导读:本文包含了牛肝细胞原代培养论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:草鱼,肝细胞,原代培养,培养基
牛肝细胞原代培养论文文献综述
张洪玉,王海波,赵明军,吕永辉,胡鲲[1]（2017）在《草鱼肝细胞原代培养的培养基选择与优化》一文中研究指出为寻找适宜培养草鱼原代肝细胞的培养基,本研究运用倒置相差显微镜形态学观察和CCK-8细胞活力实验,比较研究了DMEM/F12、α-MEM、RPMI-1640、M199和L-15 5种培养基,1μmol/L胰岛素、2 mmol/L谷氨酰胺和10μmol/L氢化可的松3种添加剂以及热灭活血清对草鱼原代肝细胞形态和活力的影响。通过形态学和活力检测观察发现α-MEM、M199和L-15均可以较好地促进草鱼原代肝细胞贴壁以及维持较长活力,其中以L-15为最优;此外,胰岛素的添加有助于细胞活力的维持,而谷氨酰胺和氢化可的松的添加以及血清灭活与否对细胞贴壁和活力维持均无显着性差别。本研究可为草鱼原代肝细胞的培养基选择提供参考,同时为草鱼生理学、环境毒理学研究乃至药物筛选提供支持。(本文来源于《中国渔业质量与标准》期刊2017年06期）
何文刚[2]（2017）在《锌对原代培养肉鸡鸡胚热敏肝细胞的抗热应激效应及其分子机制研究》一文中研究指出本研究通过四个试验,观测了在不同温度下锌对原代培养肉鸡鸡胚肝细胞抗氧化性能及相关的分子指标的影响,从细胞水平探讨了锌对肉鸡抗热应激效应及分子机制。试验一旨在通过建立可靠的肉鸡鸡胚热敏肝细胞模型,并观测肝细胞的持续活力,为后续研究锌对原代培养肉鸡鸡胚肝细胞抗热应激效应及分子机制奠定基础。本试验用14胚龄鸡胚分离得到鸡胚肝细胞,并接种到六孔培养板培养。台盼蓝染色显示,细胞活率高达95%;糖原染色结果显示,分离得到了纯度理想的鸡胚肝细胞;肝细胞可在培养到72h后汇合成单层,模型构建成功后肝细胞的活力可稳定维持3天,满足开展后续试验的条件。试验二旨在确定原代培养肉鸡鸡胚肝细胞最佳的锌添加水平及锌作用的最佳时间,为后续研究锌对原代培养肉鸡热敏鸡胚肝细胞的抗热应激效应及其分子机制奠定理论基础。本试验采用5×3两因子完全随机试验设计,肝细胞培养设5个添加锌水平(0、50、100、200和400μM硫酸锌形态的锌)与3个锌作用时间(12、24和48 h),共15个处理组,将同一处理的2个重复孔细胞收集到一个灭菌离心管中作为一个重复样品,每组6个重复。结果表明:在作用时间为12 h时、锌水平为50μM时铜锌超氧化物歧化酶(CuZnSOD)活性显着高于其它各处理组(P<0.05);与对照组相比,加锌水平为50、100、200和400μM均显着上调了肝细胞金属硫蛋白(MT)mRNA的表达(P<0.0001),而四个添加水平之间并无显着差异(P>0.05)。根据以上结果,选择锌添加水平为50μM,作用时间为12h研究后续锌对肝细胞的抗热应激分子机制。试验叁旨在研究热应激状态下肝细胞热休克蛋白(HSP70、90)mRNA相对表达量及培养上清乳酸脱氢酶(LDH)活性随培养时间的变化,以确定原代培养肉鸡鸡胚肝细胞受到热应激影响的最佳时间,为后续研究锌对原代培养肉鸡热敏鸡胚肝细胞的抗热应激效应及其分子机制奠定基础。试验采用2×5两因子完全随机设计。试验设2个鸡胚肝细胞培养温度(40℃常温和44℃高温)与5个处理时间(1、2、4、6和8小时),共10个处理组。将同一处理的2个重复孔的细胞培养液和细胞收集到一个灭菌离心管中作为一个重复样品,每组6个重复。结果表明:培养时间分别为4、6、8 h时,与常温组相比,高温组显着提高肝细胞培养液LDH酶活(P<0.0001);在热应激(44℃)状态下,培养4 h以内,随着培养时间的增加肝细胞HSP70 mRNA相对表达量显着升高(P<0.034);在热应激状态下肝细胞HSP 90 mRNA相对表达量随培养时间的增加而显着升高(P<0.023),在培养6 h达到最高,后又显着降低(P<0.0008)。根据以上结果,选择热应激时间为4、6 h作为后续锌对肝细胞的抗热应激分子机制。试验四采用2×3×2叁因子完全随机设计。设2个鸡胚肝细胞培养温度(40℃和44℃)、3种锌源处理(不添加锌、50μM ZnSO4以及50μM中等鳌合强度Zn-Lys)与2个热应激处理时间(4 h与6 h),共12个处理组,每组6个重复。结果表明,在常温情况下,与未添加锌组相比,添加ZnSO4提高了肝细胞CuZnSOD酶活(P=0.0048)。在高温情况下,添加Zn-Lys组肝细胞CuZnSOD酶活显着高于未添加锌组及ZnSO4组(P=0.049);与常温相比,高温显着升高了肝细胞MDA含量(P=0.006)。与未加锌组相比,加锌均能显着提高肝细胞MT mRNA的表达量(P<0.035);与常温组相比,高温显着提高了肝细胞HSP70 mRNA的表达量(P<0.0001)。在高温情况下,与未加锌组相比,添加ZnSO4组显着降低了HSP70 mRNA表达量(P<0.05);在常温情况下,添加Zn-Lys组HSP90 mRNA的表达量显着低于未加锌和加ZnSO4组(P<0.005)。在高温情况下,处理4h时,ZnSO4组HSP90 mRNA的表达量显着低于未加锌组和Zn-Lys组(P<0.0003);与常温组相比,高温显着提高了肝细胞HSP70蛋白表达(P<0.0001)。在高温处理6h时,添加ZnSO4组及ZnLys组显着下调了肝细胞HSP70蛋白表达(P<0.0001)。综上所述,加锌可提高肉鸡鸡胚肝细胞抗氧化能力;热应激引起肉鸡鸡胚肝细胞氧化损伤;加锌缓解了热应激引起肉鸡鸡胚肝细胞氧化损伤。(本文来源于《甘肃农业大学》期刊2017-05-01）
罗慧英,曹茸茸,黄亚红[3]（2016）在《藏药蕨麻对原代培养小鼠肝细胞酒精损伤保护作用研究》一文中研究指出目的研究藏药蕨麻对原代培养酒精损伤肝细胞的保护作用。方法原代肝细胞经分离纯化培养后,MTT法评价藏药蕨麻对酒精损伤肝细胞存活率的影响;荧光染色法测定藏药蕨麻对酒精损伤肝细胞活性氧物质(ROS)含量、细胞内钙离子浓度的影响;流式细胞仪检测藏药蕨麻对酒精损伤肝细胞凋亡的影响;免疫印迹法检测藏药蕨麻对Bcl-2和Bax表达的影响。结果经酒精损伤后,肝细胞存活率降低;细胞内ROS含量和钙离子浓度增高;凋亡抑制基因Bcl-2减弱、促凋亡基因Bax表达增强。藏药蕨麻可明显提高细胞存活率;降低细胞内ROS含量和钙离子浓度;改善凋亡情况,增强Bcl-2表达,抑制Bax表达,且作用呈剂量依赖性。结论藏药蕨麻对原代培养小鼠肝细胞酒精损伤具有一定的保护作用。(本文来源于《中国现代应用药学》期刊2016年09期）
骆源,张春晓,王玲,张冬玲,霍振华[4]（2016）在《斜带石斑鱼肝细胞分离及原代培养方法的建立》一文中研究指出本研究以斜带石斑鱼肝细胞为实验对象,在不同培养条件下进行原代培养,旨在探讨稳定可靠的斜带石斑鱼肝细胞分离及原代培养方法。采用组织块分离法和胰蛋白酶(含EDTA)消化法分离肝细胞,并通过密度梯度离心法分离纯化肝细胞,细胞悬液于DMEM/F-12、M199和L-15培养液中培养;细胞活力及数量采用血球计数板计数,并通过MTT法测定细胞增殖率;同时,测定不同时间培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性、白蛋白(ALB)和尿素氮(BUN)的含量,以分析肝细胞生长状态。结果表明,组织块方法不适于斜带石斑鱼肝细胞的培养,未见细胞从组织块中迁出,而胰蛋白酶消化法获得良好稳定的培养效果,细胞产量达到1.6×108个/g肝重,活细胞数达到95%;L-15培养基细胞生长明显优于DMEM/F-12和M199培养基;启动原代培养的48~72 h阶段肝细胞生长代谢旺盛,培养上清液中LDH活性显着降低,ALB和BUN含量显着升高。结果显示,0.25%的胰蛋白酶常温消化法适合斜带石斑鱼肝细胞的分离,斜带石斑鱼肝细胞原代培养的最适培养基为L-15培养基,肝细胞在启动原代培养的48~72 h生长代谢旺盛。(本文来源于《水产学报》期刊2016年04期）
骆源[5]（2016）在《斜带石斑鱼肝细胞原代培养及皮质醇对其代谢的影响》一文中研究指出1.斜带石斑鱼肝细胞分离及原代培养方法的建立通过不同的分离方法和培养条件探索斜带石斑鱼肝细胞的原代培养,以建立稳定可靠的斜带石斑鱼肝细胞原代培养模型,同时观察长期培养过程中肝细胞的形态变化。采用组织块分离法和胰蛋白酶(含EDTA)消化法分离肝细胞,并通过密度梯度离心法分离纯化肝细胞,细胞悬液于DMEM/F-12、M199和L-15培养液中培养;细胞活力及数量采用血球计数板计数,并通过MTT法测定细胞增殖率;同时,测定不同时间培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性、白蛋白(ALB)和尿素氮(BUN)水平,分析原代培养肝细胞生长状态。结果表明,斜带石斑鱼肝细胞原代培养不适合采用组织块方法,而胰蛋白酶消化法则获得良好稳定的培养效果,细胞产量达到1.6×108 cells/g肝重,活细胞数达到95%;L-15培养基细胞生长明显优于DMEM/F-12和M199两种培养基;启动原代培养的48-72 h阶段肝细胞生长代谢旺盛,培养上清中LDH活性显着降低(P<0.05),ALB和BUN含量显着升高(P<0.05)。结果显示,0.25%的胰蛋白酶常温消化法适合斜带石斑鱼肝细胞的分离,斜带石斑鱼肝细胞原代培养的最适培养基为L-15培养基,肝细胞在启动原代培养的48-72h生长代谢旺盛。2.皮质醇对斜带石斑鱼原代培养肝细胞活性及功能的影响本研究利用肝细胞体外培养模型,旨在探讨皮质醇对斜带石斑鱼原代培养肝细胞活性及功能的影响。选取5个皮质醇浓度(0、1、10、100、1000 nmol/L)孵育斜带石斑鱼原代肝细胞24 h,采用MTT法检测肝细胞活性,并测定肝细胞培养上清液中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和乳酸脱氢酶(LDH)活性以及尿素氮(BUN)和白蛋白(ALB)水平的变化,分析细胞生长代谢状态。结果显示,高浓度皮质醇(100、1000 nmol/L)组作用24 h即可导致肝细胞ALT、AST、LDH释放量显着增加(P<0.05),BUN分泌量也显着升高(P<0.05);当皮质醇浓度为1000 nmol/L时,显着降低了肝细胞的活性(P<0.05)。结果表明:高浓度的皮质醇对体外培养肝细胞的功能及活性产生不利影响。3.皮质醇对原代培养肝细胞糖和脂肪代谢的影响以斜带石斑鱼原代培养肝细胞为模型,选取3个皮质醇浓度(0、100 nmol/L和1000nmol/L)和2个孵育时间(24 h和36 h),通过测定培养上清液中葡萄糖含量,肝细胞糖原、丙酮酸和甘油叁酯含量,肝细胞糖和脂肪代谢关键酶的活性和基因表达量,以及脂肪代谢相关的转录因子基因表达,探讨离体条件下皮质醇对斜带石斑鱼肝细胞糖和脂肪代谢的影响。研究结果表明,在孵育24 h和36 h时,皮质醇显着提高肝细胞葡萄糖的释放量,而显着降低肝细胞丙酮酸和甘油叁酯含量(P<0.05);皮质醇作用时间对肝细胞葡萄糖释放量、肝细胞丙酮酸和甘油叁酯含量均无显着性影响(P>0.05)。在肝细胞孵育24 h时,皮质醇对肝细胞糖原含量无显着影响(P>0.05),而孵育36 h时,肝细胞糖原含量则随着皮质醇水平的升高而显着降低(P<0.05)。随着皮质醇作用时间的延长,肝细胞糖原含量显着下降(P<0.05)。在孵育24 h和36 h时,皮质醇显着提高了磷酸烯醇式丙酮酸激酶(PEPCK)和葡萄糖-6-磷酸酶(G6Pase)的活性,显着降低了苹果酸脱氢酶(MDH)和异柠檬酸脱氢酶(ICD)的活性(P<0.05),但对糖原合成酶(GSase)活性则无显着影响(P>0.05);在孵育24 h时,皮质醇对丙酮酸激酶(PK)活性无显着影响(P>0.05),但在孵育36 h时,皮质醇则显着提高丙酮酸激酶(PK)活性(P>0.05)。随着孵育时间的延长,葡萄糖-6-磷酸酶(G6Pase)活性显着下降,丙酮酸激酶(PK)活性显着升高(P<0.05),而苹果酸脱氢酶(MDH)和异柠檬酸脱氢酶(ICD)活性均无显着影响(P>0.05)。在孵育24 h和36 h时,皮质醇显着上调了PEPCK和G6Pase基因表达量(P<0.05);孵育24 h时,皮质醇显着上调PK基因表达量(P<0.05),但孵育36 h时则对PK基因表达量无显着影响(P>0.05)。随着皮质醇孵育时间的延长,G6Pase和PK基因表达量显着升高(P<0.05)。皮质醇对MDH基因表达量无显着影响(P>0.05)。皮质醇显着下调了脂肪酸合成酶(FAS)和过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARα)基因表达量(P<0.05),孵育时间对FAS和PPARα基因表达量无显著影响(P>0.05)。皮质醇显着上调了脂蛋白脂肪酶(LPL)和激素敏感脂肪酶(HSL)基因表达量(P<0.05),然而孵育时间对HSL基因表达无显着影响(P>0.05),但LPL基因表达则随着孵育时间的延长而显着增加(P<0.05)。结果显示:皮质醇提高原代培养肝细胞的糖异生能力,抑制脂肪合成,促进脂肪分解。(本文来源于《集美大学》期刊2016-04-05）
杜希良,王亚洲,杨宇宸,赵志波,刘欢[6]（2016）在《非酯化脂肪酸对原代培养犊牛肝细胞胰岛素信号通路的影响》一文中研究指出旨在探讨非酯化脂肪酸(nonestesterified fatty acids,NEFAs)对体外原代培养犊牛肝细胞胰岛素信号通路的影响及SIRT1在其中的调控作用。选择培养48h的原代犊牛肝细胞,添加不同浓度的NEFAs(0、0.6、1.2、1.8mmol/L),继续培养12h,胰岛素处理组在收样前用100nmol/L胰岛素处理30min,每个浓度3个重复。另外选取已培养48h的细胞,用SIRT1抑制剂Nicotinamide(10mmol/L)处理12h,胰岛素处理组在收样前用100 mmol/L胰岛素处理30min。运用免疫印迹Western blot方法,检测NEFAs和Nicotinamide对肝细胞胰岛素信号通路关键蛋白IR和Akt的磷酸化水平及SIRT1蛋白表达水平的影响。结果显示,与对照组相比,1.2、1.8 mmol/L NEFAs组胰岛素刺激的IR磷酸化水平显着降低(P<0.01),而Akt的磷酸化程度在NEFAs浓度为0.6 mmol/L时即显着降低(P<0.01),同时,SIRT1的蛋白表达水平在NEFAs为1.2、1.8mmol/L显着降低(P<0.01);添加SIRT1抑制剂显着降低SIRT1的蛋白表达水平(P<0.01),同时胰岛素刺激的Akt磷酸化水平也显着降低(P<0.01)。结果表明,高浓度的NEFAs可以损伤体外原代培养肝细胞的胰岛素信号通路,SIRT1在NEFAs损伤的胰岛素信号通路中发挥重要作用。(本文来源于《中国兽医学报》期刊2016年03期）
秦家元,刘康,李清,段怡,赵云霞[7]（2016）在《昆明种乳鼠肝细胞原代培养方法的比较研究》一文中研究指出目的通过比较3种昆明鼠乳鼠肝细胞原代培养的方法,探索一种更有效、快捷的原代培养方法。方法取30只1~3日龄昆明种乳鼠,随机分为3组,分别采用组织块培养法、胰酶消化法、组织块联合胰酶消化法进行肝细胞原代培养,用倒置显微镜观察实验过程中肝细胞的形态及生长情况。结果 3种方法均能进行乳鼠肝细胞的原代培养,其中组织块联合胰酶消化法培养的肝细胞形态学和生物学特性优于其他两种方法培养的细胞。结论组织块联合胰酶消化法是3种方法中最快速和高效的一种方法,获得的乳鼠肝细胞形态及生物学特性好,为体外建立乳鼠肝细胞实验模型奠定了实验基础。(本文来源于《安徽医学》期刊2016年01期）
刘腾飞,田静,李会敏,余祖功[8]（2015）在《半原位灌流法分离成年鸡肝细胞及原代培养》一文中研究指出采用半原位灌流法,对40~50日龄的海蓝公鸡进行肝细胞分离,采用台盼蓝拒染法测定细胞总数并计算肝细胞实时存活率,肝细胞以5×105m L的密度接种于6孔细胞培养板,每孔3 m L。在CO2培养箱中培养,观察细胞形态,测定不同培养阶段细胞培养上清液中LDH活力。结果显示每只鸡肝脏分离获得的细胞产量为(4.1±0.2)×108个,肝细胞实时存活率为(95±1)%,培养48 h至144h,细胞上清液中LDH活力在低水平下保持稳定,细胞可维持良好的生长状态达7 d以上。显示该方法可用于分离培养成年鸡肝细胞,分离培养的鸡肝脏细胞可用于研究细胞代谢、基因表达和肝细胞毒性。(本文来源于《畜牧与兽医》期刊2015年06期）
田丽,尹玲,关莉莉,戴宁[9]（2015）在《红景天苷对原代培养脂肪变性大鼠肝细胞细胞色素P4502E1蛋白表达的抑制作用》一文中研究指出目的研究红景天苷对原代培养大鼠脂肪变性肝细胞细胞色素P4502E1(CYP2E1)蛋白表达的抑制作用。方法体外分离、原代培养SD大鼠肝细胞,选取培养48 h的大鼠肝细胞,加入0.25 mmol/L棕榈酸诱导肝细胞脂肪变性,同步加入150μg/ml的红景天苷继续培养24 h,检测培养肝细胞上清液ALT、AST、丙二醛(MDA)和肝细胞甘油叁酯(TG)含量的变化。采用油红O染色观察肝细胞脂滴沉积,采用蛋白质印迹法检测CYP2E1蛋白表达的变化。结果以0.25 mmol/L棕榈酸和150μg/ml红景天苷同步培养细胞24 h,红景天苷干预组细胞培养上清ALT[(11.3±1.0)U/L、AST(3.7±0.5)U/L、MDA(1.7±0.2)nmol/ml和TG(105.7±16.8)μg/mg protein]均显着低于棕榈酸模型组[ALT(13.5±1.2)U/L,P<0.05;AST(5.9±0.7)U/L,P<0.05;MDA(4.2±0.9)nmol/ml,P<0.01;TG(268.3±25.8)μg/mg protein,P<0.01];油红O染色显示红景天苷处理肝细胞脂滴明显减少,蛋白质印迹法显示红景天苷能有效抑制脂肪变性肝细胞CYP2E1蛋白表达的上调。结论红景天苷抑制细胞CYP2E1蛋白表达可能是其防治肝细胞脂肪变性的主要机制之一。(本文来源于《实用肝脏病杂志》期刊2015年03期）
王力,刘辉[10]（2014）在《一种SD大鼠肝细胞原代培养的改良方法》一文中研究指出目的建立一种改良的大鼠肝细胞原代培养方法。方法取6到7周龄SD大鼠(约200g),3%戊巴比妥钠麻醉,采用Seglen两步胶原酶灌流法分离肝细胞,Percoll密度梯度离心纯化肝细胞,种植在预先用gelatin处理的培养皿内。结果分离所得肝细胞成活率达95%以上。24 h后用相差显微镜观察细胞贴壁良好,细胞形态规则;48 h后细胞开始伸展。结论使用改良的方法获得的细胞成活率高,贴壁牵,适合常见的药理毒理实验。(本文来源于《齐齐哈尔医学院学报》期刊2014年01期）
牛肝细胞原代培养论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本研究通过四个试验,观测了在不同温度下锌对原代培养肉鸡鸡胚肝细胞抗氧化性能及相关的分子指标的影响,从细胞水平探讨了锌对肉鸡抗热应激效应及分子机制。试验一旨在通过建立可靠的肉鸡鸡胚热敏肝细胞模型,并观测肝细胞的持续活力,为后续研究锌对原代培养肉鸡鸡胚肝细胞抗热应激效应及分子机制奠定基础。本试验用14胚龄鸡胚分离得到鸡胚肝细胞,并接种到六孔培养板培养。台盼蓝染色显示,细胞活率高达95%;糖原染色结果显示,分离得到了纯度理想的鸡胚肝细胞;肝细胞可在培养到72h后汇合成单层,模型构建成功后肝细胞的活力可稳定维持3天,满足开展后续试验的条件。试验二旨在确定原代培养肉鸡鸡胚肝细胞最佳的锌添加水平及锌作用的最佳时间,为后续研究锌对原代培养肉鸡热敏鸡胚肝细胞的抗热应激效应及其分子机制奠定理论基础。本试验采用5×3两因子完全随机试验设计,肝细胞培养设5个添加锌水平(0、50、100、200和400μM硫酸锌形态的锌)与3个锌作用时间(12、24和48 h),共15个处理组,将同一处理的2个重复孔细胞收集到一个灭菌离心管中作为一个重复样品,每组6个重复。结果表明:在作用时间为12 h时、锌水平为50μM时铜锌超氧化物歧化酶(CuZnSOD)活性显着高于其它各处理组(P<0.05);与对照组相比,加锌水平为50、100、200和400μM均显着上调了肝细胞金属硫蛋白(MT)mRNA的表达(P<0.0001),而四个添加水平之间并无显着差异(P>0.05)。根据以上结果,选择锌添加水平为50μM,作用时间为12h研究后续锌对肝细胞的抗热应激分子机制。试验叁旨在研究热应激状态下肝细胞热休克蛋白(HSP70、90)mRNA相对表达量及培养上清乳酸脱氢酶(LDH)活性随培养时间的变化,以确定原代培养肉鸡鸡胚肝细胞受到热应激影响的最佳时间,为后续研究锌对原代培养肉鸡热敏鸡胚肝细胞的抗热应激效应及其分子机制奠定基础。试验采用2×5两因子完全随机设计。试验设2个鸡胚肝细胞培养温度(40℃常温和44℃高温)与5个处理时间(1、2、4、6和8小时),共10个处理组。将同一处理的2个重复孔的细胞培养液和细胞收集到一个灭菌离心管中作为一个重复样品,每组6个重复。结果表明:培养时间分别为4、6、8 h时,与常温组相比,高温组显着提高肝细胞培养液LDH酶活(P<0.0001);在热应激(44℃)状态下,培养4 h以内,随着培养时间的增加肝细胞HSP70 mRNA相对表达量显着升高(P<0.034);在热应激状态下肝细胞HSP 90 mRNA相对表达量随培养时间的增加而显着升高(P<0.023),在培养6 h达到最高,后又显着降低(P<0.0008)。根据以上结果,选择热应激时间为4、6 h作为后续锌对肝细胞的抗热应激分子机制。试验四采用2×3×2叁因子完全随机设计。设2个鸡胚肝细胞培养温度(40℃和44℃)、3种锌源处理(不添加锌、50μM ZnSO4以及50μM中等鳌合强度Zn-Lys)与2个热应激处理时间(4 h与6 h),共12个处理组,每组6个重复。结果表明,在常温情况下,与未添加锌组相比,添加ZnSO4提高了肝细胞CuZnSOD酶活(P=0.0048)。在高温情况下,添加Zn-Lys组肝细胞CuZnSOD酶活显着高于未添加锌组及ZnSO4组(P=0.049);与常温相比,高温显着升高了肝细胞MDA含量(P=0.006)。与未加锌组相比,加锌均能显着提高肝细胞MT mRNA的表达量(P<0.035);与常温组相比,高温显着提高了肝细胞HSP70 mRNA的表达量(P<0.0001)。在高温情况下,与未加锌组相比,添加ZnSO4组显着降低了HSP70 mRNA表达量(P<0.05);在常温情况下,添加Zn-Lys组HSP90 mRNA的表达量显着低于未加锌和加ZnSO4组(P<0.005)。在高温情况下,处理4h时,ZnSO4组HSP90 mRNA的表达量显着低于未加锌组和Zn-Lys组(P<0.0003);与常温组相比,高温显着提高了肝细胞HSP70蛋白表达(P<0.0001)。在高温处理6h时,添加ZnSO4组及ZnLys组显着下调了肝细胞HSP70蛋白表达(P<0.0001)。综上所述,加锌可提高肉鸡鸡胚肝细胞抗氧化能力;热应激引起肉鸡鸡胚肝细胞氧化损伤;加锌缓解了热应激引起肉鸡鸡胚肝细胞氧化损伤。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
牛肝细胞原代培养论文参考文献
[1].张洪玉,王海波,赵明军,吕永辉,胡鲲.草鱼肝细胞原代培养的培养基选择与优化[J].中国渔业质量与标准.2017
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[5].骆源.斜带石斑鱼肝细胞原代培养及皮质醇对其代谢的影响[D].集美大学.2016
[6].杜希良,王亚洲,杨宇宸,赵志波,刘欢.非酯化脂肪酸对原代培养犊牛肝细胞胰岛素信号通路的影响[J].中国兽医学报.2016
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[8].刘腾飞,田静,李会敏,余祖功.半原位灌流法分离成年鸡肝细胞及原代培养[J].畜牧与兽医.2015
[9].田丽,尹玲,关莉莉,戴宁.红景天苷对原代培养脂肪变性大鼠肝细胞细胞色素P4502E1蛋白表达的抑制作用[J].实用肝脏病杂志.2015
[10].王力,刘辉.一种SD大鼠肝细胞原代培养的改良方法[J].齐齐哈尔医学院学报.2014