一株产香酵母的筛选、鉴定及其产香条件的优化研究

论文摘要

产酯酵母又称为生香酵母,是一类能够合成具有芳香性气味有机物的酵母,特别是产生乙酸乙酯,在调味品、功能饮料、酿造等领域应用广泛。本研究旨在筛选、鉴定一株产酯能力强的产香酵母,并优化产酯条件。本研究以感官评价为指标对9株酵母进行初筛,以产总酯量为评价指标对初筛得到的酵母进行复筛,获得产香能力最强的酵母菌株;通过形态学特征、生理生化特征、遗传特性鉴定筛选所得的酵母;通过单因素实验结合响应面优化设计优化产酯条件,主要结果如下。1、通过感官评价、产酯总量的两级筛选,获得一株产香能力较强的酵母（编号:Y-213）,采用皂化滴定法测得Y-213酵母初始产总酯量为1.25g/L。通过形态学和镜检观察,Y-213酵母菌落大而厚,隆起,边缘整齐,外观较稠、不透明,呈乳白色,Y-213酵母细胞呈卵圆形或圆形,多边出芽。2、通过糖发酵实验、产类淀粉化合物实验、脲酶实验、硝酸盐还原实验鉴定Y-213酵母,该酵母可以发酵葡萄糖产酸产气,不能产类淀粉化合物,不能产脲酶用于分解尿素,不能还原硝酸盐。碳源同化实验结果显示,Y-213酵母不能利用乳糖发酵,可以发酵葡萄糖、果糖、麦芽糖、蔗糖,其中最佳碳源为蔗糖。氮源同化实验结果显示,Y-213酵母不能利用硝酸盐、铵盐,可以利用牛肉膏、蛋白胨、酵母膏,其中最佳氮源为酵母膏。耐受性实验结果显示,Y-213酵母最适初始生长pH为6,最适生长温度为34℃,Y-213酵母对乙醇、乙酸、NaCl的最大耐受浓度分别为9%、0.4%、10%。采用分子生物学方法对Y-213酵母26S rDNA测序,对照Y-213酵母系统发育树,确认Y-213酵母为异常威克汉姆酵母。3、通过单因素实验,考察了碳源浓度、氮源浓度、乙醇添加量、乙酸添加量、温度、时间等六大因素对Y-213酵母产酯能力的影响。结果显示最佳蔗糖浓度为3%,最佳酵母膏浓度为5%,最佳乙醇添加量为2%,最佳乙酸添加量为0.2%,最佳培养时间为96h,最佳培养温度为32.5℃。4、应用响应面设计,选择氮源浓度、乙酸添加量、温度、时间四因素优化Y-213酵母产酯条件,结果显示最佳培养温度为32.1℃,最佳培养时间为158h,最佳培养乙酸添加量为0.23%,最佳培养酵母膏添加量为4.30%。优化后Y-213酵母产总酯可达2.32g/L,为优化前总酯浓度的1.86倍。GC-MS检测Y-213酵母发酵产物显示乙酸乙酯为主要挥发性物质,占比54.60%。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 绪论
•   1.1 产香酵母研究现状
•     1.1.1 酒曲中的产香酵母概述
•     1.1.2 优良产香酵母的筛选
•     1.1.3 酵母菌株的鉴定方法研究
•     1.1.4 产香酵母产香条件优化的研究进展
•   1.2 乙酸乙酯的概述
•     1.2.1 乙酸乙酯在白酒中的作用
•     1.2.2 乙酸乙酯作为食品香精的作用
•     1.2.3 乙酸乙酯的生产方法
•   1.3 研究目的及意义
•   1.4 主要研究内容
• 第二章 产香酵母菌的筛选
•   2.1 实验材料
•     2.1.1 主要试剂及材料
•     2.1.2 主要仪器设备
•     2.1.3 试剂与培养基的配制
•   2.2 实验方法
•     2.2.1 菌种的活化
•     2.2.2 产香酵母的初步筛选
•     2.2.3 产香酵母的复筛
•     2.2.4 统计学方法
•   2.3 结果与讨论
•     2.3.1 产香酵母的初筛
•     2.3.2 产香酵母的复筛
• 第三章 对Y-213 酵母的生理生化特性及分子生物学鉴定研究
•   3.1 实验材料
•     3.1.1 主要试剂及材料
•     3.1.2 主要仪器设备
•     3.1.3 试剂与培养基配制
•   3.2 实验方法
•     3.2.1 Y-213 酵母的形态学鉴定
•     3.2.2 Y-213 酵母的基础生理生化特性
•     3.2.3 Y-213 酵母的生长曲线测定
•     3.2.4 Y-213 酵母的基础营养利用能力测定
•     3.2.5 Y-213 酵母的耐受能力测定
•     3.2.6 Y-213 酵母的分子生物学鉴定
•     3.2.7 Y-213 酵母发酵产物的测定
•     3.2.8 统计学方法
•   3.3 结果与讨论
•     3.3.1 Y-213 酵母的形态学特征
•     3.3.2 Y-213 酵母的生理生化特性
•     3.2.3 Y-213 酵母的生长曲线
•     3.3.4 Y-213 酵母营养利用能力的测定
•     3.3.5 Y-213 酵母耐受能力的测定
•     3.3.6 Y-213 酵母的分子生物学鉴定
•     3.3.7 Y-213 酵母发酵产物的测定
• 第四章 Y-213 酵母产酯条件的优化
•   4.1 实验材料
•     4.1.1 主要试剂及材料
•     4.1.2 主要仪器设备
•     4.1.3 试剂与培养基配制
•   4.2 实验方法
•     4.2.1 单一因素对Y-213 酵母产总酯能力的影响
•     4.2.2 响应面设计探究四种因素对Y-213 酵母产总酯量的影响
•     4.2.3 优化后Y-213 酵母发酵产物的进一步验证
•     4.2.4 统计学方法
•   4.3 结果与讨论
•     4.3.1 单一因素对Y-213 酵母产总酯能力的影响
•     4.3.2 响应面设计探究四种因素对Y-213 酵母产总酯量的影响。
•     4.3.3 优化后Y-213 酵母发酵产物的进一步验证
• 第五章 结论与展望
•   5.1 结论
•   5.2 研究特色
•   5.3 展望
• 参考文献
• 附录 A
• 致谢

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 李晨

导师: 伍金娥

关键词: 产香酵母,总酯,乙酸乙酯,酵母生长量

来源: 武汉轻工大学

年度: 2019

分类: 基础科学,工程科技Ⅰ辑

专业: 生物学,轻工业手工业

单位: 武汉轻工大学

分类号: TS201.3

DOI: 10.27776/d.cnki.gwhgy.2019.000154

总页数: 62

文件大小: 2275K

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