导读:本文包含了淀粉酶基因克隆论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:淀粉酶,基因,芽孢,菌株,盐度,杆菌,酸性。
淀粉酶基因克隆论文文献综述
栗志民,钱佳慧,刘建勇,艾加林,檀克勤[1]（2017）在《九孔鲍α-淀粉酶基因克隆、表达分析及与生长性状相关性》一文中研究指出实验采用cDNA末端快速扩增(RACE)和反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术对九孔鲍(Haliotis diversicolor supertexta)α-淀粉酶基因c DNA进行克隆,并分析该基因的组织表达及其与生长性状的相关性。结果表明,九孔鲍α-淀粉酶基因c DNA全长为2 260 bp,其中开放阅读框长度为2 088 bp,共编码695个氨基酸。经Singal P分析,α-淀粉酶多肽链中含有信号肽结构,且长度为18个氨基酸(MWAQYGIVSALLVLSASA),由该多肽链折迭成的叁级结构中含有domain A、domain C 2个结构域,并且在domain A第28~第396氨基酸处存在催化中心。该基因在九孔鲍右侧壳肌、肠、肝脏、胃、外套膜、吻、腹足7种组织中均有不同程度表达。其中在胃中表达量最高,表达量高达326.803;而在外套膜中表达量最低,表达量仅为0.35。经ANOVA分析,消化组织与非消化组织间的α-淀粉酶基因表达量存在显着差异(P<0.05)。α-淀粉酶基因mRNA表达量与生长性状呈显着正相关(P<0.05)。(本文来源于《南方水产科学》期刊2017年06期）
张巧格[2]（2017）在《解淀粉芽孢杆菌BH072 α-淀粉酶理化性质及基因克隆的研究》一文中研究指出淀粉酶是一类重要的工业淀粉加工用酶,是淀粉原料加工工业的基础,其中α-淀粉酶是一种十分重要的淀粉酶。α-淀粉酶存在于动植物和微生物中,是一种生物界广泛分布的酶。芽孢杆菌是产淀粉酶微生物中研究最深入的“细胞工厂”。本论文实验拟确定本实验室保存的解淀粉芽孢杆菌BH072菌株中α-淀粉酶的存在,进而研究其理化性质,克隆其基因,为菌株的工业化利用奠定基础。本实验以解淀粉芽孢杆菌BH072为α-淀粉酶产生菌株,通过硫酸铵沉淀、DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析、Sephadex G-100凝胶过滤层析和Native-PAGE凝胶电泳回收等方法,分离纯化出了分子量为68kDa,具有淀粉分解活性的淀粉酶。将纯化淀粉酶进行酶学性质的分析研究,确定该淀粉酶是一种最适pH为6.5,最适温度65℃的中温酸性淀粉酶;pH5.5-9.0范围稳定,表现良好耐热性,并且其为非钙离子依赖型淀粉酶,表面活性剂对该酶活性有轻微抑制作用,丝氨酸蛋白抑制剂有促进作用。分析其水解产物,并通过比较它与商品α-淀粉酶的水解效果,确定其为比商品α-淀粉酶对可溶性淀粉水解效果更好的α-淀粉酶。该淀粉酶有较好生淀粉水解能力。通过部分氨基酸序列分析,确定其为解淀粉芽孢杆菌BH072全基因组中预测α-淀粉酶基因表达的α-淀粉酶。为了研究解淀粉芽孢杆菌BH072α-淀粉酶的分子基础,在对前期发表的该菌株基因组序列进行生物信息学分析的基础上,构建了pET-28a(+)-amy072异源表达系统进行异源表达。对纯化重组酶酶学性质的鉴定,进一步验证了所得分离纯化的野生型α-淀粉酶的基因序列。基于基因序列分析了解淀粉芽孢杆菌BH072菌株的遗传进化,预测其二级结构并建立了解淀粉芽孢杆菌BH072α-淀粉酶的的3D结构模型,在分子水平解释了其酶学特性。本论文建立了解淀粉芽孢杆菌BH072α-淀粉酶分离纯化技术,对该酶的理化特性进行了系统研究,克隆表达了α-淀粉酶的基因,并分析了其基因序列,为该菌株的开发利用奠定了基础。(本文来源于《天津大学》期刊2017-05-01）
廖思明,孙靓,王青艳,申乃坤,朱婧[3]（2017）在《耐热α-淀粉酶的筛选、基因克隆和酶学性质分析》一文中研究指出【目的】筛选耐热α-淀粉酶并实现异源表达,同时分析其酶学性质特征。【方法】以M9培养基加上可溶性淀粉作为选择性分离培养基,从腾冲火山温泉土壤中筛选到产淀粉酶的菌株Anoxybacillus sp.GXS-3。根据淀粉酶氨基酸保守序列,设计引物进行PCR扩增,然后对目标序列进行步移扩增,获得淀粉酶基因AmyGX。将AmyGX与表达载体pQE30连接,导入大肠杆菌M15中表达,对重组酶进行分离纯化和酶学性质分析。【结果】AmyGX基因长1 515 bp,编码505个氨基酸残基,前23个氨基酸残基为信号肽序列;重组质粒pQE30-AmyGX编码的蛋白分子量为58.04kDa,对可溶性淀粉催化水解反应的最适温度为60℃,最适pH值为8.0,V_(max)、K_m值分别为0.19U/mg、3.14mg/mL,热半失活温度T_(50)~(30)值为65.2℃;Zn~(2+)、Cu~(2+)、Co~(2+)、Fe~(3+)、Ba~(2+)对该酶具有明显的抑制作用,Na~+、K~+对该酶有激活作用,Mg~(2+)、Ca~(2+)的影响则不明显。【结论】AmyGX是一种中等耐温碱性酶,在造纸、洗涤剂生产和有毒废弃物去除等方面具有潜在的应用前景。(本文来源于《广西科学》期刊2017年01期）
杨媛,姚甜甜,熊海涛,杜丽琴,韦宇拓[4]（2017）在《田菁根瘤菌嗜盐α-淀粉酶的基因克隆表达与分子改造》一文中研究指出【目的】克隆表达田菁根瘤菌嗜盐α-淀粉酶基因,并对其进行基因改造,为探索与嗜盐性相关的氨基酸位点提供参考。【方法】从田菁根瘤菌及周围土壤的宏基因组中克隆到一个命名为RSA的极端嗜盐淀粉酶。通过与同源性为75.33%的嗜盐α-淀粉酶K6的序列比对发现,RSA-D205位点与已报道的K6-N204(嗜盐相关的氨基酸位点)相似,从而对其进行定点饱和突变以研究相关酶学性质。【结果】共获得17个突变子,其最适NaCl浓度较RSA均有不同程度的降低。RSA-D205R、RSA-D205C酶反应温度高达80℃,拓宽了其应用范围。【结论】RSA-D205氨基酸残基位点与Na~+结合位点有一定的联系;另外,精氨酸(R)、半胱氨酸(C)对淀粉酶的高温改造具有参考价值。(本文来源于《广西科学》期刊2017年02期）
钱佳慧[5]（2016）在《九孔鲍α-淀粉酶基因克隆、生长相关SNP筛选及生态响应研究》一文中研究指出海洋生物具有同陆地生物相同的蛋白酶组分,其中?-淀粉酶是众多蛋白酶中最重要胞外蛋白酶,它广泛存在于植物、动物、微生物等多种生物群体中。?-淀粉酶在生物体碳水化合物代谢过程中起到至关重要的作用,且有研究表明?-淀粉酶与生物体生长具有显着相关性。因此本研究对九孔鲍(Haliotis diversicolor supertexta)?-淀粉酶基因cDNA全长进行克隆,分析九孔鲍中?-淀粉酶的理化性质,并对?-淀粉酶基因组织表达模式进行探究。在研究?-淀粉酶基因结构的基础上,笔者对?-淀粉酶基因中的SNP位点进行筛选,分析得到与九孔鲍生长相关的SNP位点,并对位点进行分型及多态性研究。最后笔者采用实时荧光定量研究了盐度、胁迫时间2个非生物因子对九孔鲍?-淀粉酶基因表达量进行差异分析,为九孔鲍生长差异提供分子方面的理论依据。研究结果具体如下:1.九孔鲍?-淀粉酶基因cDNA全长克隆及组织表达实验采用cDNA末端快速扩增(RACE)和反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术对九孔鲍?-淀粉酶基因cDNA进行克隆,结果表明,?-淀粉酶基因cDNA全长为2260bp,其中开放阅读框长度为2088bp,5’UTR长68bp,3’UTR长104bp,共编码氨基酸695个。经SingalP该多肽含有信号肽结构,且信号肽由18个氨基酸组成(M1WAQYGIVSALLVLSASA18),表明该蛋白为分泌蛋白。对α-淀粉酶进行结构域分析发现,该蛋白含有2个结构域(domainA、domainC),在domainA中含有淀粉酶催化中心,位于第28~396氨基酸处。对九孔鲍α-淀粉酶进行同源性分析发现,九孔鲍与皱纹盘鲍淀粉酶序列同源性最高达87.9%,而与山羊、人类等脊椎动物淀粉酶序列同源性较低(<50%),表明九孔鲍α-淀粉酶与无脊椎动物同源性高,与脊椎α-淀粉酶同源性低。构建系统进化树显示,九孔鲍?-淀粉酶基因与无脊椎动聚为一簇,且与皱纹盘鲍的亲缘关系最近。相较而言,九孔鲍?-淀粉酶基因与人类、野猪、小鼠以及硬骨鱼类的亲缘关系较远。采用实时荧光定量PCR技术对九孔鲍α-淀粉酶的组织表达特征进行分析,结果表明α-淀粉酶在九孔鲍右侧壳肌、肠、消化腺、胃、外套膜、吻、腹足7种组织中均不同程度表达。其中α-淀粉酶基因在九孔鲍胃、消化腺、肠组织中为高水平表达,且胃中表达量高达326.803;相反右侧壳肌、外套膜、吻、腹足中α-淀粉酶基因低水平表达,外套膜中表达量仅为0.35。经ANOVA分析可知,消化组织与非消化组织间的α-淀粉酶基因表达量存在显着差异(P<0.05)2.九孔鲍?-淀粉酶基因SNP位点筛选及生长相关性研究对九孔鲍?-淀粉酶基因中间片段采用直接测序法进行SNP筛选,共获得2个与生长相关的SNP位点,经过分析,其中一个SNP位点位于淀粉酶基因cDNA全长中第1174bp处,且发生CG突变(g.1174C>G),而另一个SNP位点位于1488bp处发生CT突变(g.1488C>T)。通过对SNP位点进行基因型统计分析,1174bp位点存在3种基因型,分别为CC、GG和CG,而1488bp位点也同样存在3种基因型,分别为CC、TT、CT。对SNP位点进行遗传多样性性参数分析,结果表明,g.1174C>G期望杂合度为0.4997,观测杂合度为0.6129;g.1488C>T期望杂合度为0.4745,观测杂合度为0.4516。且2个SNP位点均符合哈迪-温伯格平衡(P>0.05)。根据位点的多态性信息含量(PIC)可知,家系的平均多态性为0.3669,表明家系淀粉酶基因间多态性较低。经过九孔鲍?-淀粉酶基因型与生长性状相关性分析,以上2个SNP位点均与九孔鲍生长性状显着相关(P<0.05),且g.1174C>G处基因型为GG的个体在体重和壳长方面显着高于基因型为GC和CC的个体(P<0.05),表明C为显性性状,G为隐性性状;g.1488C>T处基因型为TT的个体在体重、壳长以及壳宽等方面均显着低于基因型为CC和CT的个体,表明C为显性性状而T为隐性性状。因此可以推测出含有C的个体生长性状优良。3.盐度及胁迫时间对九孔鲍?-淀粉酶基因表达联合效应采用中心复合设计和响应曲面法,以盐度和胁迫时间作为变量对九孔鲍?-淀粉酶基因表达进行联合效应分析。结果表明,盐度对九孔鲍?-淀粉酶基因表达量的一次效应影响不显着(P>0.05),而胁迫时间对淀粉酶基因表达量影响的一次效应显着(P<0.05),表明盐度对九孔鲍?-淀粉酶基因表达量的影响是非线性的,而胁迫时间对九孔鲍?-淀粉酶基因表达量的影响是呈线性关系。分析发现盐度的二次效应显着(P<0.05),胁迫时间二次效应不显着(P>0.05),表明盐度对九孔鲍?-淀粉酶基因表达量的影响呈现曲线效应,即随盐度升高,淀粉酶基因表达量呈现先上升后下降的峰值变化。相反胁迫时间对九孔鲍?-淀粉酶基因表达量的影响呈非曲线效应。此外盐度和胁迫时间之间不存在交互作用,即两个因子为独立因子,彼此间互不影响。实验建立的?-淀粉酶基因表达回归模型达极显着水平(P<0.05),且失拟项不显着(P>0.05),表明实验拟合出的方程有效。且回归方程的决定系数为80.05%,校正系数65.80%,预测系数50.18%,表明方程拟合度较好,模型选择较为恰当,可以为不同盐度和胁迫时间诱导下的淀粉酶基因表达量变化提供参考依据。(本文来源于《广东海洋大学》期刊2016-06-01）
林梦丹[6]（2015）在《产淀粉酶微生物的筛选及基因克隆表达》一文中研究指出淀粉酶是指能水解淀粉和糖原一类酶的总称,可应用于面包烘焙、酿造、果汁、糖浆等多种食品的生产,也可应用于纸张上胶、纺织品退浆、洗涤剂以及药片压制等行业。本课题从不同来源的环境中筛选产淀粉酶微生物并进行基因克隆、表达和酶学性质研究。具体研究结果如下:从腾冲温泉、大布苏盐湖、红树林等11个样品中共筛选到38株产淀粉酶菌株。结合菌株的形态特征和16S rDNA序列分析对38株菌株进行鉴定,结果显示所筛选的产淀粉酶微生物主要有芽孢杆菌属、弧菌属、节杆菌属和发光杆菌属等属。其中菌株WQJ-1和WQJ-60所产淀粉酶的最适反应pH和温度分别为6.0,75℃和3.5,80℃,分别鉴定为地芽孢杆菌属(Geobacillus)和脂环酸芽孢杆菌属(Alicycloobacillus)。对菌株WQJ-60进行产酶培养基及发酵条件的优化。优化后的产酶培养基配方为:麦芽糖1.0%,花生饼粉1.5%,NaCl 0.5%,K2HPO450 mM,吐温-80 0.06%,初始pH3.0;优化后的发酵条件为:培养温度60℃,摇床转速200 r/min,装液量50mL/250mL,接种量为4%,发酵周期42h;优化后酶活力达到4.8U/mLL比优化前(0.4 U/mL)提高了 12倍。该淀粉酶的最适反应pH和温度分别为3.5和80℃,在pH3.0～5.0范围内稳定且有较好的耐酸性;Hg2+、SDS、Pb2+和Fe2+对该酶具有抑制作用,Mn2+、Cu2+和β-疏基乙醇对该酶有促进作用;其最适作用底物是可溶性淀粉。以38株菌株的基因组DNA为模板,利用简并引物克隆得到14条与NCBI数据库中已知淀粉酶最高一致性为70%～100%的淀粉酶基因片段。基于获得的片段序列,从菌株WQJ-1中克隆得到α-淀粉酶全长基因amyWQJ。该基因全长1614 bp,编码537个氨基酸和一个终止密码子,其蛋白质N端22个氨基酸为预测的信号肽。该淀粉酶基因成功在大肠杆菌BL21(DE3)中表达。镍柱纯化后重组酶rAmyWQJ的最适反应pH和温度分别为6.0和70℃,在pH5.0～10.0范围内稳定且具有较宽的pH耐受范围;添加10 mM、15 mM Ca2+能显着提高酶的热稳定性;Hg2' EDTA和SDS对该酶有显着的抑制作用,Co2+、Na+和β-Mercaptoethanol对酶有促进作用;其最适作用底物是木薯淀粉,其次是可溶性淀粉、玉米淀粉和马铃薯淀粉;以可溶性淀粉为底物,该酶的Vmax为2197.80 μmol/(min·mg),Km为6.62 mg/mL;通过薄层层析分析,该酶水解淀粉的产物主要为寡聚糖,推测为糊精。本课题从不同环境中筛选得到的产淀粉酶微生物及克隆得到的基因可为新的淀粉酶及其基因资源的开发应用奠定基础。(本文来源于《福州大学》期刊2015-06-01）
张光旭,谢模意,王凡,余磊,梁海秋[7]（2015）在《嗜热菌Geobacillus sp.HB1的分离鉴定及其α-淀粉酶基因克隆表达》一文中研究指出淀粉加工和利用是广西的支柱产业,各种优良淀粉酶的开发一直是研究热点。本文从云南腾冲热海温泉分离到一株产嗜热Ⅶ-淀粉酶的菌株Geobacillus sp.HB1,经扩增其16Sr DNA测序比对,表明其与已公布基因组序列的嗜热芽孢菌Geobacillus sp.C56-T3具有99%的相似性。根据Geobacillus sp.C56-T3的AMY2基因设计引物,从Geobacillus sp.HB1中扩增出Ⅶ-淀粉酶基因HBCANH1,其与AMY2基因的核苷酸序列和氨基酸序列的一致性分别为96.7%和98.0%,以p ET-22b(+)为载体构建重组质粒p HBCANH1并在大肠杆菌中获得了外源基因的表达,经破胞后测得表达活力为172.38U/m L。重组酶HBCANH1最适反应温度为70℃,最适反应p H为6.4,具有较好的应用研究前景。(本文来源于《轻工科技》期刊2015年01期）
刘建华,郭军,徐梅,陈丹,左建军[8]（2014）在《产α-淀粉酶枯草芽孢杆菌选育和其酶学特性分析及产酶基因克隆》一文中研究指出本研究通过筛选具有较好热稳定性的中温酸性α-淀粉酶生产菌株,分析其酶学特性;研究该菌株产酸性α-淀粉酶基因的结构特征,探讨该基因原核表达特点;运用PCR技术克隆得到该菌株产酸性α-淀粉酶基因的全序列,并对该序列进行生物信息学分析;通过构建pET-Amy载体,转化到大肠杆菌BL21中进行原核表达,且对原核表达的条件做了初步的优化;采用His标记蛋白纯化柱对重组蛋白进行了纯化,然后对纯化后的重组酸性α-淀粉酶进行了基本酶学性质的检测与分析。结果表明,通过淀粉水解透明圈直径/菌落直径初筛法、结合液体发酵酶活力测定复筛法,从30份样品中筛选得到一株高产中温酸性α-淀粉酶的菌株ZJ-1,它的初始产酶活力为(56.5±0.7)U/mL,达到国内较高水平。通过菌株ZJ-1的形态结构、生理生化反应和16S rDNA序列进行分析,将其鉴定并命名为枯草芽孢杆菌Bdacillus subtilis ZJ-1。通过60%乙醇沉淀、30kDa超滤管超滤和Sephadex G-100分子过滤层析,将Bacillus subtilis ZJ-1产中温酸性α-淀粉酶纯化,纯化酶的比活力达到了542.7 U/mg,纯化倍数为27.7倍,酶活力回收率为8.9%。纯化酶的分子质量为58 kDa,Native-PAGE证实纯化酶具有淀粉酶生物学活性。酶学性质分析的结果表明:Bacillus subtilis ZJ-1产α-淀粉酶的最适pH和温度分别为pH 5.0和50℃;它在40℃时的相对活力是(89.4±3.0)%;在pH 3.0、40℃和5 mmol/L Ca~(2+)溶液中孵育1 h后能保持(17.1±3.3)%的酶活力;它在80℃孵育1 h仍保留(15.1±2.6)%的酶活力,这些证明该酶是一种具有一定高温稳定性的中温酸性α-淀粉酶。另外,该酶是一种金属酶,Ca~(2+)对酶的稳定是必需的,而Cu~+、Ag~+和Al~(3+)对酶有抑制作用。该酶对可溶性淀粉的Km为4.19 mg/mL。通过PCR技术扩增获得Bacillus sp.ZJ-1酸性α-淀粉酶的结构基因序列(GenBank收录号为YP003920231.1)。该基因全长1 545 bp,生物信息软件分析结果表明,该基因编码514个氨基酸,与芽孢杆菌属α-淀粉酶表现出很高的同源性;预测其信号肽序列的剪切位点位于31位的丙氨酸和32位的谷氨酸之间;酸性α-淀粉酶蛋白的二级结构由18.48%α-螺旋、29.18%延伸链和52.33%无规则卷曲组成;蛋白质序列包含叁个α-淀粉酶保守区:AmyAc_bac_fung_AmyA、DUF1939 superfamily和PRK09441。(本文来源于《第七届中国饲料营养学术研讨会论文集》期刊2014-10-16）
覃晓丽[9]（2014）在《阴沟肠杆菌嗜盐α-淀粉酶的基因克隆、表达及嗜盐特性研究》一文中研究指出利用PCR技术从广西大学奶牛厂的奶牛粪便土壤中混合培养微生物的总DNA中克隆得到一个来自非嗜盐性的阴沟肠杆菌的α-淀粉酶基因,将该淀粉酶基因克隆到大肠杆菌JM109中进行重组表达,经破胞提取胞内总蛋白测定淀粉酶活力,当以可溶性淀粉为底物时检测不到淀粉酶活力,当在反应缓冲液中添加NaCl时能检测到淀粉酶活力,说明该基因是一种嗜盐淀粉酶的基因。纯化重组酶的酶学性质研究结果表明,该酶以可溶性淀粉为底物时,最适反应温度为50℃；最适pH为6.0,NaCl终浓度在4mol/L时,酶活力最强,在盐浓度为5.5mol/L时,仍能保持最高酶活的60%,属于极端的嗜盐酶,水解产物的特性属于α-淀粉酶。通过该嗜盐α-淀粉酶的氨基酸组成分析,其酸性氨基酸(天冬氨酸和谷氨酸)含量达15.8%,高于一些非嗜盐淀粉酶酸性氨基酸的10%含量。将嗜盐淀粉酶与非嗜盐淀粉酶的氨基酸序列进行分析比对,选取保守区中某一位置大多嗜盐酶与非嗜盐酶所不相同的氨基酸进行定点突变或者饱和突变,从而进行嗜盐机理的研究。从实验结果可推测出丙氨酸(A)、天冬氨酸(D)、丝氨酸(S)、色氨酸(W)、天冬酰胺(N)确实能降低酶对NaCl的依赖性,使嗜盐酶在无NaCl的情况下,也能表现出酶活,同时,不同突变位点和不同氨基酸的选择对酶活也会产生不同的影响。(本文来源于《广西大学》期刊2014-06-01）
欧阳蒲月,刘永亮,王瑛,严振[10]（2014）在《广藿香α-淀粉酶PcAMY1基因克隆和序列分析》一文中研究指出为了解广藿香对淀粉的利用,克隆了广藿香(Pogostemon cablin)的α-淀粉酶(alpha-amylase,AMY)基因,对其进行相关生物信息学分析。搜索本课题组建立的广藿香转录组数据库,获得AMY基因全长序列,并设计全长引物进行PCR验证;利用生物信息学软件对AMY基因进行生物信息学分析。本研究获得的广藿香AMY基因命名为PcAMY1基因(GenBank登录号为KC862311),该基因全长1 420 bp,编码422个氨基酸。基于生物信息软件分析了PcAMY1基因编码蛋白的理化特性。系统进化树分析结果表明,PcAMY1基因与牵牛(Ipomoea nil)的AMY序列同源性最高,与赤豆(Vigna angularis)、菜豆(haseolus vulgaris)、蒺藜苜蓿(Medicago truncatula)等植物次之,与自然进化关系保持一致。PcAMY1基因在广藿香嫩茎、成熟茎、老茎、嫩叶、成熟叶、老叶中均有表达,但在老茎中表达量最高。成功克隆到广藿香PcAMY1基因,并对其进行相关生物信息学与基因表达分析。(本文来源于《热带作物学报》期刊2014年04期）
淀粉酶基因克隆论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
淀粉酶是一类重要的工业淀粉加工用酶,是淀粉原料加工工业的基础,其中α-淀粉酶是一种十分重要的淀粉酶。α-淀粉酶存在于动植物和微生物中,是一种生物界广泛分布的酶。芽孢杆菌是产淀粉酶微生物中研究最深入的“细胞工厂”。本论文实验拟确定本实验室保存的解淀粉芽孢杆菌BH072菌株中α-淀粉酶的存在,进而研究其理化性质,克隆其基因,为菌株的工业化利用奠定基础。本实验以解淀粉芽孢杆菌BH072为α-淀粉酶产生菌株,通过硫酸铵沉淀、DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析、Sephadex G-100凝胶过滤层析和Native-PAGE凝胶电泳回收等方法,分离纯化出了分子量为68kDa,具有淀粉分解活性的淀粉酶。将纯化淀粉酶进行酶学性质的分析研究,确定该淀粉酶是一种最适pH为6.5,最适温度65℃的中温酸性淀粉酶;pH5.5-9.0范围稳定,表现良好耐热性,并且其为非钙离子依赖型淀粉酶,表面活性剂对该酶活性有轻微抑制作用,丝氨酸蛋白抑制剂有促进作用。分析其水解产物,并通过比较它与商品α-淀粉酶的水解效果,确定其为比商品α-淀粉酶对可溶性淀粉水解效果更好的α-淀粉酶。该淀粉酶有较好生淀粉水解能力。通过部分氨基酸序列分析,确定其为解淀粉芽孢杆菌BH072全基因组中预测α-淀粉酶基因表达的α-淀粉酶。为了研究解淀粉芽孢杆菌BH072α-淀粉酶的分子基础,在对前期发表的该菌株基因组序列进行生物信息学分析的基础上,构建了pET-28a(+)-amy072异源表达系统进行异源表达。对纯化重组酶酶学性质的鉴定,进一步验证了所得分离纯化的野生型α-淀粉酶的基因序列。基于基因序列分析了解淀粉芽孢杆菌BH072菌株的遗传进化,预测其二级结构并建立了解淀粉芽孢杆菌BH072α-淀粉酶的的3D结构模型,在分子水平解释了其酶学特性。本论文建立了解淀粉芽孢杆菌BH072α-淀粉酶分离纯化技术,对该酶的理化特性进行了系统研究,克隆表达了α-淀粉酶的基因,并分析了其基因序列,为该菌株的开发利用奠定了基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
淀粉酶基因克隆论文参考文献
[1].栗志民,钱佳慧,刘建勇,艾加林,檀克勤.九孔鲍α-淀粉酶基因克隆、表达分析及与生长性状相关性[J].南方水产科学.2017
[2].张巧格.解淀粉芽孢杆菌BH072α-淀粉酶理化性质及基因克隆的研究[D].天津大学.2017
[3].廖思明,孙靓,王青艳,申乃坤,朱婧.耐热α-淀粉酶的筛选、基因克隆和酶学性质分析[J].广西科学.2017
[4].杨媛,姚甜甜,熊海涛,杜丽琴,韦宇拓.田菁根瘤菌嗜盐α-淀粉酶的基因克隆表达与分子改造[J].广西科学.2017
[5].钱佳慧.九孔鲍α-淀粉酶基因克隆、生长相关SNP筛选及生态响应研究[D].广东海洋大学.2016
[6].林梦丹.产淀粉酶微生物的筛选及基因克隆表达[D].福州大学.2015
[7].张光旭,谢模意,王凡,余磊,梁海秋.嗜热菌Geobacillussp.HB1的分离鉴定及其α-淀粉酶基因克隆表达[J].轻工科技.2015
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