利用CRISPR/Cas9技术对燕麦乙酰辅酶A羧化酶(ACCase)基因的编辑

论文摘要

乙酰辅酶A羧化酶(ACCase)基因是禾本科植物中抗拿捕净除草剂的关键基因,其CT区的一个异亮氨酸突变成亮氨酸后,禾本科植物对拿捕净的抗性会发生改变,本研究的目的是通过构建ACCase的CRISPR/Cas9表达载体,编辑燕麦的ACCase基因,将关键位点由异亮氨酸突变为亮氨酸,使燕麦对拿捕净具有抗性。通过载体构建、基因枪法转化以及转化效率的计算的结果表明,CRISPR/Cas9基因编辑技术在转基因植株中能成功敲除ACCase基因,但没有完成靶向敲除。实验为后续燕麦基因组编辑提供理论依据。

论文目录

• 1 结果与分析
•   1.1 燕麦总RNA检测
•   1.2 燕麦ACCase基因的克隆及序列分析
•     1.2.1 燕麦ACCase基因CT区的获得
•     1.2.2 燕麦ACCase基因的CT区分析
•   1.3 利用CRISPR/Cas9技术对ACCase基因的载体构建
•     1.3.1 序列查找与靶位点的选择
•     1.3.2 CRISPR/Cas9载体构建
•     1.3.3 修复模板的合成
•   1.4 转基因植株阳性鉴定
• 2 讨论
• 3 材料与方法
•   3.1 试验材料
•   3.2 燕麦乙酰辅酶A羧化酶（ACCase）基因CT区的克隆
•   3.3 利用CRISPR/Cas9技术对ACCase基因的编辑
•     3.3.1 sg RNA的设计及合成
•     3.3.2 修复模板的合成
•   3.4 基因枪介导燕麦ACCase基因的Cas9载体转入燕麦
•     3.4.1 轰击参数
•   3.5 燕麦转基因植株的阳性鉴定
• 作者贡献

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 于东洋,王凤梧,融晓萍,武志娟,王鑫,杨燕,韩冰,田青松

关键词: 乙酰辅酶羧化酶,燕麦,除草剂,基因编辑

来源: 分子植物育种 2019年19期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,农作物

单位: 内蒙古农业大学生命科学学院植物生物技术功能实验室,内蒙古自治区乌兰察布市农牧业科学研究院,内蒙古农业技术推广站,中国农业科学院草原研究所

基金: 内蒙古自然科学基金,乌兰察布市农牧业科学研究院燕麦栽培与品种繁育院士专家工作站经费资助

分类号: Q943.2;S512.6

DOI: 10.13271/j.mpb.017.006356

页码: 6356-6362

总页数: 7

文件大小: 2336K

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