FAdV-4 NP株F1蛋白原核表达及多克隆抗体的制备

论文摘要

根据FAdV-4 NP株F1蛋白编码框的主要抗原位点,设计一对特异性引物,经PCR扩增、测序,分析表达效率后,进行密码子优化;以合成的新序列作为模板,构建重组表达质粒pET-32a-F1,将质粒转化到BL21中,筛选诱导条件,Western blot鉴定表达产物;将待纯化蛋白依次经过不同浓度的咪唑洗脱,纯化重组蛋白;最后将纯化后的蛋白免疫新西兰黄兔,收集血清并用间接ELISA法测定抗体效价.结果表明,所设计的特异性引物扩增了一条约699 bp的片段.PCR验证和酶切鉴定表明,pET-32a-F1被成功构建,并能够高效表达.重组质粒pET-32a-F1诱导的最佳IPTG浓度为0.3 mmol·L-1,最佳诱导时间为5 h,最佳诱导温度为37℃;咪唑洗脱浓度为80 mmol·L-1时,能获得较单一的洗脱蛋白.此外,本试验制备的F1多克隆抗体的效价可达1∶1 024 000.

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 材料
•   1.2 F1基因的扩增
•   1.3 重组质粒pET-32a-F1的构建、鉴定
•   1.4 序列优化前后表达效率对比
•   1.5 F1重组蛋白诱导表达体系的优化及纯化
•   1.6 F1基因多克隆抗体的制备、Western blot鉴定及血清效价的检测
•     1.6.1 F1基因多克隆抗体的制备及Western blot鉴定
•     1.6.2 间接酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）法检测F1基因多克隆抗体血清效价
• 2 结果与分析
•   2.1 F1基因序列优化结果
•   2.2 F1基因的扩增及重组质粒的构建
•   2.3 密码子优化前后的诱导效率
•   2.4 诱导条件的优化结果
•   2.5 重组蛋白纯化结果
•   2.6 多克隆抗体的Western blot鉴定及血清效价测定
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 陈媛,屈贵蜀,彭尧舜,许丽惠,王全溪

关键词: 禽腺病毒血清型,基因,原核表达,密码子优化,多克隆抗体

来源: 福建农林大学学报(自然科学版) 2019年05期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 福建农林大学动物科学学院

基金: 福建省自然科学基金(2019J01060639),福建农林大学科技发展基金(CXZX201789)

分类号: S852.65;Q78

DOI: 10.13323/j.cnki.j.fafu(nat.sci.).2019.05.012

页码: 614-618

总页数: 5

文件大小: 1964K

下载量: 52