导读:本文包含了绿色荧光蛋白基因论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:荧光,蛋白,干细胞,病毒,转染,载体,骨髓。
绿色荧光蛋白基因论文文献综述
张瑶瑶,吴国民,张潇毅,王琳,肖艳菊[1]（2019）在《慢病毒携带增强型绿色荧光蛋白基因标记大鼠脂肪干细胞及体内示踪研究》一文中研究指出目的探讨慢病毒携带增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)标记大鼠脂肪干细胞(ADSCs)最适感染复数,检测EGFP-ADSCs干细胞特性及体内活性。方法提取培养大鼠脂肪干细胞,流式细胞仪表型鉴定及成骨、成脂、成软骨多向诱导分化。采用携带增强型绿色荧光蛋白基因的慢病毒载体(Lentivirus-EGFP)以不同的感染复数MOI=0、1、5、10、25、50转染ADSCs,流式细胞仪测转染率,筛选合适MOI。CCK8测转染后ADSCs的增殖能力。EGFP-ADSCs成骨、成脂、成软骨诱导后分别行碱性磷酸酶、油红O及阿尔新蓝染色检测。将标记后的细胞注射到大鼠皮下,术后1,2,4w取材行冰冻切片荧光观察及免疫组织化学染色,观察EGFP-ADSCs在体内的表达情况。结果 CD90阳性表达,CD34阴性表达,脂肪干细胞向成骨、成脂、成软骨分化。MOI=0、1、5、10、25、50的转染率分别是0.12%、3.62%、42.4%、66.6%、90.4%、98.0%。CCK8法测转染组(MOI=25)与未转染组(MOI=0)细胞增殖能力无明显差别。EGFP-ADSCs经诱导后仍向成骨、成脂、成软骨分化。1w,2w,4w见细胞于移植部位。结论慢病毒介导的EGFP基因标记大鼠脂肪干细胞最适感染复数为25,且不影响干细胞活性及多向分化潜能,可以成为标记脂肪干细胞的理想方法。(本文来源于《现代口腔医学杂志》期刊2019年05期）
朱慧,朱文侠,黄广智,马小娜[2]（2019）在《携载增强型绿色荧光蛋白基因慢病毒标记小鼠脐带间充质干细胞示踪方法》一文中研究指出目的探讨慢病毒载体介导增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorecent protein,eGFP)转染小鼠脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells,UCMSCs)的最佳感染复数(multiplicity of infection,MOI)。方法通过组织贴壁法得到mUCMSCs;用生长增殖曲线、成骨、成软骨及成脂分化进行鉴定;以MOI为50、100、150、200携载eGFP的慢病毒载体介导转染mUCMSC,倒置显微镜下观察荧光表达,确定荧光表达率最高的MOI组。结果 eGFP慢病毒以MOI=150转染mUCMSC,效率较高,可直接用于体内示踪。结论用小鼠脐带可以分离出mUCMSCs,MOI=150时携载eGFP的慢病毒传染mUCMSCs效果最好。(本文来源于《延安大学学报(医学科学版)》期刊2019年03期）
王福科,张红,杨桂然,肖渝,何川[3]（2019）在《携载增强型绿色荧光蛋白基因慢病毒转染骨髓间充质干细胞示踪方法》一文中研究指出目的本实验研究旨在研究使用携带增强型绿色荧光蛋白(enhanced Green Fluorescent Protein,eGFP的慢病毒转染骨髓间充质干细胞(bone marrowmesenchymal stem cell,BMSCs)的方法,用于解决组织工程骨研究中种子细胞分化、增殖过程中的示踪问题。方法用携带eGFP的慢病毒转染第3代BMSCs,用流式细胞仪检测转染率,获得稳定表达eGFP的BMSCs,并通过描绘生长曲线来判定对BMSCs增殖性能的影响。结果当MOI值为70时,经eGFP慢病毒转染后的BMSCs能够得到活性较好、转染率高的eGFP-BMSCs;转染后各细胞生长曲线呈"S"形,MOI=70与MOI=0时细胞增殖最好,MOI=100会对BMSCs增殖造成影响。结论 MOI=70时携载eGFP基因慢病毒转染BMSC效果最好。(本文来源于《昆明医科大学学报》期刊2019年05期）
姚锦爱,张鸿,黄鹏,陈峰,余德亿[4]（2019）在《建兰茎腐病原菌尖孢镰刀菌F-02的绿色荧光蛋白基因标记》一文中研究指出【目的】开展建兰茎腐病原菌尖孢镰刀菌F-02的绿色荧光蛋白标记研究,直观观察尖孢镰刀菌在建兰植株上的侵染为害,明确病原菌的致病过程,为开展建兰茎腐病原菌的相关研究提供良好技术手段。【方法】采用农杆菌介导法对建兰茎腐病原菌尖孢镰刀菌F-02进行绿色荧光蛋白(GFP)转化,并检测转化子的遗传稳定性。【结果】GFP基因可被成功导入到尖孢镰刀菌F-02中并获得表达,转化子在蓝色光源激发下,菌丝和分生孢子均能稳定散发绿色荧光;转化子10次继代培养后菌落生长良好,菌丝和分生孢子仍可稳定散发出绿色荧光,对寄主植物的致病力也未发生改变,【结论】GFP基因可在建兰茎腐病原菌尖孢镰刀菌F-02中稳定存在,并对其致病力没有影响。(本文来源于《福建农业学报》期刊2019年01期）
何凌峰[5]（2018）在《《分子生物学实验》课程教学改革实践——以绿色荧光蛋白基因的分子克隆实验为例》一文中研究指出为提升分子生物学实验课程的教学效果,以绿色荧光蛋白基因克隆构建为主题的综合性实验为例,从课题方案设计与实施、课堂效果及其存在的问题展开分析,发现了延续性主题实验对开发大学生的学习潜力和创造性,培养科研思维和发现问题的能力,以及实践动手能力具有良好推动,同时课堂把启发式和讨论式等教学方法进行综合运用,为分子生物学实验的教学改革做出了新的探索。(本文来源于《教育现代化》期刊2018年47期）
武成聪,荣树,任静,吴铮,刘涛[6]（2018）在《腺病毒介导增强型绿色荧光蛋白基因转染兔骨髓间充质干细胞的效率及毒性》一文中研究指出背景:重组腺病毒对细胞生长、存活存在一定的毒性反应,其最适感染复数的确定相关研究较少。目的:研究重组腺病毒在不同感染复数下其转染效率、细胞毒性及对骨髓间充质干细胞成骨分化潜能的影响。方法:携带增强型绿色荧光蛋白基因的重组腺毒载体分别以感染复数为0,50,100,150,200,250转染第5代骨髓间充质干细胞。转染24 h后观察细胞形态,锥虫蓝染色计数死亡率;转染48 h后荧光倒置显微镜下计算转染率,q PCR检测EGFP及Runx2基因表达量。MTT法评价不同感染复数转染对细胞活性的影响,确定最佳感染复数。结果与结论:(1)随感染复数值增加,骨髓间充质干细胞贴壁能力减弱,部分细胞老化、死亡;(2)以感染复数值为0,50,100,150,200,250转染24 h,其细胞死亡率依次为5.80%,6.67%,7.95%,7.76%,10.35%,11.18%,死亡率与感染复数值成正相关;(3)当感染复数值为100时即可达到最大转染效率,但当感染复数增大至200时,细胞活性即受到影响;当感染复数达到250时,骨髓间充质干细胞成骨分化潜能受到影响;(4)通过上述结果可以认为,腺病毒转染兔骨髓间充质干细胞的感染复数安全范围为50-150,其最适感染复数为100。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2018年17期）
范友芬,潘艳艳,乐欣,晋国营,虞耀华[7]（2018）在《绿色荧光蛋白转基因大鼠脂肪间充质干细胞的培养及分化潜能鉴定》一文中研究指出目的建立大鼠脂肪间充质干细胞(ADSCs)体外分离培养的方法,并鉴定其分化潜能。方法取SPF级绿色荧光蛋白(GFP)转基因大鼠腹股沟脂肪,用胶原酶法消化获取原代细胞并进行传代培养。获得的P3代ADSCs,观察其细胞形态及荧光强度衰减情况;用流式细胞仪分析其表面特异性标志物,进行细胞表型鉴定;分别用成脂诱导培养基和成骨诱导培养基诱导其向脂肪细胞与成骨细胞分化,组织化学染色检测细胞分化的情况;将细胞悬液多点注射于大鼠烧伤创面及创周皮下,观察其定植情况。结果从成体GFP大鼠脂肪组织中成功分离培养出ADSCs,该细胞呈长梭形、漩涡样生长,传代后细胞生长增殖速度加快。ADSCs对CD29、CD90及CD105呈现高表达;对CD34及CD45呈低表达;茜素红和油红O染色显示ADSCs具有成骨成脂多向分化能力;在创面可见散点状绿色荧光。结论成功获得高纯度、稳定表达的GFP转基因大鼠的ADSCs,且生长增殖能力强,具有多向分化潜能。采用GFP转基因大鼠来源的ADSCs简单易行且示踪效果良好,可用于后续实验研究。(本文来源于《现代实用医学》期刊2018年02期）
何佳,邓峰美,林友胜,刘漪沦[8]（2018）在《网素蛋白1和增强绿色荧光蛋白基因共表达慢病毒载体构建和鉴定及在结直肠癌细胞SW480中表达》一文中研究指出目的构建和鉴定网素蛋白基因(PLS)1和增强绿色荧光蛋白(EGFP)共表达慢病毒载体,并检测其在人结直肠癌细胞株SW480中的表达水平。方法采用聚合酶链反应(PCR)方法克隆PLS1基因;将PLS1基因连接到带有EGFP的慢病毒表达载体p EZ-Lv201中构建慢病毒载体;将构建的慢病毒载体质粒p EZ-PLS1-SV40-e GFP-IRES-Puro(p EZ-PLS1)与慢病毒包装质粒混合物Lenti-Pac HIV mix共转染293T细胞,收集慢病毒悬液;重组病毒转染H1299细胞,定量PCR法检测重组病毒滴度;将构建的p EZ-PLS1感染SW480细胞,荧光显微镜观察和Western印迹检测感染后SW480细胞中EGFP和目的基因PLS1表达。结果基因测序分析证实克隆的PLS1基因与Gen Bank提供的序列完全一致;构建的重组慢病毒载体经双酶切、琼脂糖凝胶电泳鉴定证实PLS1正确插入p EZ-Lv201;定量PCR测定慢病毒滴度为0.1×10~9~1.0×10~9TU/ml。在SW480细胞中重组病毒感染96 h后在荧光显微镜下可检测到较强的绿色荧光蛋白表达,Western印迹检测到在SW480细胞中PLS1蛋白过表达。结论成功构建携带PLS1基因的重组慢病毒载体,在SW480细胞中有效表达。(本文来源于《中国老年学杂志》期刊2018年02期）
赵楠,李青,胡薇[9]（2017）在《慢病毒介导的绿色荧光蛋白基因在日本血吸虫体内的成功表达》一文中研究指出目的了解日本血吸虫(Schistosoma japonicum)体内能否表达外源绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP),并产生绿色荧光。方法构建p EGFP-Lac Z-C1融合蛋白表达质粒,以聚乙烯亚胺(polyethylenimine,PEI)为转染试剂,分别转染哺乳动物293T细胞和感染小鼠后14 d的日本血吸虫童虫,未转染阴性对照组不做任何处理;转染后48 h,在荧光显微镜下观察被转染的293T细胞和日本血吸虫童虫是否有GFP绿色荧光产生;对被转染的293T细胞和日本血吸虫童虫进行β-半乳糖苷酶原位染色,在光学显微镜下观察是否有蓝色产物产生。同时,将日本血吸虫童虫放入培养293T细胞的12孔板中,分别在光学显微镜和荧光显微镜下观察。用未稀释的、滴度为3×10~8菌落形成单位(CFU)/ml的慢病毒体外感染日本血吸虫童虫和293T细胞96 h后,在荧光显微镜下观察是否有GFP绿色荧光产生。结果p EGFP-Lac Z-C1转染293T细胞后,可以观察到GFP绿色荧光,β-半乳糖苷酶原位染色后也可以观察到蓝色的斑点,而在对照组和日本血吸虫童虫中,均未观察到GFP荧光和蓝色斑点。日本血吸虫童虫和293T细胞GFP荧光的比较发现,293T细胞发出的GFP荧光亮度明显高于日本血吸虫童虫的自发荧光,且293T细胞GFP荧光为艳绿色,而日本血吸虫童虫的自发荧光为黄绿色。在慢病毒感染实验中,未稀释的慢病毒感染96 h后,在荧光显微镜下可以清晰地看到血吸虫肠道外围组织中有许多艳绿色的荧光亮点,日本血吸虫童虫GFP的颜色及亮度与293T细胞中的基本一致,且荧光亮点的移动与虫体的肌肉运动基本保持一致。结论日本血吸虫童虫的背景荧光在外源GFP表达充足的情况下并不会影响荧光的观察。未稀释的慢病毒感染日本血吸虫童虫96 h后可提高转染效率,增加GFP表达量,在体内观察到GFP的绿色荧光。(本文来源于《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》期刊2017年03期）
杨阳[10]（2017）在《绿色荧光蛋白基因转化早花柠檬创制新种质》一文中研究指出柑橘是世界上重要的水果之一。但柑橘存在童期长的问题,严重影响了传统育种方法的效率。近年来不断发展的转基因技术为柑橘研究提供了更快速的方法,而采用短童期材料可加速研究进程。本实验以短童期材料-早花柠檬的试管实生苗上胚轴为外植体,采用根癌农杆菌介导法进行绿色荧光蛋白基因转化,最终得到了8株转基因再生植株。同时对影响早花柠檬转化效率的因素进行了探讨。主要结果如下:1.转绿色荧光蛋白基因早花柠檬植株再生。共进行了7批材料的转化,总计2215个茎段,平均再生芽率60.6%,最高达75%。经体式荧光显微镜检测,表明再生芽平均阳性率1.8%,最高达2.8%。最终8个阳性芽生根并移栽至温室;再生植株茎段和叶片荧光明显,经PCR检测为阳性,表明再生植株均为阳性植株。2.影响转化效率的因素研究。分别设置3个乙酰丁香酮和农杆菌浓度,发现乙酰丁香酮浓度变化对转化率影响不大;转化率随着农杆菌浓度增加而降低,农杆菌浓度OD600在0.6最适宜。转化过程中发现,该基因型暗培一周的上胚轴切口可形成愈伤组织;一般一个切口再生一个不定芽,极少再生多个不定芽,只有极少的两端均再生不定芽;该上胚轴共培后易黄化,切口处再生愈伤能力较弱,部分上胚轴易褐化、不易再生不定芽,即使使用生长状态良好的实生苗依然出现上述情况。(本文来源于《华中农业大学》期刊2017-06-01）
绿色荧光蛋白基因论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的探讨慢病毒载体介导增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorecent protein,eGFP)转染小鼠脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells,UCMSCs)的最佳感染复数(multiplicity of infection,MOI)。方法通过组织贴壁法得到mUCMSCs;用生长增殖曲线、成骨、成软骨及成脂分化进行鉴定;以MOI为50、100、150、200携载eGFP的慢病毒载体介导转染mUCMSC,倒置显微镜下观察荧光表达,确定荧光表达率最高的MOI组。结果 eGFP慢病毒以MOI=150转染mUCMSC,效率较高,可直接用于体内示踪。结论用小鼠脐带可以分离出mUCMSCs,MOI=150时携载eGFP的慢病毒传染mUCMSCs效果最好。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
绿色荧光蛋白基因论文参考文献
[1].张瑶瑶,吴国民,张潇毅,王琳,肖艳菊.慢病毒携带增强型绿色荧光蛋白基因标记大鼠脂肪干细胞及体内示踪研究[J].现代口腔医学杂志.2019
[2].朱慧,朱文侠,黄广智,马小娜.携载增强型绿色荧光蛋白基因慢病毒标记小鼠脐带间充质干细胞示踪方法[J].延安大学学报(医学科学版).2019
[3].王福科,张红,杨桂然,肖渝,何川.携载增强型绿色荧光蛋白基因慢病毒转染骨髓间充质干细胞示踪方法[J].昆明医科大学学报.2019
[4].姚锦爱,张鸿,黄鹏,陈峰,余德亿.建兰茎腐病原菌尖孢镰刀菌F-02的绿色荧光蛋白基因标记[J].福建农业学报.2019
[5].何凌峰.《分子生物学实验》课程教学改革实践——以绿色荧光蛋白基因的分子克隆实验为例[J].教育现代化.2018
[6].武成聪,荣树,任静,吴铮,刘涛.腺病毒介导增强型绿色荧光蛋白基因转染兔骨髓间充质干细胞的效率及毒性[J].中国组织工程研究.2018
[7].范友芬,潘艳艳,乐欣,晋国营,虞耀华.绿色荧光蛋白转基因大鼠脂肪间充质干细胞的培养及分化潜能鉴定[J].现代实用医学.2018
[8].何佳,邓峰美,林友胜,刘漪沦.网素蛋白1和增强绿色荧光蛋白基因共表达慢病毒载体构建和鉴定及在结直肠癌细胞SW480中表达[J].中国老年学杂志.2018
[9].赵楠,李青,胡薇.慢病毒介导的绿色荧光蛋白基因在日本血吸虫体内的成功表达[J].中国寄生虫学与寄生虫病杂志.2017
[10].杨阳.绿色荧光蛋白基因转化早花柠檬创制新种质[D].华中农业大学.2017
论文知识图
