导读:本文包含了二甲基化论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献,主要关键词:Aβ多肽,H3K4二甲基化,脑源性神经营养因子,海马神经元
二甲基化论文文献综述
刘琪,徐志伟,王立群,朱宗红[1](2018)在《Aβ通过Ash1l上调H3K4二甲基化水平抑制BDNF表达并介导海马神经元损伤》一文中研究指出目的在Aβ处理海马神经元后,观测H3K4甲基化水平的变化,以及BDNF表达和神经元死亡的改变。方法在Aβ处理后,用蛋白免疫印迹以及染色质免疫共沉淀方法检测神经元中总H3K4甲基化水平和BDNF启动子H3K4甲基化水平。在si RNA敲减Ash1l后,通过荧光定量PCR和酶联免疫吸附的方法检测BDNF表达。同时,使用MTT实验检测敲减Ash1l后Aβ诱导海马神经元损伤的改变。结果在Aβ处理海马神经元后,BDNF启动子和总H3K4甲基化水平均显着上升,而敲减Ash1l可以阻止这一现象。另外,在敲减Ash1l后,Aβ诱导的BDNF表达下调被抑制,同时海马神经元损伤也得到缓解。结论 Ash1l蛋白被发现可以在Aβ多肽下游调节BDNF启动子区的H3K4Me2水平,通过抑制BDNF的表达促进神经元的死亡。(本文来源于《医学研究杂志》期刊2018年08期)
刘健慧,张晓丹,周愿,单亦初,方菲[2](2018)在《基于准等重二甲基化标记的高通量蛋白质组选择性交叉标记装置》一文中研究指出面对生物学及精准医学等领域多变量、大样本量的蛋白质组定量分析的需求,高通量的定量标记及分析已经成为近年来蛋白质组学方法发展的趋势。发展了一种基于准等重二甲基化标记策略的高通量肽段末端选择性交叉标记装置(pIDL-StageTip),借助简单的装置及离心力,有效地增加了定量标记的通量,并保证了肽段末端两步标记反应时间的可控性及操作的简便性。通过优化酸性条件下NaBD_3CN与NaBH_3CN体系的标记条件,得到了标准蛋白质酶解产物100%的标记效率、95%以上的标记选择性;在人源蛋白质组复杂体系下,标记效率大于99%,标记选择性为100%。基于该装置的定量方法具有很高的定量准确度及精密度。该装置为实现高可操作性、高准确度、高通量的蛋白质组定量标记提供了一个可靠的解决方案。(本文来源于《色谱》期刊2018年03期)
周愿,刘健慧,张丽华,张玉奎[3](2016)在《准等重二甲基化标记蛋白质组定量方法》一文中研究指出高精准、宽动态范围和高通量的蛋白质组定量分析对于发现功能蛋白质、疾病生物标志物以及药物靶标等具有重要意义。针对现有蛋白质组相对定量方法存在的不足,我们发展了了基于质量亏损的准等重二甲基化标记(pIDL)定量方法。该方法利用~(12)C/~(13)C和~2H/~1H质量亏损值的不同,实现肽段的轻重标记;利用高分辨质谱,实现相差5.84 mDa碎片离子对的分辨,进而实现蛋白质组的相对定量分析。基于氨基与甲醛在酸性/碱性条件下反应选择性的不同,还发展了多重pIDL定量方法。可以实现6个样品的同时分析,定量覆率大于98%,定量结果与理论值相对偏差低于5%,RSD<10%,动态范围为4个数量级。优于目前已有蛋白质组定量方法。上述结果表面,我们建立的pIDL方法有望在生命科学、精准医疗、食品安全等领域发挥重要作用。(本文来源于《中国化学会第30届学术年会摘要集-第四十叁分会:质谱分析》期刊2016-07-01)
时小艳,刘庆新[4](2015)在《小鼠卵母细胞和胚胎发育过程中组蛋白H4K20二甲基化的表达》一文中研究指出运用单细胞免疫荧光技术,分析了小鼠卵母细胞和胚胎发育过程中组蛋白H4K20二甲基化的表达情况。结果表明:H4K20二甲基化在生长期的卵母细胞中呈逐渐增加的趋势;15 d时的小鼠卵母细胞没有H4K20二甲基化的表达,但在第20天和第25天重新被检测到信号;卵母细胞在生发泡期(GV)、生发泡破裂期(GVBD)和减数分裂中期(MⅡ)均没有H4K20二甲基化的表达;二细胞胚胎和四细胞胚胎中有H4K20二甲基化的表达,其他时期的胚胎中检测不到荧光信号。(本文来源于《上海农业学报》期刊2015年06期)
刘健慧,周愿,单亦初,张丽华,张玉奎[5](2015)在《基于等重二甲基化标记的多重蛋白质组定量方法》一文中研究指出稳定同位素标记结合质谱分析已经成为蛋白质组定量分析的主流方法。定量的依据可以分为基于一级谱峰面积和二级谱离子强度两类。前者虽可以实现多重样品的分析,但存在灵敏度低且一级谱图复杂度增加不利于蛋白质的定性等不足;基于二级谱离子强度的定量方法中基于报告离子的方法优势在于,不增加一级谱复杂度的情况下,实现多重样品的同时分析,但是该方法定量准确度差的问题仍是制约其发展的瓶颈问题。因而亟需发展实现多重样品准确定量的新方法,以满足蛋白质组高通量分析和时空变化分析的需求。近期,本课题组发展了基于准等重二甲基化标记的蛋白质组定量方法,实现了动态范围高达四个数量级的准确定量[1]。基于此,我们利用二甲基化标记在酸性/碱性条件下反应选择性不同的特点,结合准等重二甲基化标记[2],实现了六重样品的标记定量分析。蛋白质经Lys-C酶解后,通过甲醛、氰基硼氢化钠及其同位素的有机组合,先后进行酸性和碱性条件下的肽段二甲基化标记,以实现其N端和C端赖氨酸的交叉标记,从而实现六重标记。标记后,六重样品在一级谱具有相同的质荷比,而二级谱每种碎片离子都存在质荷比差异,利用二级谱碎片离子进行六重定量。该方法肽段标记效率和标记选择性均在95%以上。当六重样品以1:1:1:1:1:1的比例混合时,得到的定量结果为1:1.02:1.05:1.04:1.04:1.01,两针以上重复的定量结果的RSD值均低于11%,体现出较好的定量准确度和精密度。进一步增加样品混合的比值,当比值为1:5:10:20时,定量结果为1:5.08:10.24:19.95,RSD值均低于15%,体现了该方法在宽动态范围定量结果的准确性。综上,我们发展了一种基于等重二甲基化标记的六重蛋白质组定量方法,该方法具有定量准确度高,精密度好和动态范围宽的优势,有望用于蛋白质在细胞内动态变化的准确分析。(本文来源于《中国化学会第二届全国质谱分析学术报告会会议摘要集》期刊2015-10-16)
刘哲益,王方军,邹汉法[6](2015)在《高效二甲基化同位素标记用于整体蛋白质定量分析》一文中研究指出以整体蛋白质为目标分析物的自上而下蛋白质组学(Top-Down Proteomics)在近年来受到越来越多的关注1,2。然而,与之相应的整体蛋白质同位素标记定量方法还鲜有报道。还原二甲基化是一种针对伯胺基团的高效化学标记方法,已经广泛应用于以酶解多肽为目标分析物的自下而上蛋白质组学(Bottom-Up Proteomics)定量分析中。基于其标记效率高,定量结果可靠,操作便捷,成本低廉等特点,本文首次将该方法用于整体蛋白质的同位素标记定量3-5。对于整体蛋白质的二甲基化标记,主要考虑以下几个关键因素:1、常用的还原剂氰基硼氢化钠在标记过程中会产生CN-,影响蛋白质的标记效率;2、甲醛作为一种常见的蛋白质交联剂,在标记过程中会发生较多副反应。针对以上问题,本工作采用吡啶硼烷代替氰基硼氢化钠,同时考察了不同还原剂浓度,甲醛浓度以及反应p H和反应中甲醇含量等条件,优化了标记效率和反应回收率,最终实现了标准蛋白近100%的标记效率和回收率。进一步将该方法用于He La提取蛋白质样品二甲基化标记,标记效率依然可以保持在95%以上。我们将该方法应用于整体蛋白的同位素标记定量,虽然蛋白质离子在质谱中呈现复杂同位素分布和电荷分布,但仍然可以得到准确的定量结果。(本文来源于《中国化学会第二届全国质谱分析学术报告会会议摘要集》期刊2015-10-16)
潘晓燕,王喜艳,王雪楠,孙占轩,王丹[7](2014)在《温肾生精饮对生精细胞凋亡和组蛋白H3K9二甲基化的影响》一文中研究指出目的研究温肾生精饮对环磷酰胺致小鼠睾丸生精细胞凋亡和组蛋白H3K9二甲基化(H3K9me2)的影响。方法将8周龄的60只昆明种雄性小鼠随机分为对照组、模型组、西药组和中药组,每组15只。对照组腹腔注射0.9%Na Cl溶液,模型组、西药组和中药组连续5天腹腔注射环磷酰胺(80μg·g-1·d-1的)然后将对照组和模型组小鼠灌胃0.9%Na Cl溶液,西药组、中药组小鼠分别灌胃克罗米芬、温肾生精饮。各组均干预30天,检测小鼠的体质量、睾丸重和附性腺重;观察睾丸生精上皮的发育且进行Johnsen评分;TUNEL法检测睾丸生精细胞的凋亡;免疫荧光法检测睾丸生精小管中H3K9me2蛋白的表达。结果与模型组和西药组比较,中药组显着提高了生精障碍小鼠的体质量、附性腺指数和小鼠睾丸组织的Johnsen评分(P<0.05),促进了生精上皮的发育,显着减少了小鼠睾丸组织中凋亡的生精小管数和生精小管内凋亡的阳性细胞数(P<0.05),上调了精子细胞中H3K9me2的表达水平。结论温肾生精饮能显着修复环磷酰胺致小鼠睾丸生精功能损伤,其修复机制可能与减少睾丸生精细胞凋亡,稳定精子细胞中H3K9me2的表达水平有关。(本文来源于《上海中医药杂志》期刊2014年11期)
张一军,刘军,魏丽晓,茹坤,张曼[8](2014)在《BIX-01294对山羊胎儿成纤维细胞生长状态和组蛋白H3K9二甲基化的影响》一文中研究指出为探讨BIX-01294对供核细胞的影响,使用不同浓度的BIX-01294处理山羊胎儿成纤维细胞(Goat embryonic fibroblasts,GEFs),并检测其细胞活力、细胞周期、细胞凋亡、H3K9me2水平和多能性基因的mRNA水平。细胞活力检测结果显示,BIX-01294浓度在1.0μmol/L以下不会影响细胞活力,2.0μmol/L时24h和48h处理组的细胞活力显着下降(P<0.05),≥4.0μmol/L时所有处理组的细胞活力均极显着下降(P<0.01)。细胞周期和凋亡检测结果显示,H3K9me2下调会引起细胞周期的停滞和正常细胞的减少,其中BIX-01294在大于2.0μmol/L时G0/G1期细胞的比例极显着升高(P<0.01),4.0μmol/L时凋亡细胞极显着增加(P<0.01)。处理后的细胞H3K9me2水平均极显着下降(P<0.01),但大于1.0μmol/L的处理浓度能获得较好的下调效果。处理后细胞Oct4、Sox2和Nanog的mRNA水平均有不同程度的增加,其中Oct4和Nanog的mRNA水平增加极显着(P<0.01)。说明:采用1.0μmol/L BIX-01294处理山羊胎儿成纤维细胞,可以下调H3K9me2水平,增加G1/G0期细胞比例,上调细胞多能性基因表达量,而且不影响细胞活力。(本文来源于《西北农业学报》期刊2014年10期)
陶佳[9](2014)在《DOT1L抑制剂对猪着床前克隆胚体外发育及H3K79二甲基化重编程的影响》一文中研究指出猪的体细胞核移植(克隆)技术在种质资源保护、良种繁育,人类器官移植异种供体和疾病模型制备、辅助生殖技术质控、药物蛋白生产,以及生殖与发育基础研究等方面的成功应用,显示出其在畜牧业、医学和生物学等方面具有广阔的应用前景。然而,由供体细胞核表观遗传重编程不彻底等因素所导致的猪体细胞克隆效率低下,极大地限制了该技术的进一步推广。表观遗传学事件主要包括DNA甲基化和组蛋白修饰,其中后者又包括组蛋白的甲基化、乙酰化、糖基化、磷酸化、泛素化和SUMO化等。研究显示,利用恰当的DNA甲基化/去甲基化表观遗传修饰剂处理供核细胞或者克隆胚胎,可显着改善重编程并提高克隆效率。借助H3K79甲基转移酶DOT1L特异性抑制剂EPZ004777 (EPZ)干预,可促进小鼠诱导多能干细胞的获取效率及质量提高,表明H3K79二甲基化(H3K79me2)可能参与调控细胞多能性。那么,H3K79me2是否参与了着床前克隆胚发育调控目前未见报道。因此,本研究以猪为研究对象,首先试图揭示猪H3K79me2在猪克隆胚早期发育期间的动态变化,再结合EPZ处理,探讨表观修饰剂干预H3K79me2重编程对猪克隆胚发育的影响,为今后最终阐明H3K79me2参与细胞发育命运调控的分子机制提供依据。具体试验和结果如下:试验一旨在揭示猪胚胎着床前发育期间H3K79me2的重编程规律。以相应发育时期的猪体外受精胚胎(in vitro fertilization, IVF)为对照,利用H3K79me2抗体的间接免疫荧光技术,检测了不同发育阶段的猪体细胞克隆(SCNT)胚胎中H3K79me2的信号变化。结果发现,在猪IVF和SCNT胚胎中,H3K79me2信号均在起点到原核胚期间从较高水平显着降低至消失,至桑椹胚信号重新出现,囊胚期进一步增强。所不同的是,在IVF胚胎中EXPB到HB阶段H3K79me2表达水平趋于平缓,而在SCNT胚胎中从EXPB到HB阶段H3K79me2表达水平依然持续上升。另外,从原核期(16hpaNTE和18hpi IVFE)至8-cell阶段,H3K79me2在两种胚胎中的信号均降至最低点,而在起始阶段和桑椹胚之后IVFE中的H3K79me2信号水平均高于NTE。结果表明,猪体细胞克隆胚着床前发育期间H3K79me2重编程异常。试验二目的是探讨EPZ对猪SCNT胚胎着床前体外发育的影响,将SCNT胚随机置于分别添加0.5nM、5nM、50nMEPZ的PZM-3和1‰ DMSO(v/v)的PZM-3(对照组)自化学激活起处理24h,根据各组胚胎的卵裂率、囊胚率及囊胚总细胞数来评价其效果。结果发现:各组卵裂率无差异;0.5nM组囊胚率显着高于对照组(28.97±2.65% vs.17.13±2.69%);就囊胚总细胞数而言,各组均无明显变化,但50nM组有降低的趋势。随后,选取含0.5nM EPZ的PZM-3,自化学激活起,分别孵育猪克隆胚胎12h、24h、36h(对照组处理0h)。结果显示,各组卵裂率无显着差异,而12h和24h处理组的囊胚率均显着提高(28.56±3.51%,28.34±3.00% vs.16.32±1.93%,17.93±0.64%)。在囊胚总细胞数上,除36h处理组显着降低外,其余叁组之间无差异。以上结果说明,0.5nM EPZ处理12-24h可改善猪克隆胚胎的早期发育,而处理浓度过高或时间过长都可能损害胚胎发育。试验叁旨在探明EPZ是否是通过调节H3K79me2重编程,进而有助于猪SCNT胚胎原核期H3K79me2重编程。以IVF胚胎和未经EPZ处理的各期SCNT胚胎为对照,在0.5nM EPZ处理后,检测了1-细胞发育不同时期的SCNT胚胎其H3K79me2变化,以及处理4h后重构胚DOT1L基因的表达变化。结果发现,IVF胚胎中,H3K79me2水平在受精后4h内迅速降低,6hpi进一步降低,至10hpi信号消失;对照组H3K79me2的水平从电刺激活至4hpa阶段缓慢降低,到8hpa信号消失;而经EPZ处理组胚胎H3K79me2水平则从2hpa开始降低,4hpa继续下降,至8hpa信号消失。DOT1L基因在0.5nM EPZ处理组中表达量较对照组有所降低,但不显着。结果表明,0.5nM EPZ处理部分抑制了DOT1L基因的表达,进而下调H3K79me2水平,改善了SCNT胚胎的H3K79重编程,从而有助于克隆胚的着床前发育。试验四的目的是进一步明晰EPZ促进猪SCNT胚胎体外发育的可能分子机制。检测了0.5nM EPZ处理12h和24h后发育而来的猪SCNT囊胚不同时期(根据其形态分为EB、EXPB以及HB)H3K79me2水平,与IVF囊胚、非EPZ处理的SCNT囊胚相应阶段H3K79me2比较。结果发现,经EPZ处理后,SCNT囊胚中H3K79me2水平变化趋势大体上与非EPZ处理的SCNT囊胚一致,虽然比非EZP组有所增加,但还达不到IVF囊胚的H3K79me2水平。之后检测了EPZ处理12h、24h来源SCNT囊胚及对照组SCNT囊胚中相关基因(自我更新基因OCT4、SOX2、LIN28以及分化基因CDX2、GATA4)的表达。结果显示,在源于EPZ处理的SCNT囊胚中,OCT4、 CDX2和GATA4表达量均显着上调;SOX2在12h处理组中显着高于对照组,24h组与对照组相比无明显差异,Lin28则相反。两处理组来源的囊胚,其CDX2和GATA4无差异;SOX2和LIN28在处理12h组中显着高于24h组,OCT4则相反。综上所述,本文首次对猪SCNT和IVF胚胎着床前发育期间H3K79me2重编程规律进行了研究,揭示了H3K79me2在猪早期胚胎的全基因组表达模式。发现0.5nnMEPZ处理12h或24h通过微调H3K79me2表达模式,显着促进猪SCNT胚胎着床前发育;结果表明,H3K79me2可能参与调控猪SCNT胚胎早期胚胎发育命运。研究结果进一步丰富了猪克隆胚生产培养方案,为加快该技术的应用推广奠定了一定的基础。当然,EPZ干预对猪克隆胚体内发育的影响有待进一步研究。(本文来源于《安徽农业大学》期刊2014-06-01)
周愿,单亦初,张丽华,张玉奎[10](2014)在《基于质量亏损的准等重二甲基化标记蛋白质组定量方法》一文中研究指出蛋白质参与生命活动的全部过程,并且体现生命活动过程的变化。研究蛋白质的表达量的变化对于发现具有重要生物功能的蛋白质、筛选与疾病相关的生物标志物以及寻找药物的靶标具有重要意义[1]。因此,蛋白质组样品的高准确度、精密度和宽动态范围的定量分析已经成为当前蛋白质科学发展亟需解决的关键问题之一[2]。现有的蛋白质组定量方法主要基于LC-MS/MS技术,利用MS~1水平峰面积和MS/MS水平报告离子强度实现蛋白质组的定量分析。前者增加MS~1复杂度且容易受到噪音离子干扰,后者则容易受到共洗脱组分的干扰导致定量结果偏离理论值[3-4]。针对以上方法存在的不足,我们建立了基于质量亏损的准等重二甲基化标记方法(pseudo-isobaric dimethyl labeling,pIDL)[5]。分别用~(13)CD_2O和NaCNBH_3,CD_2O和NaCNBD_3对Lys-C酶解产物的进行轻、重标记;两者的分子量在MS~1水平接近等重,利用碎片离子存在5.84 mDa差异实现蛋白质定量。采用该方法,蛋白质组的定量覆盖率高达99%以上;定量结果与理论值相对偏差低于2%;动态范围达到4个数量级。此外,我们将pIDL方法拓展到胰蛋白酶酶解产物分析(Tryptic-pIDL)。采用该方法,蛋白质组的定量覆盖率高达98%以上;复杂样品中40倍以内差异的蛋白质可以准确定量。综上,以上方法相比于现有方法具有更高的准确度、精密度和更宽的动态范围。(本文来源于《中国化学会首届全国质谱分析学术研讨会会议论文集》期刊2014-04-26)
二甲基化论文开题报告
(1)论文研究背景及目的
此处内容要求:
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景,再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题,并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例:
面对生物学及精准医学等领域多变量、大样本量的蛋白质组定量分析的需求,高通量的定量标记及分析已经成为近年来蛋白质组学方法发展的趋势。发展了一种基于准等重二甲基化标记策略的高通量肽段末端选择性交叉标记装置(pIDL-StageTip),借助简单的装置及离心力,有效地增加了定量标记的通量,并保证了肽段末端两步标记反应时间的可控性及操作的简便性。通过优化酸性条件下NaBD_3CN与NaBH_3CN体系的标记条件,得到了标准蛋白质酶解产物100%的标记效率、95%以上的标记选择性;在人源蛋白质组复杂体系下,标记效率大于99%,标记选择性为100%。基于该装置的定量方法具有很高的定量准确度及精密度。该装置为实现高可操作性、高准确度、高通量的蛋白质组定量标记提供了一个可靠的解决方案。
(2)本文研究方法
调查法:该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法:用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法:通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法:通过调查文献来获得资料,从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法:依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法:对研究对象进行“质”的方面的研究,这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法:通过具体的数字,使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法:运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法:这是社会科学用来分析社会现象的一种方法,从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法:通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
二甲基化论文参考文献
[1].刘琪,徐志伟,王立群,朱宗红.Aβ通过Ash1l上调H3K4二甲基化水平抑制BDNF表达并介导海马神经元损伤[J].医学研究杂志.2018
[2].刘健慧,张晓丹,周愿,单亦初,方菲.基于准等重二甲基化标记的高通量蛋白质组选择性交叉标记装置[J].色谱.2018
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[4].时小艳,刘庆新.小鼠卵母细胞和胚胎发育过程中组蛋白H4K20二甲基化的表达[J].上海农业学报.2015
[5].刘健慧,周愿,单亦初,张丽华,张玉奎.基于等重二甲基化标记的多重蛋白质组定量方法[C].中国化学会第二届全国质谱分析学术报告会会议摘要集.2015
[6].刘哲益,王方军,邹汉法.高效二甲基化同位素标记用于整体蛋白质定量分析[C].中国化学会第二届全国质谱分析学术报告会会议摘要集.2015
[7].潘晓燕,王喜艳,王雪楠,孙占轩,王丹.温肾生精饮对生精细胞凋亡和组蛋白H3K9二甲基化的影响[J].上海中医药杂志.2014
[8].张一军,刘军,魏丽晓,茹坤,张曼.BIX-01294对山羊胎儿成纤维细胞生长状态和组蛋白H3K9二甲基化的影响[J].西北农业学报.2014
[9].陶佳.DOT1L抑制剂对猪着床前克隆胚体外发育及H3K79二甲基化重编程的影响[D].安徽农业大学.2014
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