转化子表型分析论文_李恒,畅文军,陈汉清,乔帆,曾会才

导读:本文包含了转化子表型分析论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:表型,质体,致病性,镰刀,病菌,基因,玉米。

转化子表型分析论文文献综述

李恒,畅文军,陈汉清,乔帆,曾会才^[1]（2019）在《香蕉枯萎镰刀菌4号生理小种mon1基因敲除转化子的表型分析及致病力测定》一文中研究指出根据笔者实验室前期蛋白质组学研究成果,发现尖孢镰刀菌古巴专化型4号生理小种(Foc4)中的mon1基因影响了尖孢镰刀菌的致病性,为了研究mon1基因在Foc4侵染香蕉过程中的具体作用,利用同源重组方法敲除了Foc4的mon1基因,并对获得的敲除突变体开展表型分析和致病性测定。结果表明,与Foc4野生型菌株相比,敲除突变体生长缓慢、菌丝变细,分支减少及产孢量降低,菌株抵抗外源氧胁迫、细胞壁穿透能力、纤维素利用能力减弱,对巴西蕉苗的致病力明显减弱。由此推测mon1基因在Foc4的生长发育、产孢及致病力等方面具有一定的作用。(本文来源于《热带生物学报》期刊2019年02期）

刘丽华^[2]（2007）在《限制性内切酶介导（REMI）玉米大斑病菌的遗传转化及其转化子表型分析》一文中研究指出玉米大斑病菌(Exserohilum turcicum)是一种世界性分布的重要丝状病原真菌，由其引起的玉米大斑病是一种重要的叶部病害，流行年份造成严重的经济损失。了解病菌的致病分子机理对其病害的有效防治具有重要意义。众所周知，鉴定病菌致病相关基因是了解病菌致病机理的关键，许多致病相关基因是通过DNA插入产生致病缺陷突变而分离得到的。限制酶介导整合转化(restriction enzyme-mediated integration，REMI)正被越来越多地应用于丝状真菌致病相关基因的标记与克隆。本研究通过在优化转化体系中的主要参数的基础上，建立了玉米大斑病菌的REMI转化体系。结果表明，玉米大斑病菌菌体的培养时间、细胞壁降解酶的种类、酶解时间、酶解温度以及再生培养基等一系列因素对原生质体释放及再生有明显的影响。根据研究结果规范出一套标准化的玉米大斑病菌原生质体制备方法：即(1)从PDA固体培养基上培养15d的菌落上洗下病菌的分生孢子：(2)将孢子按浓度10~5个/mL接种到改良Fries液体培养基中，25℃下振荡培养20h，过滤洗涤收集菌丝；(3)用12.5mg/mL溶壁酶、12.5mg/mL崩溃酶和12.5mg/mL蜗牛酶组成的混合酶在30℃，100rpm的条件下酶解4～5h；(4)将酶解好的原生质体的酶解溶液用3层擦镜纸的过滤：(5)用已灭菌的0.7M NaCl溶液冲洗，将冲洗液在3000rpm，4℃条件下离心10min，去上清，再用STC洗涤2次后得到所需浓度的原生质体。一般100mL菌丝培养液可以得到浓度为1.44×10~6个/mL的原生质体。利用限制酶介导DNA插入突变(REMI)转化玉米大斑病菌野生菌株01-23(WT)，共获得了215个玉米大斑病菌转化子。将这些转化菌株于PDA上培养5代(无性繁殖)，发现所有转化子各子代均能在含50μg/mL潮霉素的PDA培养基上生长，而野生菌株01-23不能生长，说明转化子在遗传上是稳定的。对这些突变体的基因组进行了PCR扩增，发现所有参试基因组中都能扩增到潮霉素磷酸转移酶基因(hph)序列，表明突变体的基因组中确实已经携带hph基因序列。经对所得的215个转化子进行生长速度和产孢量测定，发现3个转化子的产孢量低于野生菌株01-23，其中转化子M25已丧失产孢能力，对转化子M25进行致病性分析，发现其致病性减弱。此外，有3个转化子的产孢量较野生菌株升高。对所有转化子在PDA上生长速度的测定，结果发现5个转化子的生长速度和野生菌株相比有不同程度的减慢。(本文来源于《河北农业大学》期刊2007-06-09）

转化子表型分析论文开题报告

（1）论文研究背景及目的

此处内容要求：

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例：

玉米大斑病菌(Exserohilum turcicum)是一种世界性分布的重要丝状病原真菌，由其引起的玉米大斑病是一种重要的叶部病害，流行年份造成严重的经济损失。了解病菌的致病分子机理对其病害的有效防治具有重要意义。众所周知，鉴定病菌致病相关基因是了解病菌致病机理的关键，许多致病相关基因是通过DNA插入产生致病缺陷突变而分离得到的。限制酶介导整合转化(restriction enzyme-mediated integration，REMI)正被越来越多地应用于丝状真菌致病相关基因的标记与克隆。本研究通过在优化转化体系中的主要参数的基础上，建立了玉米大斑病菌的REMI转化体系。结果表明，玉米大斑病菌菌体的培养时间、细胞壁降解酶的种类、酶解时间、酶解温度以及再生培养基等一系列因素对原生质体释放及再生有明显的影响。根据研究结果规范出一套标准化的玉米大斑病菌原生质体制备方法：即(1)从PDA固体培养基上培养15d的菌落上洗下病菌的分生孢子：(2)将孢子按浓度10~5个/mL接种到改良Fries液体培养基中，25℃下振荡培养20h，过滤洗涤收集菌丝；(3)用12.5mg/mL溶壁酶、12.5mg/mL崩溃酶和12.5mg/mL蜗牛酶组成的混合酶在30℃，100rpm的条件下酶解4～5h；(4)将酶解好的原生质体的酶解溶液用3层擦镜纸的过滤：(5)用已灭菌的0.7M NaCl溶液冲洗，将冲洗液在3000rpm，4℃条件下离心10min，去上清，再用STC洗涤2次后得到所需浓度的原生质体。一般100mL菌丝培养液可以得到浓度为1.44×10~6个/mL的原生质体。利用限制酶介导DNA插入突变(REMI)转化玉米大斑病菌野生菌株01-23(WT)，共获得了215个玉米大斑病菌转化子。将这些转化菌株于PDA上培养5代(无性繁殖)，发现所有转化子各子代均能在含50μg/mL潮霉素的PDA培养基上生长，而野生菌株01-23不能生长，说明转化子在遗传上是稳定的。对这些突变体的基因组进行了PCR扩增，发现所有参试基因组中都能扩增到潮霉素磷酸转移酶基因(hph)序列，表明突变体的基因组中确实已经携带hph基因序列。经对所得的215个转化子进行生长速度和产孢量测定，发现3个转化子的产孢量低于野生菌株01-23，其中转化子M25已丧失产孢能力，对转化子M25进行致病性分析，发现其致病性减弱。此外，有3个转化子的产孢量较野生菌株升高。对所有转化子在PDA上生长速度的测定，结果发现5个转化子的生长速度和野生菌株相比有不同程度的减慢。

（2）本文研究方法

调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。