成团泛菌苯丙氨酸氨基变位酶的热稳定性改造

论文摘要

来源于原核生物成团泛菌（Pantoea agglomerans）的苯丙氨酸氨基变位酶（Pa PAM）可催化α-苯丙氨酸转变为药用价值更高的（S）-β-苯丙氨酸,然而其酶活较低,热稳定性较差,限制其工业应用。本研究突变苯丙氨酸氨基变位酶酶活中心上方loop环上的氨基酸及与其相互作用位点的氨基酸,降低loop环的柔性,以期稳定酶活中心的结构,提高酶的热稳定性。筛选得到热稳定性显著提高的突变体I91M,50℃保温1 h后,剩余酶活达到83%（野生型酶酶活仅剩余30%左右）。该结果有助于苯丙氨酸氨基变位酶的理论研究和工业应用。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 菌株、质粒以及培养基
•   1.2 材料与仪器
•   1.3 实验方法
•     1.3.1 基因操作
•     1.3.2 Pa PAM酶的表达
•     1.3.3 重组蛋白的纯化和鉴定
•     1.3.4 蛋白浓度的测定
•     1.3.5 酶活的测定
•     1.3.6 最适温度的测定
•     1.3.7 热稳定性的测定
•     1.3.8 最适pH值的测定
•     1.3.9 动力学常数的测定
•     1.3.1 0 底物和产物的测定
• 2 结果与分析
•   2.1 突变位点的选择
•   2.2 单点突变的结果初步筛选
•   2.3 突变体酶学性质表征
•   2.4 动力学常数的测定
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 刘辉,张苇苗,徐建,周丽,周哲敏

关键词: 苯丙氨酸氨基变位酶,热稳定性,酶活,定点突变,蛋白质改造

来源: 食品与发酵工业 2019年13期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑

专业: 有机化工

单位: 江南大学生物工程学院,工业生物技术教育部重点实验室(江南大学)

分类号: TQ426.97

DOI: 10.13995/j.cnki.11-1802/ts.019924

页码: 59-64

总页数: 6

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