生物还原活性物论文-张江虹

生物还原活性物论文-张江虹

导读:本文包含了生物还原活性物论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献,主要关键词:生物还原活性物,629,丝裂霉素C,药物相互作用

生物还原活性物论文文献综述

张江虹[1](2007)在《新型吲哚醌类生物还原活性物629的辐射增敏效应及机制和体外代谢性研究》一文中研究指出由于肿瘤本身的特定血管分布,恶性肿瘤内存在有一定比例的乏氧细胞,他们对低LET的辐射敏感性较低,是影响放射治疗肿瘤取得较好疗效的重要因素之一。为了克服这个问题曾提出过许多减少乏氧细胞或增加肿瘤内氧含量的方法。乏氧细胞辐射增敏剂是解决此问题的途径之一,并被认为是比较理想的途径。生物还原活性物是针对实体肿瘤内乏氧细胞的选择性细胞毒前药,在乏氧条件下经体内的生物还原酶活化产生细胞毒性代谢物,可增强放疗和化疗效果。作为新一代辐射增敏药物,生物还原活性物将是今后肿瘤增敏药物研发的主要方向之一,但其发挥生物学作用的关键是生物还原酶,所以研究生物还原活性物的还原酶,对其药代动力学和药物治疗效应具有重要意义,可以为临床合理用药提供理论指导,为新型生物还原活性物设计提供依据。而在IN VITRO研究生物还原活性物与肝脏药物代谢酶的相互作用,可在药物研发早期预测体内发生的药物—药物相互作用(Drug-Drug Interactions,DDI),从而减少在新药研发过程中因严重DDI被淘汰的巨大风险,并可指导临床上安全合理用药,对未来新药开发具有重要意义。目的1、629的细胞毒性和辐射增敏效应及其机制的研究研究丝裂霉素C(MMC)的衍生物——一种新型吲哚醌类的生物还原活性药物5-氮丙啶-3-羟甲基-1-甲基吲哚-4,7-二酮(5-(aziridin-1-yl)-3-hydroxymethyl-1-methylindole-4,7-dione简称629)对人原代肝细胞的细胞毒性,及其与MMC对肝肿瘤HepG2细胞和转染有结构性雄烷受体(Constitutibe AndrostaneReceptor,CAR)的HepG2细胞(亦称g2car细胞)的细胞毒性,探讨CAR转染对它们的生物学效应的影响;同时检测629和MMC在乏氧、有氧、不同剂量γ射线等条件下对HepG2细胞和g2car细胞的辐射增敏效应,并进一步研究629在不同条件下对HepG2细胞和g2car细胞的细胞周期及细胞凋亡的影响,旨在获得作为肿瘤辐射增敏候选药,629具有高效低毒之特点的实验证据,并进一步地研究其在不同条件下的辐射增敏效应以及可能的作用机制,为其能早日应用于临床提供实验和理论的基础资料。2、乏氧条件下X射线诱导旁效应及其机制的研究研究乏氧条件下,X射线诱导HepG2细胞和人恶性神经胶质母细胞瘤T98G细胞的旁效应及其发生机制。检测629在X射线作用下对HepG2细胞和T98G细胞的细胞毒性和辐射增敏效应,进一步明确629作为新一代辐射增敏候选药的生物学效应。3、629的体外代谢性研究用高压液相色谱法(High Pressure Liquid Chromatography,HPLC)研究629在体外人肝脏微粒体中的代谢及其与细胞色素P450s酶的相互作用。旨在分析629的代谢动力学(Metabolic Kinetics)和代谢途径(Metabolic Pathway),以及629对细胞色素P450(Cytochrome P450,CYP450)的诱导和抑制作用,获得629对CYP450活性的影响,为其将来能在临床上的广泛而深入的应用提供基础资料。方法1 629的细胞毒性和辐射增敏效应及其作用机制的研究1.1 CAR基因转染的鉴定实验前对已经转染建系的g2car细胞进行鉴定,首先应用G418耐药性筛选,并进一步应用RT-PCR检测CYP286 mRNA和CAR mRNA的表达。1.2 629的细胞毒性的研究应用四氮甲基唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MMT)比色法,测定629对人原代肝细胞、肝肿瘤HepG2细胞、g2car细胞的细胞毒性,及其母体化合物MMC对HepG2细胞和g2car细胞的细胞毒性。1.3 629在不同条件下的辐射增敏效应采用体外细胞克隆培养法观察MMC和629对HepG2细胞和g2car细胞在乏氧、有氧以及不同剂量γ射线照射下的辐射增敏作用,计算各种条件下MMC和629的增敏比(Sensitization enhancement ratio,SER),用线性回归求得C_(1.6),比较两者的增敏效应。1.4不同条件下629对HepG2细胞和g2car细胞的细胞周期和细胞凋亡的影响应用流式细胞技术分析629在不同浓度、不同时间、乏氧、有氧、不同剂量γ射线照射等条件下,对HepG2细胞和g2car细胞的细胞周期和细胞凋亡的影响。2乏氧条件下X射线诱导的旁效应及其机制的研究2.1 X-射线对HepG2细胞和T98G细胞的直接照射作用于有氧或乏氧条件下给予HepG2细胞和T98G细胞一定剂量的X射线照射,然后测定不同条件下各组的微核(micronucleus,MN)率,鉴定两种细胞的辐射敏感性。2.2乏氧条件下,X射线诱导HepG2细胞和T98G细胞的旁效应采用条件培养基(Conditioned Medium,CM)和共培养(Co-cultured,CC)两种作用方式,使0.5%氧浓度条件下培养的HepG2细胞和T98G细胞接受一定剂量的X射线照射,收集受照射的细胞或培养液,处理未照射的细胞,应用双核微核形成方法研究乏氧条件下未照射组细胞双核MN率的变化。2.3自由基在旁观者效应中的作用采用CM和CC作用方式,检测加1%DMSO前后,未照射组微核率的变化情况,确定自由基在旁观者效应中的作用。2.4不同氧含量作用下,NO在旁观者效应中的作用采用CM作用方式,分别在有氧和乏氧条件下收集条件培养基,然后以有氧条件下的条件培养液处理乏氧和有氧条件下的未照射组,以乏氧条件下的条件培养液处理有氧和乏氧下的未照射组,照射前添加iNOS的特异性抑制剂氨基胍,同时设置不加抑制剂的对照组,检测iNOS和氧含量在旁观者效应中的作用。2.5 629在乏氧X射线照射下对HepG2细胞和T98G细胞染色体的影响乏氧或有氧条件下的细胞,照射前给予629,照射后按上面方法检测各组的微核率,测定629在X射线作用下对HepG2细胞和T98G细胞染色体的影响。2.6乏氧诱导因子-1α(Hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)在乏氧和射线照射下的表达采用western blot方法,研究乏氧不同时间HIF-1α基因的表达,及有氧条件下,射线对其的诱导作用。3 629体外代谢性研究3.1应用体外人肝脏微粒体代谢模型,测定629的代谢稳定性:不同浓度的629与人肝脏微粒体作用后,用高压液相色谱法(High PressureLiquid Chromatography,HPLC)分离、检测629的清除情况,确定629在肝脏中代谢的稳定性。3.2 IN VITRO鉴定629在人肝脏微粒体中的代谢途径:以不同浓度的629为反应底物,与人肝脏微粒体共孵育,分别添加CYP1A2、CYP286、CYP2A6、CYP2C19、CYP2E1、CYP3A4、CYP2D6和CYP2C9的特异性抑制剂,用HPLC分析方法检测629的清除情况,以此作为试验组。同时设定不加CYP450s酶的特异性抑制剂和辅酶β—NADPH作为阴性对照组(Negativecontrol,NC);加辅酶β—NADPH,但不加各种特异性抑制剂作为阳性对照组(Positive control,PC)。各组比较以确定参与629代谢的主要酶类。3.3 IN VITRO检测629对CYP2A6、CYP2D6、CYP3A4和CYP286的抑制作用:不同浓度629与人肝脏微粒体共孵育,然后分别加入CYP2A6、CYP2D6、CYP3A4和CYP286的特异性底物,应用HPLC分析方法检测各种酶特异性代谢产物的生成情况,进而得出629对这些酶的抑制作用,结果应用Graphpad Prism4.0分析获得629抑制各种酶的IC_(50)。3.4 IN VITRO检测629对CYP1h2和CYP 3A4的诱导作用:人原代肝细胞与不同浓度的629共孵浴,2d后分别添加CYP1A2和CYP3A4的特异性抑制剂,用HPLC方法分析CYP1A2和CYP3A4的特异性代谢产物的生成。同时设定NC组:反应体系中不加629;PC组:反应体系中分别加CYP1A2和CYP3A4的特异性诱导剂。用HPLC检测CYPlA2和CYP3A4的特异性代谢产物的生成。比较各组产物的生成情况,以确定629对CYP1A2和CYP3A4活性的影响。结果1.629的细胞毒性和辐射增敏效应及其机制的研究1.1 CAR基因转染的鉴定G418耐药性筛选和RT—PCR检测到CAR和CYP286 mRNA在g2car细胞中有表达,在HepG2细胞中无表达,明确CAR基因正确转染了HepG2细胞。1.2 629的细胞毒性的研究629在其检测范围内对人原代肝细胞无细胞毒作用;乏氧情况下,MMC和629的细胞毒性比有氧情况下均有所增加(P<0.05);转染CAR以后,两者的细胞毒性均增加,但对MMC影响较明显(P<0.05),对629的影响不明显(P>0.05)。1.3 629的辐射增敏效应MMC和629对HepG2细胞和g2car细胞具有辐射增敏作用;629的辐射增敏效果在两种细胞均强于MMC;对g2car细胞的辐射增敏略强于HepG2细胞,结果显示转染CAR可影响629和MMC对肝肿瘤HepG2细胞的辐射增敏效应。1.4不同条件下629对HepG2细胞和g2car细胞的细胞周期和细胞凋亡的影响629于不同条件下作用于HepG2细胞和g2car细胞,检测发现两种细胞细胞周期的不同时相随着的不同处理发生改变。而细胞凋亡率均随着药物作用时间的增加、药物浓度的增大、辐射剂量的增加而增高。2.乏氧条件下X射线诱导旁效应及机制的研究2.1乏氧或有氧条件下,X射线对HepG2细胞和T98G细胞的直接照射作用两种细胞的微核率均为有氧条件下大于乏氧条件下,T98G细胞的微核率大于HepG2细胞的微核率,HepG2细胞和T98G细胞在2Gy X射线照射时的微核率氧增敏比分别为1.55和2.39,另由图2-1可知HepG细胞的微核率随照射剂量的增加变化缓慢,而T98G细胞的微核率随照射剂量的增加变化迅速,故HepG2细胞对X射线不敏感,T98G细胞对X射线敏感。2.2乏氧条件下,X射线诱导HepG2细胞和T98G细胞的旁效应乏氧条件下,未照射组的微核形成率随相应的照射组的照射剂量增高而增高,存在剂量效应关系。2.3自由基在旁效应中的作用自由基清除剂1%DMSO可以减少未照射组细胞的微核率。2.4不同氧含量作用下,NO在旁效应中的作用两种细胞在有氧条件下收集的条件培养基处理乏氧组细胞(O_2→N_2)组微核率显着高于其他叁组(有氧条件下收集的条件培养基处理有氧细胞组(O_2→O_2);乏氧条件下收集的条件培养基处理有氧细胞组(N_2→O_2);乏氧条件下收集的条件培养基处理乏氧细胞组(N_2→N_2))(P<0.05);添加iNOS特异性抑制剂后,T98G细胞的0Gy组添加AG前后变化不大(P>0.05),而5Gy组,各条件培养基处理组的微核率均有所降低(P<0.05),但O_2→N_2组降低的最明显(P<0.01);HepG2细胞除O_2→N_2组的微核率显着降低外(P<0.05),其他叁组降低的不显着(P>0.05)。2.5 629在乏氧X射线照射下对HepG2细胞和T98G细胞染色体的改变乏氧条件下,629对HepG2细胞和T98G细胞的微核率分别是有氧条件下的1.28和1.25倍;另外,乏氧下2Gy X射线照射时,加629组的HepG2细胞和T98G细胞的微核率分别是不加629组的1.78和2.05倍,可见629在乏氧条件下细胞毒性和辐射增敏效应增强。2.6乏氧诱导因子-1α在乏氧和射线照射下的表达T98G细胞随着乏氧时间的延长,HIF-1α基因的表达也增加,乏氧48h时达最高值,有氧条件下未见表达;HepG2细胞则在乏氧24h表达最高,之后表达减弱,在有氧条件下有微弱/轻微表达;此外,X射线照射可诱导HIF-1α的表达。3.629体外代谢性研究3.1应用人肝脏微粒体代谢模型研究629的代谢稳定性分离制备人肝脏微粒体,测定其微粒体蛋白的浓度为1mg/ml;HPLC方法检测到药物可在体外人肝脏微粒体中代谢并具有代谢稳定性,其Km值为78μg/ml,95%可信区间(Confidence interval,CI):为55-111μg/ml。3.2 IN VITRO鉴定629在人肝脏微粒体中的代谢途径比较八种CYP450同工酶对629的代谢情况,其中CYP1A2、CYP286和CYP2A6可显着参与629的代谢,(P<0.05),而CYP2C19、CYP2E1、CYP3A4、CYP2D6和CYP2C9不能显着代谢629(P>0.05)。3.3 IN VITRO检测629对CYP2A6、CYP2D6、CYP3A4和CYP286的抑制作用629对CYP2A6、CYP2D6和CYP3A4均有抑制作用,其半数抑制剂量(IC_(50)分别为:938.4ng/ml、779.2ng/ml和692.8ng/ml;在其检测范围之内对CYP286无显着抑制作用。3.4 IN VITRO检测629对CYP 1A2和CYP 3A4的诱导作用629在检测范围内对CYP1A2和CYP3A4均无显着的诱导作用。结论1、629对人原代肝细胞不具有细胞毒作用,但对肝肿瘤细胞和神经胶质瘤细胞均具有乏氧选择性的细胞毒作用,并且强于其母体化合物MMC,并且在γ射线和X射线作用下均具有辐射增敏效应,初步确定具有高效低毒的优点。2、转染CAR基因可以增加HepG2细胞CYP286 mRNA的表达,并可增强乏氧条件下的629和MMC细胞毒性和辐射增敏效应。3、629可以通过改变细胞周期,诱导细胞凋亡发挥其乏氧细胞毒性和辐射增敏效应。4、在乏氧的HepG2细胞和T98G细胞中可以观察到辐射诱导的旁观者效应,该效应的发生与自由基,尤其是活性氧自由基、NO自由基有关;此外,乏氧和辐射照射可诱导HIF-1α基因的表达,推测HIF-1α基因的表达可能在旁观者效应中起作用。5、应用体外人肝微粒体的代谢模型检测到新型吲哚醌类生物还原活性物629可在体外人肝脏微粒体中代谢,细胞色素P450酶中CYP 1A2、CYP286和CYP2A6可在体外参与629的代谢。此外,在微粒体水平629可抑制CYP2A6、CYP2D6和CYP3A4的活性,对CYP286无抑制作用,但629抑制酶活性的IC_(50)远远大于其细胞毒性的IC_(50),故其仍具有较高的安全性。在细胞水平,629在检测范围之内对CYP1A2和CYP3A4无诱导作用。以上结果显示629在体外代谢酶学方面具有较高的安全性,为629将来在临床上与其他药物联合应用提供了实验和理论的依据。(本文来源于《复旦大学》期刊2007-04-01)

张江虹,孔肇路,郝福荣,沈芝芬,季华均[2](2006)在《新型吲哚醌类生物还原活性物629的细胞毒性和辐射增敏作用的研究》一文中研究指出研究丝裂霉素C(MitomycinC,MMC)的衍生物-新型吲哚醌类生物还原活性物629的细胞毒性和辐射增敏作用。采用四氮甲基唑蓝(Methylthiazolyltetrazolium,MMT)比色法研究MMC和629对HepG2细胞的细胞毒性以及629对肝原代细胞的细胞毒性,结果表明629对肝原代细胞无毒性作用,而其对HepG2肝癌细胞的毒性要高于其母体化合物MMC;此外,采用体外细胞克隆培养法观察MMC和629对HepG2细胞的辐射增敏作用,结果显示629的辐射增敏效果强于MMC。上述研究提示,629具有低毒的增敏效果,在临床上将具有广泛的应用远景。(本文来源于《辐射研究与辐射工艺学报》期刊2006年05期)

金一尊[3](1995)在《生物还原活性物的研究进展》一文中研究指出生物还原活性物是一类通过在生物体内还原而产生活性的化合物,这是放射增敏研究领域中较为活跃的内容。本文就国内外研究较多的几种生物还原活性物及其它醌类化合物的化学结构、生物学活性、作用机理等进行综述,并介绍SR-4233的临床研究结果。(本文来源于《国外医学(卫生学分册)》期刊1995年02期)

生物还原活性物论文开题报告

(1)论文研究背景及目的

此处内容要求:

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景,再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题,并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例:

研究丝裂霉素C(MitomycinC,MMC)的衍生物-新型吲哚醌类生物还原活性物629的细胞毒性和辐射增敏作用。采用四氮甲基唑蓝(Methylthiazolyltetrazolium,MMT)比色法研究MMC和629对HepG2细胞的细胞毒性以及629对肝原代细胞的细胞毒性,结果表明629对肝原代细胞无毒性作用,而其对HepG2肝癌细胞的毒性要高于其母体化合物MMC;此外,采用体外细胞克隆培养法观察MMC和629对HepG2细胞的辐射增敏作用,结果显示629的辐射增敏效果强于MMC。上述研究提示,629具有低毒的增敏效果,在临床上将具有广泛的应用远景。

(2)本文研究方法

调查法:该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法:用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法:通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法:通过调查文献来获得资料,从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法:依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法:对研究对象进行“质”的方面的研究,这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法:通过具体的数字,使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法:运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法:这是社会科学用来分析社会现象的一种方法,从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法:通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。

生物还原活性物论文参考文献

[1].张江虹.新型吲哚醌类生物还原活性物629的辐射增敏效应及机制和体外代谢性研究[D].复旦大学.2007

[2].张江虹,孔肇路,郝福荣,沈芝芬,季华均.新型吲哚醌类生物还原活性物629的细胞毒性和辐射增敏作用的研究[J].辐射研究与辐射工艺学报.2006

[3].金一尊.生物还原活性物的研究进展[J].国外医学(卫生学分册).1995

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