（南充市中心医院川北医学院第二临床医学院输血科四川南充637000）
【中图分类号】R55【文献标识码】A【文章编号】1007-8231（2017）23-0185-02
输血是临床抢救和治疗病人过程中有效的辅助手段之一，而准确的血型鉴定试验，是确保输血安全的基础和前提。传统的血型鉴定方法有玻片法、纸板法、试管法。玻片法操作简单、方便，适于血型普查，但反应时间长，易忽略较弱凝集而导致血型鉴定的错误。纸板法是玻片法的改良形式，可以同时进行ABO正反定型和RhD血型鉴定，但其结果易受环境湿度、温度、观察时间等多重因素影响。试管法是经典的ABO、RhD血型鉴定方法，其结果准确可靠，但其操作难以规范化，不适于批量标本的处理。而微柱凝胶技术不仅反应结果可靠，特别是在引入自动血型分型系统以后，消除了人为因素对实验结果的影响，实现了血型鉴定实验的规范化、信息化。我科于2016年3月—2016年12月，采用纸板法、自动微柱凝胶技术两种方法鉴定2600例患者ABO、RhD血型。现将结果报告如下。
1.材料和方法
1.1一般资料
1.1.1标本：2600名患者男性1357名，女性1243名，年龄0～86岁，血样采用EDTA-K2抗凝真空无菌采血管
1.1.2试剂：抗-A、抗-B（长春博德生物技术有限责任公司），抗-D标准血清（海尔施生物医药股份有限公司），抗-H血清（上海血液生物医药有限责任公司）0.8%A、B反定型标准红细（长春博迅生物技术有限责任公司），3%A/B试剂红细胞（上海血液生物医药有限责任公司），人源抗-A、抗-B血清（本室自制），ABO/RhD血型鉴定卡（长春博迅生物技术有限责任公司），凹型ABO/RhD血型鉴定纸板（长春博德生物技术有限责任公司）。
1.1.3仪器：XK—550血库专用离心机（四川蜀科仪器有限公司），博迅血型卡分型系统（长春博迅生物技术有限责任公司）
1.2方法
1.2.1纸板法ABO血型鉴定：实验步骤参照玻片法[1]，在标有抗A、抗B、抗D凹型检测孔内分别加入抗A、抗B、抗D标准血清1滴，再分别加入受检者3%～5%红细胞悬液1滴，玻璃棒搅匀；在标有Ac、Bc的凹型检测孔内分别滴加受检者血浆1滴，再分别滴加A型、B型3%试剂红细胞，肉眼观察来判断结果。对于正反定型不一致的标本用试管法做进一步的分析、定型。
1.2.2自动微柱凝胶法ABO/RhD血型鉴定：使用博迅血型卡分型系统，按照仪器操作规程进行自动加样，离心，结果判读与信息保存，同样对于正反定型不一致的标本用试管法做进一步的分析、定型。
1.2.3试管法血型鉴定
（1）正定型：取洁净小试管三支,用蜡笔标明抗-A、抗-B、抗-D，并加入抗-A、抗-B、抗-D标准血清2滴于相应试管内，再分别加入受检者5%红细胞悬液1滴,混匀。以1000r/min离心5min,取出轻摇试管，肉眼观察沉于试管底部的红细胞的凝集情况，判断结果[2]。
（2）反定型：取洁净小试管两支,用蜡笔标明A细胞、B细胞，并分别加入受检者血浆2滴，3%A细胞、B细胞1滴于相应试管内,混匀。以1000r/min离心5min,取出轻摇试管，肉眼观察沉于试管底部的红细胞的凝集情况，判断结果[2]。
1.2.4吸收放散试验：取效价为32的人源抗A（抗B）血清与洗涤后的患者浓缩红细胞和A(或B)细胞分别等量混合，于4℃冰箱内吸收1h,离心收集上清液，测吸收后的效价。吸收后的红细胞用冷生理盐水洗涤6次，于56℃水浴热放散10min,立即离心，吸取上清液。分别在两支试管中加2滴放散液，再分别加入1滴3%～5%的A（或B）、O型红细胞,离心并判读结果，测定放散液抗A(或抗B)效价。判定患者红细胞上是否存在A（B）抗原，并通过比较受检红细胞与正常A（或B）细胞吸收放散能力的差异，判断受检红细胞亚型的可能性。
1.2.5唾液型物质检测：待检唾液在沸水浴中煮沸10min,900g离心10min后吸取上清液，分别将等量的唾液和已稀释的抗A(或抗B)和抗H加入试管，室温放置15min,在两支试管中分别加入2滴中和唾液，再分别加入1滴3%～5%的A（或B）、O型红细胞，室温放置30min，离心并判读结果。
1.2.6H抗原强度检测：取洁净小试管三支，分别加入1滴3%～5%的A（或B）、O型红细胞及患者红细胞，再分别加入抗H血清1滴，血清学专用离心机3000r/min离心15s,比较患者红细胞与O细胞、A（或B）细胞H抗原的强度差异。
1.3统计学方法
样本资料采用χ2检验，通过SPSS21软件进行分析。
2.结果
2600例患者ABO血型鉴定中自动微柱凝胶法一次准确定型率为99.92%（2598/2600），纸板法一次准确定型率为99.27%（2581/2600），两种方法比较有显著差异（P<0.05），结果见表1。自动微柱凝胶法正反定型一致者2586例，14例正反定型不一致者，最后确定4例为6个月以内婴儿，本身体内还未产生抗体；2例为A亚型；1例为B亚型；1例为AB亚型；2例因为疾病使红细胞上抗原减弱；2例为冷凝集；2例因为疾病使患者红细胞上自凝。纸板法正反定型一致者2577例，有14例正反定型不一致者与自动微柱凝胶法情况相同；另有4例在纸板法中因蛋白质干扰出现串钱状凝集而在自动微柱凝胶法中正确定型，3例因抗原较弱在纸板法中错误定型而在自动微柱凝胶法中正确定型；有2例因为观察时间过长造成在纸板法中错误定型。
3.讨论
纸板法作为玻片法的改良形式，可以同时进行ABO正定型及RhD鉴定，仍然被广大基层医疗单位使用。若反应时间过短，弱凝集容易被忽略，本研究中有3例因抗原较弱和4例亚型在纸板法中错误定型。血浆蛋白也会干扰血型鉴定，本研究中有4例因为血浆蛋白干扰出现假凝集。纸板法因缺乏自身对照，不能发现冷凝集和某些自身免疫性疾病引起的红细胞凝集[3],本研究中的2例冷凝集和2例自身凝集在纸板法中错误定型。
微柱凝胶技术作为一项免疫学检测技术，已经在发达国家作为常规红细胞血型血清学检测技术应用于临床[4]。结果可以肉眼直视判读，也可以由自动化仪器判读。许多亚型红细胞在与标准血清呈现混合视野，在传统的纸板法和试管法中不便于发现，而在微柱凝胶卡中分成明显的上下两群。本研究中有2例出现双群，后经证实1例为A3亚型，1例为AmB型。而微柱凝胶法也不会受血浆蛋白干扰。
综上所述，自动微柱凝胶法是一种安全、灵敏的血型鉴定技术，实验过程自动化、标准化，实验结果管理信息化，最大限度消除人为因素和外界因素对实验的影响，并且易于发现亚型，对提高血型鉴定检验质量与水平有明显的促进作用，值得在临床上得到进一步的推广和应用。
【参考文献】
[1]中华人民共和国卫生部.中国输血技术操作规程(血站部分).天津科学技术出版社，1997:60-62.
[2]夏琳.临床输血诊疗技术[M].北京:人民卫生出版社，2008:62-64.
[3]王琳.抗M引起ABO血型鉴定困难分析[J].中国现代医生医生，2009，47(2):91.
[4]TitlestK,Detectionofirregularredcellantibodies:morethan3yearsofexperiencewithageltechniqueandpooledscreeningcells.VoxSang,1997,73:246.