将pEGFP-N1-GDF5真核表达载体转染HEK293细胞,然后通过荧光显微镜、Real-time PCR和Western blot技术检测GDF5的表达情况。结果双酶切鉴定结果显示,重组质粒pEGFP-N1-GDF5经NHEL和HindⅢ双酶切后得到同样的2个条带,目的条带的长度与GDF5cDNA长度相符。重组质粒pEGFPN1-GDF5插入片段的DNA序列与GDF5基因序列一致。pEGFP-N1-GDF5真核表达载体转染HEK293细胞后48 h荧光显微镜下可见多数细胞发出绿色荧光。Real-time PCR检测与Western blot检测GDF5基因在HEK293细胞中的mRNA与蛋白水平存在较高表达。结论 pEGFP-N1-GDF5真核表达载体构建成功,为进一步研究GDF5基因功能奠定了基础。(本文来源于《中国骨与关节损伤杂志》期刊2019年07期）
张梦瑶,杨峰,刘开东,刘积凤,贺建宁[2]（2018）在《利用同源重组技术构建DKK1、BMP4真核表达载体及共转染成纤维细胞表达的研究》一文中研究指出为了构建敖汉细毛羊DKK1、BMP4基因真核表达载体及单、共转染成纤维细胞后研究两基因表达量之间的变化,以敖汉细毛羊为研究对象,采集40日龄的胎羊。首先,通过RNA的提取反转录成c DNA参照Gen Bank中DKK1、BMP4基因序列信息分别设计1对含有同源臂的引物,通过PCR反应扩增获得DKK1、BMP4基因片段、利用So So试剂盒将目的片段连接到pcDNA3. 1真核表达载体上。鉴定正确后的pcDNA3. 1-DKK1、pcDNA3. 1-BMP4重组质粒,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞;其次对敖汉细毛羊的成纤维细胞进行分离培养,并将构建的pcDNA3. 1-DKK1、pcDNA3. 1-BMP4单、共转染成纤维细胞,利用荧光定量PCR技术和Western Blot技术检测DKK1、BMP4基因单转染和共转染在成纤维细胞中表达量的变化。结果显示,经酶切、测序鉴定pcDNA3. 1-DKK1、pcDNA3. 1-BMP4构建成功,成纤维细胞原代、传代培养良好,转染后细胞生长良好,经实时荧光定量PCR技术和Western Blot检测DKK1基因共转染成纤维细胞较单转染的表达量极显着下降(P <0. 01),BMP4基因的共转染较单转染表达量没有发生明显变化。成功构建了敖汉细毛羊DKK1、BMP4基因的真核表达载体,并且成功共转染成纤维细胞,DKK1基因的表达量明显下降,BMP4基因的表达量没发生明显变化,因而,推断BMP4基因抑制了DKK1基因的表达,DKK1基因对BMP4基因作用不明显,结果可为进一步研究其功能奠定基础。(本文来源于《华北农学报》期刊2018年05期）
王燕,王宇暄,刘亚敏,张桂强,苏文洲[3]（2018）在《利用Tet-on诱导基因表达系统构建EID3基因真核表达载体及稳定转染细胞株的建立》一文中研究指出目的构建类E1A细胞分化抑制因子3(EID3)真核表达载体,并转染人乳腺癌细胞(MCF-7),建立Tet-on诱导表达的目的基因EID3的稳定转染细胞系。方法应用PCR技术,得到目的基因EID3的c DNA,通过双酶切、胶回收方法纯化目的片段EID3。DNA重组技术将其定向插入到真核表达载体p LVuTight-Puro,经菌落酶切、电泳以及测序鉴定。将真核表达质粒p LVu-Tight-Puro-EID3和p LVX-Tet-On Advanced Vector转染MCF-7细胞,分别通过G418和嘌呤霉素选择培养,建立由四环素(doxycycline,DOX)诱导表达的稳定转染细胞系,RT-PCR、Western Blot分别检测目的基因EID3在DOX诱导下mRNA以及蛋白的表达。结果成功构建了p LVu-Tight-Puro-EID3表达质粒,并建立了由DOX诱导表达的稳定转染细胞系,可在DOX诱导下稳定表达EID3基因的mRNA及蛋白。结论人EID3稳定表达细胞系为研究EID3基因在肿瘤辐射敏感性及药物敏感性的作用提供实验基础。(本文来源于《广东医学》期刊2018年18期）
邬成业,轩伟霞,杨会珍,张群成,李玉光[4]（2018）在《人TCF21基因真核表达载体的构建及稳定转染肺腺癌顺铂耐药细胞系A549/DDP的建立》一文中研究指出目的建立稳定高表达人转录因子21(TCF21)基因的肺腺癌顺铂耐药细胞系(A549/DDP)。方法从人肝癌细胞Hep G2中提取总RNA,应用RT-PCR技术获得人TCF21基因的c DNA,并构建p EGFP-N1-TCF21真核表达载体;用脂质体转染A549/DDP细胞,经G418筛选获得稳定表达人TCF21基因的细胞系;运用RT-PCR、Western-Blot技术对细胞系进行鉴定。结果成功构建了人TCF21基因真核表达载体,建立了能够稳定高效表达人TCF21基因的A549/DDP细胞系。结论 TCF21基因真核表达载体的构建及稳定转染A549/DDP细胞系的建立为探究其逆转人肺腺癌细胞耐药的作用及其分子机制奠定了坚实的实验基础。(本文来源于《现代预防医学》期刊2018年14期）
刘勇,王斌,陈思思[5]（2018）在《Livin和Survivin基因短发夹RNA真核表达载体的构建及其联合转染对肝癌细胞增殖和凋亡的影响》一文中研究指出目的设计并构建能够有效干扰Livin和Survivin基因的表达,且能在胞内稳定转录的表达载体;研究Livin shRNA和Survivin shRNA的联合转染对肝癌细胞增殖活性及凋亡的影响。方法根据设计siRNA的原理,分别从Livin、Survivin基因序列中选取两段siRNA靶序列模板,以其为基础进行shRNA真核表达载体Pgenesil-1-Livin和Pgenesil-1-Survivin的构建。将传代培养的肝癌Hep G2细胞株分为五组:设阴性对照组(不转染)、空白质粒组(单独转染Pgenesil-1-NC)、Survivin组(单独转染Pgenesil-1-Survivin)、Livin组(单独转染Pgenesil-1-Livin)和共转染组(联合转染Pgenesil-1-Livin和Pgenesil-1-Survivin),对各组细胞进行单独或联合转染。为检测转染2 d后Livin和Survivin蛋白表达的情况、转染后叁个不同时间点(48 h、60 h、72 h)的细胞增殖活性变化及转染后48 h的细胞凋亡率,分别采用了蛋白质印迹法、MTT法及TUNEL法。结果两种表达载体的测序结果与预期相同。与阴性对照组及空白质粒组相比,转染后2 d,Livin组、Survivin组和共转染组的蛋白表达均明显下降(P<0.05),而与Livin组和Survivin组相比,共转染组蛋白表达的下降更为显着(P<0.05);各组细胞在3个检测时间均表现出增殖活性的下降,且与Livin组和Survivin组相比,共转染组在叁个检测时间的细胞生长抑制率(IR)值分别为28.541±0.842、21.644±0.129、15.532±1.12,明显高于前者(P<0.05);转染后48 h,共转染组凋亡率为53.956%±4.332%,明显大于Livin组和Survivin组(P<0.05)。结论成功设计并构建体内可稳定转录且能有效干扰目的基因表达的质粒载体。对肝癌细胞进行Livin shRNA和Survivin shRNA的联合转染,可更大程度下调相应基因的表达,降低Livin蛋白和Survivin蛋白的胞内含量,可更为有效地阻碍癌细胞的异常增殖,促进癌细胞的程序性凋亡。(本文来源于《临床和实验医学杂志》期刊2018年09期）
但婧,宋秀胜,杨燕宁,李霞[6]（2017）在《大鼠β-防御素2真核表达载体构建及转染大鼠角膜上皮细胞的研究》一文中研究指出目的:应用基因工程技术构建含大鼠β-防御素2(rat beta defensin 2,rBD-2)目的基因的真核重组质粒,通过脂质体法转染大鼠角膜上皮细胞,检测目的基因在转染细胞中的表达,探讨应用该载体获得重组rBD-2在眼表细胞中表达的可行性,并为进一步研究rBD-2的体内外抗微生物活性提供实验基础,以期为感染性角膜病防治提供新方法。方法:将采用PAS(PCR-based Accurate Synthesis)的方法合成rBD-2 DNA片段连接到真核表达载体pI RES2-ZsGreen1的XhoⅠ与BamHⅠ酶切位点之间,构建p IRES2-ZsGreen1-rBD-2真核重组表达载体,重组质粒转化大肠杆菌DH5a感受态细胞,卡那霉素筛选出阳性克隆子,经酶切、测序鉴定重组载体构建成功后,采用脂质体法转染大鼠角膜上皮细胞,此处实验分为叁组即重组载体p IRES2-ZsGreen1-rBD-2转染的大鼠角膜上皮细胞组、未转染的空细胞组以及空载体p IRES2-ZsGreen1所转染的大鼠角膜上皮细胞组,在倒置荧光显微镜下观察细胞转染情况,最后经实时荧光定量RT-PCR相对定量法检测各组转染细胞中rBD-2基因mRNA的表达差异。结果:成功构建p IRES2-ZsGreen1-rBD-2真核重组质粒,应用实时荧光定量RT-PCR相对定量法检测到重组质粒p IRES2-ZsGreen1-rBD-2转染组的大鼠角膜上皮细胞中rBD-2基因的mRNA表达水平明显多于另两组。结论:应用基因工程技术构建的rBD-2真核表达载体p IRES2-ZsGreen1-rBD-2,通过脂质体法转染大鼠角膜上皮细胞,能够使外源rBD-2基因在大鼠角膜上皮细胞中被转录成mRNA。(本文来源于《国际眼科杂志》期刊2017年03期）
李鹏辉,费洪新,王立红,许惠玉,张海燕[7]（2017）在《构建PDCD5基因真核表达载体及电转染BGC823细胞的研究》一文中研究指出目的构建PDCD5基因真核表达载体,并电转染BGC823细胞,获得稳定转染细胞。方法设计合成PDCD5基因片段,将其插入经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切的pcDNA3.1~+表达载体,菌落PCR和基因测序进行鉴定。重组质粒电转染BGC823细胞,G418筛选数周后PCR鉴定稳定转染细胞。结果重组质粒经菌落PCR测序分析表明,PDCD5基因序列准确插入预期位置,且序列正确。重组质粒成功电转染BGC823细胞,并整合入细胞基因组DNA。结论成功构建了PDCD5基因真核表达载体,并整合进BGC823细胞基因组,为研究PDCD5基因的功能及胃癌的基因治疗提供实验基础。(本文来源于《中国现代医生》期刊2017年06期）
王春燕,陈国华,何小兵,曾爽,贾怀杰[8]（2016）在《猪瘟病毒C株特异的TCR Vα5和Vβ6真核表达载体的构建及共转染研究》一文中研究指出本实验室前期研究发现猪瘟病毒C株特异的TCR Vα5和TCR Vβ6基因家族,为进一步研究其体外表达情况,应用RT-PCR从猪外周血单个核细胞中扩增其全长基因序列,并构建TCR Vα5-pIRES2-EGFP和TCR Vβ6-pIRES2-EGFP重组质粒,将其转染293T细胞。结果显示,TCR Vα5和TCR Vβ6全长基因分别为816bp和945bp,双酶切和核酸序列测定证实TCR Vα5-pIRES2-EGFP和TCR Vβ6-pIRES2-EGFP重组质粒构建正确;转染293T细胞24h后荧光显微镜下可以看到70%以上的细胞表达EGFP蛋白。此外,实时荧光定量PCR可检测到TCR Vα5和TCR Vβ6基因的表达,单独转染组和共同转染组Western blot均可检测到EGFP蛋白的表达,且蛋白杂交带强度相似。研究结果表明,CSFV-C株特异性的TCR Vα5-pIRES2-EGFP和TCR Vβ6-pIRES2-EGFP真核表达质粒可同时转染到293T细胞中,实现体外共表达。(本文来源于《动物医学进展》期刊2016年10期）
魏林郁,卢娜,孟莉,李新娟,李璐[9]（2016）在《人P2X7真核表达载体的构建及稳定转染细胞株的建立》一文中研究指出目的:构建人P2X7基因的真核表达载体,并通过转染获得稳定表达P2X7分子的HEK293细胞株。方法:以人脑组织P2X7c DNA为模板扩增出P2X7基因,插入到真核表达载体p EGFP-N1中,构建重组质粒p EGFPN1/P2X7。用X-fect试剂盒将重组质粒转染HEK293细胞,通过G418辅助荧光筛选建立稳定表达P2X7-EGFP细胞株。经流式细胞仪、Western blot和激光共聚焦显微镜检测,了解人P2X7在HEK293细胞中的表达水平及细胞内定位。结果:重组质粒p EGFP-N1/P2X7构建正确,建立了稳定表达人P2X7的HEK293细胞系。Western blot和流式细胞仪检测证实,P2X7在HEK293细胞系中成功表达,激光共聚焦显微镜检测显示P2X7-EGFP定位在细胞膜上。结论:重组载体p EGFP-N1/P2X7构建成功并建立了稳定表达人P2X7的HEK293细胞系,为进一步研究P2X7离子通道结构和功能奠定基础。(本文来源于《中国应用生理学杂志》期刊2016年05期）
孟越,庞清江,刘江涛,余霄,陈先军[10]（2016）在《甲状旁腺素受体(PTHR)真核表达载体的构建及稳定转染HEK293细胞系的建立》一文中研究指出目的构建小鼠甲状旁腺素受体(PTHR)及其突变受体(DSEL)全长结构基因真核表达载体,建立稳定高表达PTHR及DSEL的HEK293细胞系,以应用于甲状旁腺素(PTH)模拟肽活性药物筛选及其信号通路的研究。方法通过双酶切、胶回收方法分别纯化目的片段(PTHR、DSEL基因)和质粒pcDNA3.1(+),二者分别由DNA限制性内切酶EcoRI与NotI双酶切,经T4DNA Ligase连接的方法将PTHR、DSEL基因克隆到质粒表达载体pcDNA3.1(+)中,采用测序方法及DNA限制性内切酶EcoRI与NotI双酶切方法鉴定重组质粒,脂质体转染法将重组体pcDNA3.1(+)-PTHR、pcDNA3.1(+)-DSEL及空质粒pcDNA3.1(+)分别转染至HEK293细胞,经G418筛选抗性细胞克隆,、RT-PCR及ELISA检测转染细胞PTHR、DSEL的表达情况。结果重组质粒经基因测序及DNA限制性内切酶EcoRI与NotI双酶切证实质粒表达载体pcDNA3.1(+)-PTHR、pcDNA3.1(+)-DSEL构建正确。重组体经脂质体法转染HEK293 48h后,经G418筛选3周得到细胞抗性克隆,ELISA检测到PTHR、DSEL基因在重组质粒表达载体pcDNA3.1(+)-PTHR、pcDNA3.1(+)-DSEL转染的HEK293中成功表达。RT-PCR方法检测到PTHR、DSEL基因在转录水平的表达。ELISA方法检测到重组质粒转染的HEK293中,加入甲状旁腺激素刺激后,PLC、cAMP蛋白表达量远高于空质粒pcDNA3.1(+)转染的HEK293中PLC、cAMP的表达。结论成功构建了稳定高表达PTHR、DSEL的HEK293细胞,该稳定转染细胞系的建立为进一步研究甲状旁腺素受体下游信号通道的分子机制以及筛选其模拟肽作用的活性奠定了实验基础。(本文来源于《2016年浙江省骨科学学术年会论文汇编》期刊2016-09-08）
转染真核表达载体论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
为了构建敖汉细毛羊DKK1、BMP4基因真核表达载体及单、共转染成纤维细胞后研究两基因表达量之间的变化,以敖汉细毛羊为研究对象,采集40日龄的胎羊。首先,通过RNA的提取反转录成c DNA参照Gen Bank中DKK1、BMP4基因序列信息分别设计1对含有同源臂的引物,通过PCR反应扩增获得DKK1、BMP4基因片段、利用So So试剂盒将目的片段连接到pcDNA3. 1真核表达载体上。鉴定正确后的pcDNA3. 1-DKK1、pcDNA3. 1-BMP4重组质粒,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞;其次对敖汉细毛羊的成纤维细胞进行分离培养,并将构建的pcDNA3. 1-DKK1、pcDNA3. 1-BMP4单、共转染成纤维细胞,利用荧光定量PCR技术和Western Blot技术检测DKK1、BMP4基因单转染和共转染在成纤维细胞中表达量的变化。结果显示,经酶切、测序鉴定pcDNA3. 1-DKK1、pcDNA3. 1-BMP4构建成功,成纤维细胞原代、传代培养良好,转染后细胞生长良好,经实时荧光定量PCR技术和Western Blot检测DKK1基因共转染成纤维细胞较单转染的表达量极显着下降(P <0. 01),BMP4基因的共转染较单转染表达量没有发生明显变化。成功构建了敖汉细毛羊DKK1、BMP4基因的真核表达载体,并且成功共转染成纤维细胞,DKK1基因的表达量明显下降,BMP4基因的表达量没发生明显变化,因而,推断BMP4基因抑制了DKK1基因的表达,DKK1基因对BMP4基因作用不明显,结果可为进一步研究其功能奠定基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
转染真核表达载体论文参考文献
[1].穆继宏,张浩,杨玲,余雷,吴宣树.GDF5基因真核表达载体的构建及稳定转染HEK293细胞系的建立[J].中国骨与关节损伤杂志.2019
[2].张梦瑶,杨峰,刘开东,刘积凤,贺建宁.利用同源重组技术构建DKK1、BMP4真核表达载体及共转染成纤维细胞表达的研究[J].华北农学报.2018
[3].王燕,王宇暄,刘亚敏,张桂强,苏文洲.利用Tet-on诱导基因表达系统构建EID3基因真核表达载体及稳定转染细胞株的建立[J].广东医学.2018
[4].邬成业,轩伟霞,杨会珍,张群成,李玉光.人TCF21基因真核表达载体的构建及稳定转染肺腺癌顺铂耐药细胞系A549/DDP的建立[J].现代预防医学.2018
[5].刘勇,王斌,陈思思.Livin和Survivin基因短发夹RNA真核表达载体的构建及其联合转染对肝癌细胞增殖和凋亡的影响[J].临床和实验医学杂志.2018
[6].但婧,宋秀胜,杨燕宁,李霞.大鼠β-防御素2真核表达载体构建及转染大鼠角膜上皮细胞的研究[J].国际眼科杂志.2017
[7].李鹏辉,费洪新,王立红,许惠玉,张海燕.构建PDCD5基因真核表达载体及电转染BGC823细胞的研究[J].中国现代医生.2017
[8].王春燕,陈国华,何小兵,曾爽,贾怀杰.猪瘟病毒C株特异的TCRVα5和Vβ6真核表达载体的构建及共转染研究[J].动物医学进展.2016
[9].魏林郁,卢娜,孟莉,李新娟,李璐.人P2X7真核表达载体的构建及稳定转染细胞株的建立[J].中国应用生理学杂志.2016
[10].孟越,庞清江,刘江涛,余霄,陈先军.甲状旁腺素受体(PTHR)真核表达载体的构建及稳定转染HEK293细胞系的建立[C].2016年浙江省骨科学学术年会论文汇编.2016