抗单纯疱疹病毒包膜糖蛋白中和抗体的筛选鉴定及其中和效果评估

论文摘要

单纯疱疹病毒（Herpes simplex virus,HSV）又称为人疱疹病毒（Human herpesvirus,HHV）,属于疱疹病毒科α病毒亚科,是一种在全球范围内广泛流行的病毒。HSV有两个血清型:Ⅰ型单纯疱疹病毒（HSV-1）和Ⅱ型单纯疱疹病毒（HSV-2）。人类为HSV的主要宿主,根据WHO的相关数据,2012年,HSV-1的全球感染人数超过37亿（0-49岁）,HSV-2 的感染人数超过了 4.17亿（15-49岁）。HSV在上皮细胞建立感染后,可以侵袭患者不同的组织和器官,造成不同程度的损伤。HSV-1可以引起患者产生口唇疱疹,还能导致结膜炎、角膜炎等眼部疾病,是结膜炎致盲的首要病因。此外,HSV-1还具有神经嗜性,可以感染患者脑部造成脑炎等。HSV-2是复发性生殖器疱疹的主要病因,其可以潜伏在患者的三叉神经节或骶神经根神经节,造成机体的反复感染。HIV患者、接受器官移植或放化疗的病人,由于免疫系统较为脆弱,如果在患病期间或手术治疗期间感染HSV-2或遭受疾病复发,可以引发肺炎、脑炎等系统性疾病。HSV-2还能通过母婴传播等途径感染新生儿,导致新生儿疱疹,如果不及时干预治疗,患儿死亡率高达80%。近年来,流行病学研究发现,HSV-2的感染还可以显著提高HIV的感染风险。HSV的入胞以及释放等过程,均需要表达于其包膜上的多种糖蛋白与细胞表面多种受体的相互作用。在这些包膜糖蛋白中,gB、gC首先与宿主细胞的丝状伪足通过电荷产生相互作用,为病毒沿着细胞表明运动并与细胞表明受体结合奠定基础。当gD与相关受体结合后,产生相应的构象变化,导致gL从gH/gL复合物中解离和gH的活化。活化的gH进一步激活gB,最终导致病毒与细胞的半融合状态,介导病毒衣壳的入胞。HSV在全球范围内的广泛流行,造成了较为严重的社会和经济问题。目前的抗病毒治疗远不能满足患者的需求,因此亟需开发相关的疫苗以及新型的治疗性药物。单克隆抗体是研究靶蛋白功能和结构、病毒与宿主相互作用的重要工具,单克隆抗体还可以开发成极富前景的治疗性药物。鉴于HSV包膜糖蛋白在病毒复制、感染中扮演的重要角色,针对HSV包膜糖蛋白制备相应的单克隆抗体,具有良好的理论基础和开发前景。本研究旨在筛选到对HSV-1和HSV-2具有交叉中和活性的单克隆抗体,并在体内外评估其中和效果。在此基础上,对其中和作用机制和识别的特异性表位进行初步探索。为此,开展了以下工作:本研究首先通过HSV-1/2混合免疫的方式,筛选到了 14株抗HSV包膜糖蛋白的单克隆抗体。在随后的实验中我们证实,其中两株能识别天然形式gD的单克隆抗体4A3和8H2对HSV-1和HSV-2具有高水平的交叉中和活性的。在体外实验中,中和抗体4A3和8H2可以阻断HSV-1和HSV-2胞间扩散,还可以通过干扰HSV-2与宿主细胞的吸附过程发挥中和作用。在体内实验中,中和抗体4A3对感染致死剂量HSV-2的小鼠具有良好的保护效果。最后,本研究还对这两株单克隆抗体的中和作用机制以及抗体识别的表位进行了初步的探索。综上所述,本研究证明了识别天然构象gD的单克隆中和抗体4A3和8H2在体外对HSV-1和HSV-2具有高水平的交叉中和活性。同时还证明了,中和抗体4A3对HSV-2致死剂量攻毒的BALB/C小鼠具有良好的保护效果。本研究筛选到的这两株中和抗体或具有潜在临床转化的价值,也为开发HSV1/2交叉广谱疫苗设计和抗原表位的分析提供一定的指导。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• Abbreviations
• 第一章 前言
•   1、单纯疱疹病毒
•     1.1 单纯疱疹病毒的流行病学特征
•     1.2 单纯疱疹病毒的结构组成
•   2、单纯疱疹病毒主要的包膜糖蛋白及其功能
•     2.1 介导单纯疱疹病毒入胞的主要糖蛋白
•     2.2 单纯疱疹病毒与细胞的吸附作用
•     2.3 单纯疱疹病毒与细胞表面受体的结合
•     2.4 单纯疱疹病毒相关信号转导
•     2.5 单纯疱疹病毒的入胞模型
•   3、单纯疱疹病毒的裂解感染与潜伏感染
•     3.1 单纯疱疹病毒的裂解感染
•     3.2 单纯疱疹病毒的潜伏感染
•   4、抗单纯疱疹病毒的治疗方式
•   5、本研究的设计思路、目的和意义
• 第二章 材料与方法
•   1、材料
•     1.1 主要设备
•     1.2 主要试剂与耗材
•     1.3 菌株、质粒、细胞株、病毒株
•     1.4 分子及细胞生物学常规试剂
•     1.5 常用液体及培养基配制
•   2、方法
•     2.1 分子生物学常规实验方法
•     2.2 蛋白质常规实验方法
•     2.3 细胞生物学常规实验方法
•     2.4 单纯疱疹病毒培养及滴度测定
•     2.5 单克隆抗体的筛选和制备
•     2.6 动物实验一般方法
•     2.7 数据处理方法及统计分析
• 第三章 结果与分析
•   1、抗HSV包膜糖蛋白单克隆抗体的制备
•     1.1 HSV-1/HSV-2的培养、纯化与滴度测定
•     1.2. 抗HSV包膜糖蛋白单克隆抗体的筛选
•     1.3 第一部分小结
•   2、抗HSV包膜糖蛋白中和抗体的筛选与鉴定
•     2.1 抗HSV包膜糖蛋白中和抗体的筛选
•     2.2 抗HSV包膜糖蛋白中和抗体的鉴定
•     2.3 第二部分小结
•   3、抗HSV包膜糖蛋白单克隆抗体体内外治疗效果评估
•     3.1 抗HSV包膜糖蛋白中和抗体体外保护效果评估
•     3.2 抗HSV包膜糖蛋白中和抗体对HSV胞间扩散的阻断评估
•     3.3 抗HSV包膜糖蛋白中和抗体体内保护效果评估
•     3.4 第三部分小结
•   4、抗HSV包膜糖蛋白单克隆抗体中和作用机制初步探索
•     4.1 抗HSV包膜糖蛋白中和抗体对HSV与细胞吸附的影响
•     4.2 抗HSV包膜糖蛋白中和抗体识别表位初步探索
•     4.3 第四部分小结
• 第四章 讨论
•   1、单纯疱疹病毒的潜伏感染与疾病复发
•   2、单纯疱疹病毒与溶瘤病毒
• 小结与展望
• 参考文献
• 致谢
• 附录

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 邹依地

导师: 黄承浩

关键词: 包膜糖蛋白,中和抗体,抗体治疗

来源: 厦门大学

年度: 2019

分类: 基础科学,医药卫生科技

专业: 生物学,基础医学

单位: 厦门大学

分类号: R392

总页数: 105

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