导读:本文包含了全克隆论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:干细胞,肿瘤,基因,脂蛋白,基质,蛋白酶,对虾。
全克隆论文文献综述
杨帅[1]（2016）在《基于耐药和单细胞全克隆构建肝癌干细胞体外富集模式的实验研究》一文中研究指出背景：肿瘤干细胞(cancer stem cells,CSCs)是指在肿瘤组织中,极少量具有以无限的自我更新潜能及真正的致瘤能力为最重要特征的肿瘤细胞的群体。肝癌我国最常见的恶性肿瘤,恶性度极高且病情进展很快,病发后的生存时间仅为6个月被称为“癌中之王”,其发病人数也已占到全世界病例的40%,故被列入预防治疗的重点疾病。如何才能积极有效的分离纯化出肝癌干细胞,一直是学术界着眼及研究的重点热点,本课题组选取了肝母细胞瘤HepG2细胞株为研究对象,其来源于一个15岁白人的肝细胞腺瘤组织,因可能是最早分离得到且背景清晰、表型性状稳定等优点,已成为被广泛使用的肝细胞系而应用于肝癌研究的领域内。根据单个细胞全克隆富集方法的优势结合临床广谱抗肿瘤化疗药物阿霉素进行细胞毒性干预,将获得的全克隆肝癌细胞经异种移植实验检测其成瘤性,从而试图建立一种单细胞全克隆加阿霉素干预的改良型肝癌干细胞富集模式。研究发现：单个细胞有效稀释克隆培养法得到的全克隆细胞在裸鼠体内成瘤率达到100%,而在不同浓度阿霉素干预模式下的单个细胞克隆培养,所得到的全克隆比率不尽相同且裸鼠体内成瘤率也有较大差异。研究表明经单个细胞全克隆加阿霉素干预的培养方法较大可能的成为一种新的改良型肝癌干细胞富集模式。目的：观察人肝母细胞瘤HepG2单个细胞培养形成的叁种克隆及阿霉素干预下全克隆裸鼠体内成瘤情况,探讨基于肿瘤干细胞耐药特性和体外单细胞培养形成全克隆现象,建立一种简单易行的肝癌干细胞体外富集模式。方法：选择人肝母细胞瘤HepG2细胞系,以有限稀释法建立体外单细胞克隆培养体系,进行以下两部分实验：1.先观察体外单细胞克隆培养的克隆细胞生长曲线和形成全克隆、部分克隆以及旁克隆等叁类克隆比例后,选取全克隆逐级扩增,最后取106的HepG2细胞进行裸鼠皮下荷瘤实验。2.阿霉素干预HepG2癌细胞克隆的实验模式：(1).先加0.1μMg/mL、0.05μg/mL和0.01μMg/mL梯度浓度的阿霉素干预HepG2细胞48hrs,单个细胞克隆培养后形成的全克隆、部分克隆及旁克隆进行逐级扩增和裸鼠荷瘤实验。(2).先进行单细胞克隆培养,然后只针对全克隆细胞加0.5μg/mL、0.3μg/mL、 0.2μg/mL、0.1μg/mL、0.05μg/mL和0.01μg/mL梯度浓度的阿霉素干预48hrs,观察全克隆生长情况,对于干预后存活的全克隆全部进行逐级扩增和裸鼠荷瘤实验。结果：1.HepG2细胞单细胞培养可形成全克隆、部分克隆和旁克隆等叁种癌细胞扩增生长模式,总克隆形成率为(32.78±9.03)%,其中克隆构成为全克隆(7.12±2.96)%、部分克隆(62.67±13.39)%、旁克隆百分比(30.21±14.87)%；所有全克隆均可逐级扩增,且在106细胞水平裸鼠成瘤率为100%(8/8)。 2.(1)先阿霉素干预后进行单细胞克隆培养,发现仅0.05μg/mL和0.01μg/mL组的全克隆存活,并可逐级扩增培养和100%(3/3、8/8)成瘤。(2)单细胞克隆培养后的全克隆进行阿霉素干预,发现仅0.1μg/mL、 0.05μg/mL、和0.01μg/mL、组全克隆存活,并可逐级扩增培养和100%(5/5、5/5、5/5)成瘤。结论：HepG2细胞体外单细胞培养的全克隆样生长且耐受阿霉素杀伤的细胞群体,极有可能是富含肝癌干细胞,这可能是简单有效体外肿瘤干细胞富集模式。(本文来源于《广西医科大学》期刊2016-05-01）
杨立芬,吴小华,梁军,孙亚楠,陈琳[2]（2015）在《卵巢癌SKOV3细胞中筛选获得的全克隆细胞的生物学特性及其形成血管生成拟态的能力》一文中研究指出目的 :观察从卵巢癌SKOV3细胞中筛选获得的全克隆(holoclone)细胞的特性及其形成血管生成拟态(vasculogenic mimicry,VM)的能力。方法 :通过有限稀释法对SKOV3细胞进行单细胞培养,形成3种单细胞克隆[全克隆、部分克隆(meroclone)和亚克隆(paraclone)];通过裸鼠体内成瘤实验和软琼脂克隆形成实验比较3种单克隆的生物学特性,并通过叁维细胞培养模型观察其形成VM的能力。蛋白质印迹法检测全克隆细胞中CD133、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinases-2,MMP-2)及MMP-9的表达水平。结果 :SKOV3细胞单细胞培养10~14 d后,全克隆、部分克隆和亚克隆细胞所占的比例分别为(17.4±0.8)%、(30.1±0.4)%和(52.5±1.1)%。裸鼠体内成瘤率结果显示,全克隆细胞的成瘤率为80%,部分克隆和亚克隆细胞在裸鼠中均未有肿瘤形成。软琼脂克隆形成实验结果提示,全克隆细胞的克隆形成率为(16.7±3.8)%,显着高于部分克隆及亚克隆细胞的(6.5±1.5)%和(1.2±0.7)%(F=4.085,P<0.05)。叁维培养中,全克隆组可以形成VM,部分克隆和亚克隆细胞不能形成VM。全克隆细胞中CD133、MMP-2和MMP-9蛋白的表达水平均高于亲本SKOV3细胞(P值均<0.05),并高于部分克隆和亚克隆细胞(P值均<0.05)。结论 :SKOV3细胞中单细胞克隆在形态和生物学特性上存在异质性,其中全克隆细胞亚群具有肿瘤干细胞样细胞特性,具有形成VM的能力。全克隆是SKOV3细胞中具有较高复发能力的细胞亚群。(本文来源于《肿瘤》期刊2015年07期）
曾文清,罗佐杰[3]（2013）在《全克隆在肿瘤干细胞研究中的应用和局限性》一文中研究指出全克隆指细胞在体外通过克隆培养法形成的一种紧密规则的克隆。具体方法是使单细胞悬液重新繁衍成新的细胞群体,其中紧密、规则、具备连续传代能力的是全克隆。研究已证实全克隆来源于干细胞,而近年来的肿瘤干细胞(TSC)研究发现肿瘤组织中存在小部分细胞在克隆培养中形成全克隆,其具有自我增殖、分化的能力,并具有很强的(本文来源于《实用医学杂志》期刊2013年21期）
乔莹,王军,钟声平,刘洪涛,毛勇[4]（2013）在《日本囊对虾apo-14基因的全克隆及序列分析》一文中研究指出以日本囊对虾(Marsupenaeus japonicus)肝胰腺组织为实验材料,提取总RNA,通过3'以及5'-RACE基因克隆技术,首次在日本囊对虾中克隆到载脂蛋白apolipoprotein-14(apo-14)基因的全长序列,包含完整的ORF以及3'-UTR和5'-UTR。日本囊对虾apo-14cDNA序列全长为784bp,其中ORF长度为420bp,编码139个氨基酸。对虾apo-14氨基酸序列与其他鱼类apo-14氨基酸序列有较高的相似性。(本文来源于《热带生物学报》期刊2013年01期）
周志华,王卫兵,张建东[5]（2011）在《全克隆与肿瘤干细胞》一文中研究指出干细胞在体外单个培养时,形成的克隆具有规则而致密的形态,这种独特的克隆被称为全克隆。近年来发现肿瘤内也存在具有干细胞特性的肿瘤细胞,即肿瘤干细胞,是肿瘤发生、复发和转移的根源。而研究证实,多种类型的肿瘤干细胞在体外单克隆培养亦可形成特征性的全克隆,这对分离富集肿瘤干细胞及深入研究其生物学特性具有重要意义。全克隆可望作为肿瘤干细胞研究一个有用的体外模型。(本文来源于《国际病理科学与临床杂志》期刊2011年05期）
侯丽霞,何启伟,赵双宜,焦自高,王崇启[6]（2008）在《甜瓜蔗糖磷酸合成酶基因全克隆及工程载体的构建》一文中研究指出蔗糖磷酸合成酶在甜瓜果实蔗糖合成途径中起关键性的调节作用,克隆该基因并导入甜瓜低糖自交系,可改良甜瓜果实品质创新优良种质。从甜瓜幼苗叶片提取总RNA,利用RT-PCR与Southern blot方法相结合,重组子质粒经限制性内切酶酶切和PCR验证以及测序同源性比较,克隆到基因的5’(2859bp)和3’(852bp)。应用高保真Taq聚合酶PCR拼接蔗糖磷酸合成酶完整cDNA序列3692bp,该片段与GenBank中其它植物基因序列具有97%￣99%的同源性,登录号DQ364058。应用BamHⅠ、KpnⅠ、BglⅡ限制性酶切获得植物双元表达载体pROK2及基因的线性片段,通过T4连接酶反应,构建了以CaMV35S为启动子,以Tnos为终止子的工程载体pROK-SPS,该载体含有Npt-II选择标记基因。(本文来源于《果树学报》期刊2008年04期）
蔡良婉,王年,蒋尉,徐勤学,李进[7]（1984）在《adr亚型乙肝病毒基因组全克隆以及其表面抗原基因的次级克隆》一文中研究指出本文报道 HBN-DNA 的提取纯化与克隆株的建立。此HBV-DNA 来自我国北方肝炎高发区带毒者血清,属 adr亚型,命名为 pHBV-NC1重组质粒;酶切、杂交与电镜观察均证明它含有 HBV-DNA 全基因组;在定出重组方向后,又从此重组质粒改建了除去部分 HBcAg 的HBsAg 亚克隆株,命名为pHBV-NCsAg。(本文来源于《中国医学科学院学报》期刊1984年04期）
全克隆论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的 :观察从卵巢癌SKOV3细胞中筛选获得的全克隆(holoclone)细胞的特性及其形成血管生成拟态(vasculogenic mimicry,VM)的能力。方法 :通过有限稀释法对SKOV3细胞进行单细胞培养,形成3种单细胞克隆[全克隆、部分克隆(meroclone)和亚克隆(paraclone)];通过裸鼠体内成瘤实验和软琼脂克隆形成实验比较3种单克隆的生物学特性,并通过叁维细胞培养模型观察其形成VM的能力。蛋白质印迹法检测全克隆细胞中CD133、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinases-2,MMP-2)及MMP-9的表达水平。结果 :SKOV3细胞单细胞培养10~14 d后,全克隆、部分克隆和亚克隆细胞所占的比例分别为(17.4±0.8)%、(30.1±0.4)%和(52.5±1.1)%。裸鼠体内成瘤率结果显示,全克隆细胞的成瘤率为80%,部分克隆和亚克隆细胞在裸鼠中均未有肿瘤形成。软琼脂克隆形成实验结果提示,全克隆细胞的克隆形成率为(16.7±3.8)%,显着高于部分克隆及亚克隆细胞的(6.5±1.5)%和(1.2±0.7)%(F=4.085,P<0.05)。叁维培养中,全克隆组可以形成VM,部分克隆和亚克隆细胞不能形成VM。全克隆细胞中CD133、MMP-2和MMP-9蛋白的表达水平均高于亲本SKOV3细胞(P值均<0.05),并高于部分克隆和亚克隆细胞(P值均<0.05)。结论 :SKOV3细胞中单细胞克隆在形态和生物学特性上存在异质性,其中全克隆细胞亚群具有肿瘤干细胞样细胞特性,具有形成VM的能力。全克隆是SKOV3细胞中具有较高复发能力的细胞亚群。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
全克隆论文参考文献
[1].杨帅.基于耐药和单细胞全克隆构建肝癌干细胞体外富集模式的实验研究[D].广西医科大学.2016
[2].杨立芬,吴小华,梁军,孙亚楠,陈琳.卵巢癌SKOV3细胞中筛选获得的全克隆细胞的生物学特性及其形成血管生成拟态的能力[J].肿瘤.2015
[3].曾文清,罗佐杰.全克隆在肿瘤干细胞研究中的应用和局限性[J].实用医学杂志.2013
[4].乔莹,王军,钟声平,刘洪涛,毛勇.日本囊对虾apo-14基因的全克隆及序列分析[J].热带生物学报.2013
[5].周志华,王卫兵,张建东.全克隆与肿瘤干细胞[J].国际病理科学与临床杂志.2011
[6].侯丽霞,何启伟,赵双宜,焦自高,王崇启.甜瓜蔗糖磷酸合成酶基因全克隆及工程载体的构建[J].果树学报.2008
[7].蔡良婉,王年,蒋尉,徐勤学,李进.adr亚型乙肝病毒基因组全克隆以及其表面抗原基因的次级克隆[J].中国医学科学院学报.1984
论文知识图
