李万清唐玲杨冰(宁远县疾病预防控制中心湖南宁远425600）
【摘要】目的对宁远县某酒店疑似细菌性食物中毒进行病原学检测分析，为食物中毒事件提供病原学诊断，了解本次食物中毒的原因，预防此类食物中毒的发生。方法采集患者大便5份，患者吃剩卤牛肉1份，共6份样品。参照GB/T47892010《食品卫生微生物学检验》[1]、WS/T91996变形杆菌食物中毒诊断标准检验及处理原则[2]、《病原生物学检验一细菌》[3]进行病原学检测。结果所采的6份样品均检出奇异变形杆菌且属于同一型别菌株。结论根据病原学检测结果和流行病学调查，综合临床症状，可以确认这是一起由奇异变形杆菌污染卤牛肉而导致的急性细菌性食物中毒。
【关键词】急性细菌性食物中毒病原学检测奇异变形杆菌
【中图分类号】R595【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2013）49-0010-02
2013年6月21日在宁远县某酒店午餐就餐者中，有人出现剧烈腹痛、腹泻、恶心、呕吐、发热等症状，发病人数达15例。疑似为细菌性食物中毒，经流行病学调查，实验室检查，综合临床症状，确认这是一起由奇异变形杆菌污染食物引起的急性食物中毒。现将病原学检测结果报告如下。
1流行病学调查及临床症状
2013年6月21日中午，宁远县某酒店进餐人员共35人。下午15时30分出现首例患者恶心、呕吐、腹痛、腹泻等消化道不适症状遂到县人民医院就诊，截止次日早上9时发病人数15例，所有患者均进食过卤牛肉，患者年龄最小为16岁，最大为40岁，其中男性10人，女性5人，患者主要临床症状是：潜伏期最短3h，最长18h，发病高峰在进餐后7-16h，发热（37.8℃-39℃）、恶心、呕吐、阵发性腹痛、腹泻、水样便、无脓血、无里急后重。病程短，经及时抗菌和对症治疗，全部患者于发病后48小时内治愈出院，且预后良好。
2病原学检验
2.1标本来源6月21日晚8时左右，我中心接到上报疫情后，赶赴到县人民医院和某酒店分别采集患者大便标本5份，患者吃剩可疑食物卤牛肉1份，共6份样品。采集患者急性期和恢复期（2周）血清各5份，健康人对照血清1份。
2.2材料
2.2.1试剂沙门志贺氏增菌液、7.5%NaCl肉汤、营养肉汤、3%NaCl碱性蛋白胨水、B-P琼脂、普通琼脂、SS琼脂、EMB琼脂、MYP琼脂、TCBS琼脂、WS琼脂、TSI琼脂、微量生化管和沙门氏菌属、志贺氏菌属、肠道致病性大肠埃希氏菌诊断血清。以上所有试剂均为杭州天和微生物试剂有限公司生产，均在有效期内使用。
2.3检测方法参照GB/T47892010《食品卫生微生物学检》、WS/T91996变形杆菌食物中毒诊断标准检验及处理原则、卫生部病原生物学检验教材编写组编写的《病原生物学检验一细菌》分册进行增菌分离、培养及鉴定。
2.4分离、培养及鉴定
2.4.1分离培养对6份检样分别做沙门氏菌、志贺氏菌、致病性大肠埃希氏菌、变形杆菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌、蜡样芽胞杆菌检验。在MYP、TCBS、B-P等平板上未见可疑菌落，分别排除蜡样芽胞杆菌、副溶血性弧菌、金黄色葡萄球菌。而6份检样在SS琼脂平板上可见圆形、扁薄、半透明菌落，有的菌落边缘呈扩散状；在EMB琼脂平板可见无色、圆形、半透明的菌落，有的呈片状蔓延生长菌落；在WS平板上菌落为圆形、半透明、中心黑色、呈优势生长，平板上呈蔓延生长。符合变形杆菌菌落特征。
2.4.2涂片染色镜检挑取可疑菌落涂片革兰氏染色，镜检结果为6份检样所分离的菌落均为革兰氏阴性杆菌，有明显多形性，无芽胞、无荚膜。符合变形杆菌形态和染色特征。
2.4.3血清凝集试验及生化反应分别挑取各平板上可疑菌落与沙门氏菌属、志贺氏菌属、肠道致病性大肠埃希氏菌诊断血清做玻片凝集试验，未见阳性反应，可排除以上三种菌。分别挑取符合变形杆菌菌落特征的菌落接种在TSI培养基中37℃培养24小时，产H2S，不分解乳糖。所分离的6株菌株呈相同生化型，其全面生化反应为：苯丙氨酸脱氨+、H2S+、尿素+、明胶+、鸟氨酸脱羧酶+、靛基质－、麦芽糖－、乳糖－、木糖+、水杨苷、七叶苷水解－。符合奇异变形杆菌的生化反应特性。
2.5变形杆菌菌数的测定将卤牛肉检样1:10的悬液用生理盐水作10倍系列稀释，各取10-2、10-3、10-4、10-5倍稀释液0.1ml接种于琼脂斜面底部的凝结水内，37℃培养24小时，观察生长情况。结果自下而上弥漫生长的最高稀释度为10-5，卤牛肉变形杆菌菌数最近似值>1×106CFU/g。
2.6拮抗试验将分离的6株菌株分别点种在普通营养琼脂平板上，37℃培养24小时后，菌落均完全融合在一起，无拮抗现象，表明6株菌株为同一型别菌株。
2.7血清抗体效价测定按照WS/T9-1996附录A6方法进行操作，结果5例患者恢复期滴度均高于急性期4倍以上，健康人血清抗体测定为阴性。
2.8检验结果根据以上实验室各项指标的检定结果，所分离的6株菌株可以判定为奇异变形杆菌。即在所采5份患者大便和1份吃剩可疑食物卤牛肉中均检出奇异变形杆菌且属于同一型别菌株。
3讨论
根据病原学检测结果和流行病学调查，综合临床症状，可确认这是一起由奇异变形杆菌污染卤牛肉而导致的急性细菌性食物中毒。该酒店6月21日午餐供应的卤牛肉是当天早上7时左右从农贸市场个体商贩采购的，当天气温35℃，在未冷藏的条件下放置了4个多小时，变形杆菌在其中大量繁殖，卤牛肉变形杆菌菌数最近似值>1×106CFU/g，表明污染严重；厨师用生熟不分的案板和刀具将牛肉切块，食用前未彻底加热，发病15人均进食过卤牛肉，这是本次食物中毒的主要原因。因此加强对酒店管理人员及厨师的卫生知识培训，提高他们的卫生意识。严格食品采购渠道，对直接入口熟卤肉和凉拌菜的加工制作要严格操作规程，无凉菜制作专间及相应设施，不能加工凉菜。
奇异变形杆菌引起食物中毒在国在内并不少见，但在我县尚属首起。该菌广泛存在于水、土壤、腐败的有机物以及人和动物的肠道中，为条件致病菌；在4℃-7℃也可繁殖，但在较高温度下存放短时间会大量繁殖，并且被其污染熟食品在感官上没有腐败迹象，这一点要引起足够的重视。奇异变形杆菌主要污染动物性食品,特别是肉类,被污染的食品，在夏秋季温度高，在食品中大量生长繁殖，食用前未彻底加热，食后即引起食物中毒。因此应加大对动物性食品中奇异变形杆菌的监测力度,保障消费者的食用安全。在细菌性食物中毒高发的夏秋季，卫生监督部门要加大监督力度，提高监督水平，推广量化分级管理，将熟食制品加工过程存在的卫生问题作为监督重点，并广泛做好宣传，提高群众的自我保护意识，防止食物中毒的发生。
参考文献
[1]GB/T47892010．食品卫生微生物学检[S]．
[2]WS/T91996.变形杆菌食物中毒诊断标准检验及处理原则[S].
[3]齐小秋．病原生物学检验—细菌[M]．卫生部病原微生物学检验教材编写组，2009.408—413．