常用测定抗氧化肽活性方法的比较

论文摘要

抗氧化肽是指具备抑制氧化应激作用、清除自由基性能的一类生物活性肽,属于细胞穿透肽的一种,近年来备受研究者的关注。如何测定抗氧化肽的活性也就成为了关注的焦点。针对该问题,本研究利用不同的抗氧化肽对常用的化学测定、细胞学测定和动物实验测定方法进行比较。主要研究内容包括以下三个方面:抗氧化肽化学评价方法重现性比较。利用谷胱甘肽对6种常用的化学抗氧化肽活性测定方法进行比较。利用DPPH·法、ABTS+法、·O2-法、·OH法、还原Fe3+法、还原Cu2+法测定谷胱甘肽活性的变异系数分别为2.34%、4.90%、8.08%、34.81%、141.15%和157.69%;标准偏差分别为0.36、0.05、5.89、10.21、0.48和5.33。DPPH·法的变异系数和标准偏差明显低于其他5种方法,具有较高的重现性。考察不同实验人员利用DPPH·法测定谷胱甘肽的抗氧化活性,变异系数均没有显著性差异。同时,利用该方法比较不同实验人员测定合成的抗氧化肽467和抗氧化肽568活性,结果没有显著性差异。CAA法与DPPH·法的比较。通过细胞毒性试验,确定抗氧化肽的无害浓度范围为0.5-4.0μg/mL。进而利用细胞抗氧化性方法（CAA,Cellular Antioxidant Activity）测得抗氧化肽的抗氧化活性,顺序与DPPH·法相同,均为:谷胱甘肽>抗氧化肽467>抗氧化肽568,不过利用CAA法测定抗氧化活性的差别远远小于DPPH·法。动物实验与DPPH·法的比较。利用D-半乳糖造模,并通过灌胃和腹腔注射两种方式给予小鼠抗氧化肽,结果表明:不论在灌胃组还是在注射组中,给药7周后,三者均可以显著或极显著（P<0.05或P<0.01）降低衰老小鼠血清和肝脏组织中MDA的含量、提升SOD的活力、提高GSH的含量,并且存在剂量依赖效应。谷胱甘肽组的MDA降低率、SOD提升率和GSH提高率>抗氧化肽467组>抗氧化肽568组,即体内抗氧化能力为谷胱甘肽>抗氧化肽467>抗氧化肽568,与DPPH·法顺序相同,差别与CAA法接近。采用以上三类方法对未知结构的大豆蛋白抗氧化肽和卵清抗氧化肽进行测定比较,与上述结果一致。因此,在众多测定方法中动物实验方法可以准确的反映抗氧化肽活性,但是周期长、费用高、操作复杂;而基于细胞水平的CAA法操作简便、试验耗时短、耗材少、重复性强,结果与动物实验结果高度吻合,是一种评价抗氧化肽活性较好的方法;而DPPH·法虽然对抗氧化肽活性的评价,与前两者相比差别较大,但是基本能够反应抗氧化肽活性顺序,因其重现性最佳,可以作为抗氧化肽筛选的基本方法。

论文目录

• 摘要
• abstract
• 英文缩略
• 1 前言
•   1.1 论文研究目的及意义
•   1.2 国内外研究进展
•     1.2.1 抗氧化肽概述
•     1.2.2 抗氧化肽活性评价方法的研究进展
•   1.3 存在的主要问题
•     1.3.1 体外化学抗氧化活性评价方法的不统一性
•     1.3.2 体外化学抗氧化活性评价方法的不准确性
•     1.3.3 体内抗氧化活性评价方法的复杂性
•     1.3.4 抗氧化活性评价方法的筛选与验证
•   1.4 论文主要研究内容
• 2 体外化学试验方法的筛选与验证
•   2.1 试验材料和仪器设备
•     2.1.1 试验材料
•     2.1.2 试验仪器
•   2.2 试验方法
•     2.2.1 主要试剂配制
•     2.2.2 谷胱甘肽抗氧化试验
•     2.2.3 谷胱甘肽抗氧化试验的重复试验
•     2.2.4 DPPH·法评价合成抗氧化肽467和
•     2.2.5 DPPH·法评价合成抗氧化肽467和568 的重复试验
•     2.2.6 DPPH·法评价大豆蛋白抗氧化肽和卵清抗氧化肽
•     2.2.7 DPPH·法评价大豆蛋白抗氧化肽和卵清抗氧化肽的重复试验
•     2.2.8 数据处理
•   2.3 结果与分析
•     2.3.1 谷胱甘肽抗氧化试验结果
•     2.3.2 谷胱甘肽抗氧化试验的重复试验结果
•     2.3.3 DPPH·法评价合成抗氧化肽467和568 的试验结果
•     2.3.4 DPPH·法评价合成抗氧化肽467和568 的重复试验结果
•     2.3.5 DPPH·法评价大豆蛋白抗氧化肽和卵清抗氧化肽的试验结果
•     2.3.6 DPPH·法评价大豆蛋白抗氧化肽和卵清抗氧化肽的重复试验结果
•   2.4 小结与讨论
• 3 不同抗氧化肽的细胞抗氧化活性比较
•   3.1 试验材料与仪器设备
•     3.1.1 试验材料
•     3.1.2 试验仪器
•   3.2 试验方法
•     3.2.1 主要试剂配制
•     3.2.2 细胞的复苏
•     3.2.3 细胞的培养与传代
•     3.2.4 细胞毒性试验
•     3.2.5 细胞抗氧化性试验（CAA）
•   3.3 结果与分析
•     3.3.1 细胞毒性试验结果
•     3.3.2 细胞抗氧化性试验结果
•   3.4 小结与讨论
• 4 不同抗氧化肽对D-半乳糖致衰老小鼠抗氧化能力的影响
•   4.1 试验材料和仪器设备
•     4.1.1 试验动物
•     4.1.2 试验试剂
•     4.1.3 试验仪器
•   4.2 试验方法
•     4.2.1 D-半乳糖注射液的配制
•     4.2.2 药品的处理及剂量
•     4.2.3 试验动物分组
•     4.2.4 试验动物造模及给药方法
•     4.2.5 小鼠日常状态评定标准
•     4.2.6 样品采集和指标测定
•     4.2.7 数据处理
•   4.3 结果与分析
•     4.3.1 抗氧化肽对灌胃组小鼠日常状态的影响
•     4.3.2 抗氧化肽对注射组小鼠日常状态的影响
•     4.3.3 抗氧化肽对灌胃组小鼠抗氧化指标的影响
•     4.3.4 抗氧化肽对注射组小鼠抗氧化指标的影响
•   4.4 小结与讨论
• 5 主要结论
• 参考文献
• 在读期间发表的学术论文
• 附录
• 作者简介
• 致谢

文章来源

类型: 硕士论文

作者: 高涵

导师: 何俊萍,田益玲

关键词: 抗氧化肽,动物实验,衰老模型

来源: 河北农业大学

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 河北农业大学

基金: 国家重点研发计划

分类号: Q51

总页数: 78

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