导读:本文包含了谷氨酸转运蛋白论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:谷氨酸,蛋白,视网膜,杆菌,氨基酸,基因,糖尿病。
谷氨酸转运蛋白论文文献综述
冯闯,左中夫,刘文强,刘学政[1]（2019）在《抑制JAK/STAT信号通路对糖尿病早期大鼠视网膜Müller细胞的保护作用及对谷氨酸转运蛋白表达的影响》一文中研究指出目的探讨JAK/STAT信号通路对糖尿病早期大鼠视网膜Müller细胞及对谷氨酸转运蛋白(glutamate transporter,GLAST)表达的影响。方法雄性SD大鼠30只,随机分成对照组、糖尿病组、AG490组,每组10只。后两组大鼠采用单次腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ) 50 mg·kg~(-1)诱导糖尿病模型。模型诱导成功后,AG490组给予AG490 10μL(17 mmol·L~(-1))玻璃体内注射给药。注射1个月后,利用试剂盒检测3组大鼠视网膜中谷氨酸含量变化,免疫荧光检测视网膜GLAST表达,免疫组织化学检测视网膜p-JAK2表达,Western blot检测视网膜GLAST、p-JAK2及p-STAT3蛋白相对表达量。结果与对照组GLAST相对表达量(65. 35±0. 66)%、p-JAK2相对表达量(32. 80±0. 40)%、p-STAT3相对表达量(17. 62±1.09)%、谷氨酸含量(23. 93±0. 67)μmol·g~(-1)相比,糖尿病组视网膜p-JAK2相对表达量(52. 16±0. 62)%、p-STAT3相对表达量(47. 41±0. 95)%及谷氨酸含量(44. 88±0. 27)μmol·g~(-1)均明显增加,GLAST相对表达量(32. 96±0. 64)%明显下降(均为P <0. 01);而与糖尿病组相比,AG490组p-JAK2相对表达量(13. 67±0. 45)%、p-STAT3相对表达量(14. 47±0. 25)%及谷氨酸含量(25. 18±0. 66)μmol·g~(-1)均明显降低,GLAST相对表达量(49. 48±0. 32)%明显增加(均为P <0. 01)。结论糖尿病早期大鼠视网膜GLAST表达明显降低,抑制JAK/STAT通路的活化可上调视网膜GLAST表达,降低视网膜谷氨酸含量,这可能有助于减轻糖尿病状态下视网膜Müller细胞的损伤。(本文来源于《眼科新进展》期刊2019年02期）
陈紫薇[2]（2018）在《谷氨酸棒杆菌中L-丝氨酸转运蛋白的研究》一文中研究指出L-丝氨酸作为一种氨基酸类药物以及化工领域最具吸引力的叁十种骨架化合物之一,拥有广阔的市场与应用前景。微生物利用糖质原料直接发酵生产L-丝氨酸,具有原料来源丰富,生产过程可持续,绿色环保等优点而备受关注。课题组前期对产L-丝氨酸的野生型谷氨酸棒杆菌进行传统诱变和代谢工程改造,获得一株具有工业应用前景的L-丝氨酸高产菌株?SSAAI。但菌株?SSAAI生产效率仍然不高,进一步提高其产量却碰到了瓶颈,探究其原因可能是重组菌大量合成L-丝氨酸后,难以高效转运到胞外,转运途径的强化有利于提高L-丝氨酸的产量。然而,在谷氨酸棒杆菌中关于L-丝氨酸转运蛋白,仅有的报道为L-苏氨酸转运蛋白ThrE同时具备L-丝氨酸的转运能力,因此挖掘和利用谷氨酸棒杆菌中L-丝氨酸的转运蛋白具有重要意义,为代谢工程改造L-丝氨酸生产菌株提供新思路。本论文以高产L-丝氨酸的谷氨酸棒杆菌?SSAAI作为研究对象,首先考察了文献报道的转运蛋白ThrE对L-丝氨酸的转运作用;继而利用前期基因组测序信息与基因序列比对挖掘新的L-丝氨酸转运蛋白。论文主要研究内容如下:(1)考察谷氨酸棒杆菌?SSAAI中转运蛋白ThrE对L-丝氨酸的转运作用。文献报道ThrE是谷氨酸棒杆菌中L-苏氨酸的转运蛋白,同时也具备L-丝氨酸的转运能力。在谷氨酸棒杆菌?SSAAI中增强表达ThrE后,发现L-丝氨酸产量没有显着提高。进一步敲除ThrE,对L-丝氨酸产量影响也不显着。表明ThrE不是菌株?SSAAI中L-丝氨酸的主要转运蛋白,在菌株?SSAAI中存在其它L-丝氨酸转运蛋白。(2)利用比较基因组学的信息探究差异基因对L-丝氨酸转运的影响。前期基因组测序及比较基因组学的分析结果表明,SD36_RS14680、SD36_RS02065、SD36_RS15070、SD36_RS14970四个基因编码的蛋白可能与L-丝氨酸转运相关。在菌株?SSAAI中分别敲除这四个基因,结果表明敲除重组菌积累的L-丝氨酸与对照菌株相比没有显着差异,表明这四个基因编码的蛋白并没有转运L-丝氨酸的功能。(3)通过基因序列比对挖掘新的L-丝氨酸转运蛋白。文献报道大肠杆菌中L-半胱氨酸的转运蛋白EamA具有转运L-丝氨酸的功能。为了挖掘新的L-丝氨酸转运蛋白,经基因序列比对发现谷氨酸棒杆菌中存在叁个eamA的同源基因:NCgl2065,NCgl2050,NCgl0580。进一步敲除NCgl2065,NCgl2050,NCgl0580,研究它们对菌株?SSAAI积累L-丝氨酸的影响。结果表明单独敲除基因NCgl2065、NCgl2050不影响菌株?SSAAI的L-丝氨酸产量,而敲除NCgl0580,重组菌?SSAAI?N0580的L-丝氨酸产量与对照菌相比下降60%,表明NCgl0580编码的蛋白可能具有转运L-丝氨酸的功能。(4)对基因NCgl0580进行功能与应用研究。通过回补实验研究发现,质粒回补NCgl0580能恢复菌株?SSAAI?N0580 L-丝氨酸生产能力。采用增强型绿色荧光蛋白(EGFP)作为报告蛋白对NCgl0580编码的蛋白进行细胞定位研究,结果表明NCgl0580编码的蛋白定位在细胞膜上。结合底物转运实验证明NCgl0580编码的蛋白是新的L-丝氨酸转运蛋白。增强表达NCgl0580构建重组菌?SSAAI-N0580,其L-丝氨酸的积累达到28.67 g/L,较对照菌?SSAAI提高了10.5%。(5)对NCgl0580进行表达调控研究。在NCgl0580上游的存在一个反向转录基因NCgl0581,编码的蛋白为LysR家族转录因子。为了探究NCgl0581是否调控NCgl0580的表达,构建了基因NCgl0581敲除的重组菌?SSAAI?N0581,其L-丝氨酸产量下降57.4%。并结合探针质粒荧光表达实验,证实NCgl0581对NCgl0580的表达具有正调控作用。这为进一步探究L-丝氨酸转运蛋白表达调控机制奠定基础。(本文来源于《江南大学》期刊2018-06-01）
刘川[3]（2018）在《谷氨酸棒状杆菌半胱氨酸转运蛋白的鉴定与特性研究以及半胱氨酸单细胞生物传感器的构建与应用》一文中研究指出半胱氨酸是一种重要的含硫氨基酸,在食品、药品以及化妆品行业中都有着广泛的应用。在发酵生产中,增强细胞对半胱氨酸的外排可以提高其产量;高通量筛选技术的应用也有助于半胱氨酸高产菌株的分离。然而谷氨酸棒状杆菌中还没有半胱氨酸转运蛋白的相关报道;另一方面,还没有可以与高通量筛选技术相结合的半胱氨酸检测方法,本课题即围绕以上两点问题展开研究。通过对大肠杆菌、菠萝泛菌中已知的半胱氨酸转运蛋白进行生物信息学比对,在谷氨酸棒状杆菌中发现了 5个同源蛋白序列:Cg1298-1299,Cg1281,Cg3038,Cg1100-1101和Cg2277-2279。在大肠杆菌半胱氨酸敏感菌株中表达Cg1298-1299,Cg3038,Cg1100-1101,Cg2277-2279恢复了菌株在半胱氨酸中的生长能力。在谷氨酸棒状杆菌13032中敲除Cg1298-1299削弱了菌株在半胱氨酸中的生长能力,在该缺失突变体中表达Cg1298-1299后恢复了菌株的半胱氨酸耐受性。通过实时定量PCR证明cg1298-1299的转录水平受到半胱氨酸的诱导而上调,而另外4个转运蛋白基因的转录水平则由于半胱氨酸的诱导有不同程度的下调。利用绿色荧光蛋白与Cg1298-1299构建了融合蛋白,确定了 Cg1298-1299定位在细胞外周部位。在半胱氨酸高产谷棒菌中过表达Cg1298-1299,菌株的半胱氨酸产量相比野生型提高了14%。另外,一种半胱氨酸的单细胞生物传感器被构建出来,用于筛选半胱氨酸高产菌株。它基于转录调控因子CcdR,并将半胱氨浓度与荧光强度信号相偶联。该传感器具有很高的专一性,并且在0mmol/L至32mmol/L浓度的半胱氨酸下,半胱氨酸浓度与荧光/酶活信号之间具有良好的线性关系。最后,该生物传感器被与高通量筛选系统相结合以筛选半胱氨酸高产菌株,经过对5万个菌株进行筛选,获得了 11个荧光提高的突变体。在发酵实验中四株突变体菌株的半胱氨酸产量相比于野生型有所提高,其产量分别为野生型的110%,120%,210%,320%。这些实验结果说明,该半胱氨酸单细胞传感器可以应用在半胱氨酸生产菌株的改良中。(本文来源于《天津科技大学》期刊2018-06-01）
王蕾[4]（2018）在《氨基酸转运蛋白对谷氨酸棒杆菌发酵产L-赖氨酸的影响研究》一文中研究指出谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)是一种好氧、非致病性的革兰氏阳性细菌,目前已被广泛用来工业化生产包括L-赖氨酸在内的多种氨基酸。谷氨酸棒杆菌在发酵生产L-赖氨酸的过程中,会产生许多的副产物氨基酸,例如谷氨酸、甲硫氨酸和分支氨基酸等。因而,减少副产物的积累不仅能够为L-赖氨酸下游的纯化和回收过程带来便利,同时因为碳源在细胞内得到积累,可能会更集中的用来进行目标产物的合成,从而提高目标产物的产量。研究发现,氨基酸的胞外转运需要相应的氨基酸转运蛋白进行辅助,而相关转运蛋白的失活对L-赖氨酸合成的影响尚未被报道。本文以C.glutamicum 23604为出发菌株,利用分子生物学手段,基于两次同源单交换原理,经过抗生素抗性平板初筛,蔗糖平板复筛等手段,失活了叁种氨基酸转运蛋白,并分析了基因缺失对C.glutamicum 23604L-赖氨酸合成的影响,主要结果如下:1.利用基因无痕敲除载体pK19mobsacB-gluE对谷氨酸胞外转运蛋白基因gluE进行基因敲除,所获重组菌C.glutamicum WL1701在基本培养基中培养96 h后,其谷氨酸的产量比对照菌降低了69.7%,表明敲除gluE基因后,C.glutamicum23604分泌谷氨酸的能力被大幅削弱,但并未完全丧失。推测C.glutamicum 23604中可能存在其他的谷氨酸胞外转运途径。研究同时发现,在基本培养基中C.glutamicum WL1701的L-赖氨酸产量与对照菌相比有一定程度的提高,在发酵培养基中则提高了9%,这表明gluE基因的缺失不仅能引起谷氨酸的分泌量减少,同时使得胞内碳源积累且流向生成L-赖氨酸的方向,从而提高了L-赖氨酸的产量。2.利用基因无痕敲除载体pK19mobsacB-brnFE对甲硫氨酸和分支氨基酸胞外转运蛋白基因brnFE进行基因敲除,所获重组菌C.glutamicum WL1702在基本培养基中培养96 h后,发现与对照菌株相比,其亮氨酸、缬氨酸和异亮氨酸的产量均降至0 mg/L,甲硫氨酸的产量减少了63.7%,表明敲除brnFE基因后,重组菌产副产物氨基酸的量大幅下降。研究同时发现,在基本培养基中C.glutamicum WL1702的L-赖氨酸产量与对照菌相比有了一定程度的提高。在发酵培养基中,重组菌株C.glutamicum WL1702在生长稳定期时的生物量比对照菌株降低了12.7%,葡萄糖消耗速率明显比对照菌快。L-赖氨酸的最终产量比对照菌提高了12.3%。这表明,brnFE基因缺失后,菌体的生物量降低,葡萄糖的消耗速率提高,副产物氨基酸的产量降低,从而提高了单个菌株的L-赖氨酸的合成能力。3.利用基因无痕敲除载体pK19mobsacB-lysP对赖氨酸胞内转运蛋白基因lysP进行基因敲除,所获重组菌C.glutamicum WL1703在发酵培养基中培养96 h后,L-赖氨酸产量较对照菌株提高了10%。发酵液经分析后发现,除了L-赖氨酸的含量相差较大外,其他的氨基酸的种类及含量大致相同。因此说明敲除lysP之后,不会影响其它的氨基酸,只影响L-赖氨酸的产量,表明LysP是一种特异性较强的氨基酸转运蛋白。4.为分析多个通道蛋白间的协同作用关系及对L-赖氨酸产量的影响,本研究构建了双缺失菌C.glutamicum WL1704和C.glutamicum WL1706及叁缺失菌C.glutamicum WL1705,通过发酵培养基培养后,测得两种双缺失菌的赖氨酸产量与对照菌相比仅提高了3%和2%,但与单缺失菌相比有一定程度的降低,叁缺失菌C.glutamicum WL1705的L-赖氨酸产量比对照菌降低了10.8%。分析原因可能是细胞膜上通道蛋白过多的缺失导致了细胞内外离子转运的失衡,从而使L-赖氨酸的产量降低;也可能是多种副产物氨基酸共同在胞内积累而产生了协同反馈抑制作用,抑制了氨基酸合成共有通路上的某种酶,从而使L-赖氨酸的产量降低。(本文来源于《齐鲁工业大学》期刊2018-05-19）
周芳雪,蒲金基,黄露瑶,李鸿鹏,吴秋玉[5]（2018）在《杧果炭疽病菌谷氨酸转运蛋白基因Cgglt1功能分析》一文中研究指出【目的】探明谷氨酸转运蛋白基因Cgglt1与杧果炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioides)致病力的关系,以便为该病害发生机制的研究提供理论依据。【方法】利用In-Fusion~?HD Cloning Kit技术构建Cgglt1敲除载体,转化杧果炭疽病菌原生质体,对获得的敲除突变体进行表型分析。【结果】获得敲除载体p Cgglt1GH1和敲除突变体△Cgglt1,表型测定显示,与野生型相比,突变体△Cgglt1菌落颜色变浅、生长速率略下降、产孢量显着下降、孢子萌发加快但不能形成附着胞,对pH的适应性有所改变,对杧果叶片的致病力显着下降。【结论】Cgglt1基因调控C.gloeosporioide菌落生长、产孢量、孢子萌发率、附着胞的形成、对pH的敏感性及对杧果叶片的致病力。(本文来源于《果树学报》期刊2018年05期）
董玉振,黄玉红,孙明军[6]（2016）在《Ⅱ型囊泡谷氨酸转运蛋白在SD大鼠胰腺的表达》一文中研究指出目的研究Ⅱ型囊泡谷氨酸转运蛋白(vesicular glutamate transporter type 2,VGLUT2)在SD大鼠胰腺组织中的表达。方法采用双重荧光免疫组织化学的方法,观察VGLUT2在大鼠胰腺组织中的分布。结果 VGLUT2免疫反应阳性细胞分布在SD大鼠胰腺内分泌腺A细胞、B细胞和部分PP细胞,阳性物质分布于细胞质,D细胞及部分PP细胞无VGLUT2免疫活性。结论 VGLUT2在大鼠胰腺的表达提示VGLUT2可能在胰腺起着非常重要的作用。(本文来源于《解剖科学进展》期刊2016年06期）
曾凯宏,杨娜,余雪梅,宋怡,邓波[7]（2016）在《白藜芦醇抑制糖尿病大鼠内层视网膜损伤、调节视网膜谷氨酸转运蛋白和谷氨酰胺合成酶表达的作用研究》一文中研究指出(本文来源于《第七届全国中西医结合营养学术会议论文资料汇编》期刊2016-06-23）
吴琼,宋靖方,张小玲,蔡弘扬,常全忠[8]（2016）在《抑郁小鼠大脑GABA及谷氨酸囊泡转运蛋白表达变化》一文中研究指出目的研究抑郁症发病中GABA及谷氨酸囊泡转运蛋白表达的变化。方法小鼠随机分为对照组和造模组,使用社会失败模型对对照组小鼠造模,之后将其分为对抑郁症敏感组及对抑郁症不敏感组。将3组小鼠分别提取突触蛋白,并使用Western blot检测VGAT及VGLUT1表达丰度。结果对抑郁症敏感组小鼠与对照组小鼠相比,在接触区域的停留时间显着降低,且在角落区域的停留时间显着增加,差异有统计学意义(P<0.05);在前额叶皮层、海马中和对照组与对抑郁症不敏感组比较,对抑郁症敏感组VGLUT1及VGAT的表达水平显着增加,差异有统计学意义(P<0.05)。对抑郁症不敏感组与对照组相比其VGAT及VGLUT1水平的表达差异均无统计学意义(P>0.05)。在纹状体,虽然对抑郁症敏感组的小鼠VGAT及VGLUT1的表达水平均有增加(P<0.05),但是对抑郁症不敏感的小鼠这些蛋白表达也显着增加。结论在抑郁症发病中前额叶皮层及海马兴奋性与抑制性囊泡转运异常,这可能与抑郁症神经递质紊乱有关。(本文来源于《重庆医学》期刊2016年11期）
郑雪婷[9]（2015）在《胱氨酸谷氨酸转运蛋白调节乳腺癌细胞转移的作用机制研究》一文中研究指出研究目的:第一部分:胱氨酸谷氨酸转运蛋白(x CT)是氨基酸转运系统的功能性亚基,细胞膜上x CT的表达与细胞摄取胱氨酸关系密切,而胱氨酸是细胞内合成谷胱甘肽(GSH)所必不可少的,对维持细胞内谷胱甘肽水平起着重要的作用。GSH是细胞内重要的抗氧化剂,在维持细胞内氧化还原平衡中起重要作用。Sut突变小鼠,是经典的Hermansky Pudlak综合症小鼠模型,在sut细胞中,由于编码x CT蛋白的Slc7a11基因的突变,编码的蛋白变为x CT-sut,其C-端的9个氨基酸替代了野生型x CT的C-端20个氨基酸。我们前期的研究发现x CT缺陷能够抑制sut细胞的生长,并通过JNK信号通路触发细胞凋亡,但通过流式细胞仪分析发现凋亡细胞只占死亡细胞的一部分,其他死亡细胞是通过何种途径死亡的还不清楚。因此我们选取x CT缺陷的小鼠黑色素细胞sut作为研究对象,在前期工作的基础上进一步探讨x CT缺陷诱导细胞死亡的机制。第二部分:乳腺癌是全球女性最常见的癌症之一,在过去20年中大多数国家的发病率持续增长。癌细胞的转移性是乳腺癌高致死率的首要原因,癌细胞易发生转移,手术治疗的效果并不能令人满意。因此了解癌细胞转移的机制是降低癌症患者死亡率的重要因素。近年来研究发现x CT在多种高转移癌细胞中表达升高,我们在前期研究中也发现x CT在乳腺癌、肝癌和黑色素瘤中高表达。但其与乳腺癌转移的关系尚未报道,因此本研究旨在探讨x CT在乳腺癌转移过程中的作用及其机制。研究方法:第一部分:为确定sut细胞是否发生自噬,我们采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)方法检测了自噬相关基因ATG5、ATG7、ATG12的表达,采用Western blot方法检测了自噬标志物LC3-I、LC3-II以及Beclin1蛋白的表达;为确定x CT缺陷是否通过内质网应激途径诱导sut细胞发生自噬性死亡,我们检测了由内质网应激激活的主要信号转导通路中关键分子ATF6以及IRE1-XBP1的表达;然后用Western blot方法检测了Akt/m TOR/p70S6K信号通路中关键蛋白质磷酸化水平的改变,确定Akt/m TOR/p70S6K是否参与x CT缺陷诱导的自噬;最后,用p38 MAPK抑制剂SB203580处理sut细胞,以探讨p38 MAPK信号通路对x CT诱导的自噬的影响。第二部分:我们对人类高转移乳腺癌细胞株MDA-MB-231转染入SLC7A11-RNAi质粒,敲降x CT,然后利用细胞划痕实验和Transwell实验检测x CT敲降后,MDA-MB-231迁移及侵袭能力的改变。利用Western Blot和RT-PCR方法检测其自噬相关标志物LC3-I,LC3-II,EMT(上皮细胞间质化)过程相关标志物E-cadherin、Vimentin以及转录因子Snail表达水平的改变。确定EMT是否参与乳腺癌细胞MDA-MB-231的转移,以及x CT是否通过自噬途径参与乳腺癌细胞MDA-MB-231的转移。结果:第一部分:1.通过电子显微镜观察,发现x CT缺陷导致sut细胞中出现了脂滴和自噬体;在x CT缺陷的sut细胞中,自噬相关基因ATG5、ATG7、ATG12的表达升高,自噬相关标志物LC3-II/LC3-I的比值升高,Beclin1蛋白的表达上调;自噬抑制剂3-MA处理sut细胞48h后观察到细胞死亡数量减少。2.在x CT缺陷的sut细胞中,内质网应激激活的主要信号转导通路中关键分子ATF6的裂解胞质片段(ATF6f)迅速产生,但没有检测到XBP1的裂解片段。3.在x CT缺陷的sut细胞中检测到Akt在Thr308位点、m TOR在Thr2481位点、p70S6K在Thr389位点的磷酸化水平降低。4.苯基丁酸能够促进蛋白折迭以及抑制内质网应激,在x CT缺陷的sut细胞中加入苯基丁酸后,发现Akt在Thr308位点、m TOR在Thr2481位点、p70S6K在Thr389位点的磷酸化水平升高,苯基丁酸的加入抑制了LC3I向LC3II转换。5.在x CT缺陷的sut细胞中,p38 MAPK,ERK磷酸化水平升高,核转录因子NF-κB的表达水平升高;加入p38 MAPK抑制剂SB203580显着抑制了Beclin1的表达升高;加入苯基丁酸抑制了p38 MAPK磷酸化水平及ERK磷酸化水平。第二部分:1.人类低转移乳腺癌细胞MCF-7中x CT的表达明显低于人类高转移乳腺癌细胞MDA-MB-231。2.敲降x CT后的MDA-MB-231细胞,与对照组相比,细胞划痕的愈合速度明显减慢,穿膜细胞明显减少。3.敲降xCT后,上皮细胞标志物E-cadherin的表达升高,间质细胞标志物Vimentin的表达降低;敲降x CT前后,MDA-MB-231细胞中转录因子Snail的m RNA水平没有明显的变化,而Snail的蛋白水平降低。4.敲降xCT后,MDA-MB-231细胞中LC3-II/LC3-I的比值增高。结论:第一部分:xCT缺陷能够诱导sut细胞发生内质网应激和自体吞噬。内质网应激通过激活p38 MAPK信号通路进而抑制Akt/m TOR/p70S6K信号通路,从而介导了x CT缺陷诱导的自噬,最终导致sut细胞的自噬性死亡。第二部分:x CT在人类高转移乳腺癌细胞MDA-MB-231中高表达。敲降x CT的表达可以使人类高转移乳腺癌细胞MDA-MB-231发生自噬,降解转录因子Snail,从而抑制EMT,降低人类高转移乳腺癌细胞MDA-MB-231的转移能力。(本文来源于《天津医科大学》期刊2015-05-01）
桑丹,孙海洲,赵存发,赵宏丽,付绍印[10]（2014）在《瘤胃保护性精氨酸及N-氨甲酰谷氨酸对细毛羊断奶羔羊肠道碱性氨基酸转运蛋白mRNA表达量的影响》一文中研究指出研究旨在探讨不同水平瘤胃保护性精氨酸及N-氨甲酰谷氨酸(NCG)对细毛羊断奶羔羊小肠内编码碱性氨基酸转运蛋白rBAT、b0,+AT、4F2hc和CAT-1的溶质载体家族SLC3A1、SLC7A9、SLC3A2、SLC7A1mRNA相对表达量的影响。试验选用15只体况良好、体重为25.00 kg±3.39 kg的5月龄半同胞羯鄂尔多斯细毛羊断奶羔羊随机分成5组,分别为基础日粮组(Ⅰ组)、基础日粮+NCG 0.15 g/d组(Ⅱ组)、基础日粮+NCG0.20 g/d组(Ⅲ组)、基础日粮+Arg 1.50 g/d组(Ⅳ组)、基础日粮+Arg 2.00 g/d组(V组)。经45 d饲喂期后进行屠宰,取肠样检测目的基因的mRNA相对表达量。结果表明,日粮中添加瘤胃保护性精氨酸及N-氨甲酰谷氨酸提高了SLC3A1、SLC7A9、SLC3A2和SLC7A1 mRNA在十二指肠和空肠中的相对表达量。在十二指肠和空肠中处理组与对照组总体差异显着(P<0.05)。(本文来源于《中国畜牧兽医学会养羊学分会2014年全国养羊生产与学术研讨会议论文集》期刊2014-08-20）
谷氨酸转运蛋白论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
L-丝氨酸作为一种氨基酸类药物以及化工领域最具吸引力的叁十种骨架化合物之一,拥有广阔的市场与应用前景。微生物利用糖质原料直接发酵生产L-丝氨酸,具有原料来源丰富,生产过程可持续,绿色环保等优点而备受关注。课题组前期对产L-丝氨酸的野生型谷氨酸棒杆菌进行传统诱变和代谢工程改造,获得一株具有工业应用前景的L-丝氨酸高产菌株?SSAAI。但菌株?SSAAI生产效率仍然不高,进一步提高其产量却碰到了瓶颈,探究其原因可能是重组菌大量合成L-丝氨酸后,难以高效转运到胞外,转运途径的强化有利于提高L-丝氨酸的产量。然而,在谷氨酸棒杆菌中关于L-丝氨酸转运蛋白,仅有的报道为L-苏氨酸转运蛋白ThrE同时具备L-丝氨酸的转运能力,因此挖掘和利用谷氨酸棒杆菌中L-丝氨酸的转运蛋白具有重要意义,为代谢工程改造L-丝氨酸生产菌株提供新思路。本论文以高产L-丝氨酸的谷氨酸棒杆菌?SSAAI作为研究对象,首先考察了文献报道的转运蛋白ThrE对L-丝氨酸的转运作用;继而利用前期基因组测序信息与基因序列比对挖掘新的L-丝氨酸转运蛋白。论文主要研究内容如下:(1)考察谷氨酸棒杆菌?SSAAI中转运蛋白ThrE对L-丝氨酸的转运作用。文献报道ThrE是谷氨酸棒杆菌中L-苏氨酸的转运蛋白,同时也具备L-丝氨酸的转运能力。在谷氨酸棒杆菌?SSAAI中增强表达ThrE后,发现L-丝氨酸产量没有显着提高。进一步敲除ThrE,对L-丝氨酸产量影响也不显着。表明ThrE不是菌株?SSAAI中L-丝氨酸的主要转运蛋白,在菌株?SSAAI中存在其它L-丝氨酸转运蛋白。(2)利用比较基因组学的信息探究差异基因对L-丝氨酸转运的影响。前期基因组测序及比较基因组学的分析结果表明,SD36_RS14680、SD36_RS02065、SD36_RS15070、SD36_RS14970四个基因编码的蛋白可能与L-丝氨酸转运相关。在菌株?SSAAI中分别敲除这四个基因,结果表明敲除重组菌积累的L-丝氨酸与对照菌株相比没有显着差异,表明这四个基因编码的蛋白并没有转运L-丝氨酸的功能。(3)通过基因序列比对挖掘新的L-丝氨酸转运蛋白。文献报道大肠杆菌中L-半胱氨酸的转运蛋白EamA具有转运L-丝氨酸的功能。为了挖掘新的L-丝氨酸转运蛋白,经基因序列比对发现谷氨酸棒杆菌中存在叁个eamA的同源基因:NCgl2065,NCgl2050,NCgl0580。进一步敲除NCgl2065,NCgl2050,NCgl0580,研究它们对菌株?SSAAI积累L-丝氨酸的影响。结果表明单独敲除基因NCgl2065、NCgl2050不影响菌株?SSAAI的L-丝氨酸产量,而敲除NCgl0580,重组菌?SSAAI?N0580的L-丝氨酸产量与对照菌相比下降60%,表明NCgl0580编码的蛋白可能具有转运L-丝氨酸的功能。(4)对基因NCgl0580进行功能与应用研究。通过回补实验研究发现,质粒回补NCgl0580能恢复菌株?SSAAI?N0580 L-丝氨酸生产能力。采用增强型绿色荧光蛋白(EGFP)作为报告蛋白对NCgl0580编码的蛋白进行细胞定位研究,结果表明NCgl0580编码的蛋白定位在细胞膜上。结合底物转运实验证明NCgl0580编码的蛋白是新的L-丝氨酸转运蛋白。增强表达NCgl0580构建重组菌?SSAAI-N0580,其L-丝氨酸的积累达到28.67 g/L,较对照菌?SSAAI提高了10.5%。(5)对NCgl0580进行表达调控研究。在NCgl0580上游的存在一个反向转录基因NCgl0581,编码的蛋白为LysR家族转录因子。为了探究NCgl0581是否调控NCgl0580的表达,构建了基因NCgl0581敲除的重组菌?SSAAI?N0581,其L-丝氨酸产量下降57.4%。并结合探针质粒荧光表达实验,证实NCgl0581对NCgl0580的表达具有正调控作用。这为进一步探究L-丝氨酸转运蛋白表达调控机制奠定基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
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