狂犬病病毒实时荧光RT-RPA等温检测方法的建立

论文摘要

为了建立一种灵敏、特异、快捷的实时荧光重组酶聚合酶扩增（RPA）检测狂犬病病毒的方法,依据狂犬病病毒不分节段单股负链中N基因相对保守的核苷酸序列,设计了4条引物及1条探针,筛选出一套可用于RPA引物与探针组合,建立了狂犬病病毒的荧光RT-RPA检测方法,测试了该方法灵敏度和特异性,并进行了临床验证。结果显示,本研究建立的RPA方法在39℃恒温反应仅需20 min,能够特异的检测狂犬病病毒,最低检测限为1.83×101Copies/μL,临床样品测试与标准方法结果一致。表明本研究建立的检测狂犬病病毒的荧光RT-RPA方法具有特异,灵敏,快速,简便的特点,适用于现场检测以及在基层实验室推广应用。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 病毒
•   1. 2 主要仪器和试剂
•   1.3 引物和探针的设计与合成
•   1.4 病毒RNA的提取及浓度测定
•   1.5 荧光RT-RPA反应体系及反应条件
•   1.6 引物及探针的筛选
•   1.7 灵敏性试验
•     1.7.1 标准质粒构建
•     1.7.2 灵敏度测试
•   1.8 特异性试验
•   1.9 临床应用
• 2 结果与分析
•   2.1 引物探针的确认
•   2.2 灵敏性试验
•   2.3 特异性试验
•   2.4 临床样品检测
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 谭理琦,郑晓聪,王翠萍,李汶松,秦智锋

关键词: 重组酶聚合酶扩增技术,狂犬病病毒,检测方法

来源: 中国兽医杂志 2019年05期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 深圳市福田区动物防疫监督所,深圳出入境检验检疫局,广东药科大学食品科学学院

基金: 国家科技部重点研发计划(2016YFD0501103),深圳市知识创新基础研究项目(JCYJ20150416111234542),深圳市狂犬病流行病学分析与早期预警专项(JCYJ20150416111234542)

分类号: S852.65

页码: 44-47+122

总页数: 5

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