导读:本文包含了超表达载体论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:菠萝,果眼,AcCBL,转基因
超表达载体论文文献综述
吴竞,何业华,谢桃,丁雅琦,栾爱萍[1]（2019）在《菠萝果眼发育相关基因AcCBL超表达载体构建及其转化的研究》一文中研究指出菠萝(Ananas comosus)果实是由50～200个小果呈螺旋状围绕着果序轴而成的聚花果,每个小果顶部有一个花腔发育而来的果眼。菠萝果眼是宿存的花萼、果托、子房顶部包围而成的一个空腔,中间有枯萎的花瓣、雄蕊和花柱,果眼大小会直接影响果实的外观、可食率和削皮难易等。在种质资源中,一般果眼深度0.8～1.5 mm不等,深浅性状遗传稳定,是其果实评价的重要指标。因此,研究果眼发育相关基因具有重要意义。CBL(钙调磷酸酶B亚基蛋白calcineurinB-like)转录因子作为特殊的钙感受器在植物生长发育和逆境胁迫等响应过程中发挥重要作用。本课题组前期研究表明,AcCBL在苞片、花萼中表达量高,与果眼发育相关。以‘神湾’菠萝花萼为材料,提取RNA,反转录成cDNA;根据菠萝基因组数据库中检索到的AcCBL序列设计一对特异性引物进行克隆;利用Gateway技术,先后用2×Gateway BP、LR克隆酶分别在25℃孵育不少于5 h,将AcCBL转入入门载体pDONR和最终载体pK7WG2D中,构建成超表达载体pAcCBL,在42℃热激转化至DH5α大肠杆菌;将pAcCBL转入农杆菌菌株GV3101感受态中,侵染菠萝胚性愈伤组织并进行共培养。将共培养的愈伤组织分别依次转入500 mg·mL-1 Carb+40 mg·mL-1 Km、400 mg·mL-1 Carb+50 mg·mL-1 Km和300 mg·mL-1 Carb+60 mg·mL-1 Km培养基(MS+2.0 mg·mL BA+1.0 mg·mL-1 NAA)中进行连续3次筛选。淘汰白化芽和白色愈伤组织团块,选择并切取再生的绿芽和绿愈伤组织进行下一轮的筛选培养直至生根。从‘神湾’菠萝花萼中克隆得到AcCBL,包含1个长度为1 227 bp的开放阅读框,可编码408个氨基酸。将构建的超表达载体pAcCBL转入DH5α大肠杆菌,挑取12个阳性克隆进行PCR鉴定,引物为载体上的正向引物TCGCGTTAACGCTAGCATGGATCTC和基因本身的反向引物AGAAAGCTGGGTTCTACTCATTGTATGTTCTT。对筛选得到的4个阳性质粒进行测序,其结果和AcCBL的序列完全一致,表明pAcCBL过表达载体构建成功。继而将其转入农杆菌,经过琼脂糖凝胶电泳检测,其条带大小结果和AcCBL的序列完全一致。对共培养的675块菠萝胚性愈伤组织经过浓度40 mg·mL-1 Km首轮筛选后共获得绿芽103个,绿芽率15.25%;第2、3轮筛选时逐渐将Km浓度提高50和60 mg·mL-1,以减少假阳性转化体,绿芽率分别为8.38%和2.75%。经3轮筛选后共获得2个绿苗,转化率为3.51%。对转化芽的分子检测进在进行中。(本文来源于《中国园艺学会2019年学术年会暨成立90周年纪念大会论文摘要集》期刊2019-10-21）
鲁玫[2]（2019）在《氮和磷对镉胁迫下杨树基因表达的影响及HMA3超表达载体的遗传转化》一文中研究指出森林是人类赖以生存的生态系统,具有重要的生态效益。土壤重金属污染形势严峻,严重威胁着森林生态系统的稳定和健康。此前关于重金属污染的研究主要集中于农田,而对森林关注较少。杨树(Populus)是修复重金属污染土壤的候选植物,其地上部分可以在一个生长季内积累较大的生物量,对重金属的总积累量要远远超过草本超富集植物,具有很大的重金属污染土壤的修复潜力。适当的氮、磷营养,可以提高植物对重金属胁迫等逆境的抗性,然而此前的研究多聚焦于农作物的生理机制。本论文以84K杨(Populus alba×Populus glandulosa)为试验材料,研究氮、磷营养元素在基因表达水平上对植物重金属毒害的缓解作用。研究结果显示:氮、磷营养的添加不同程度地改变了84K杨抗氧化、镉吸收转运、氮代谢相关基因的表达。氮营养的添加提高了大多数基因的表达量,增强了植物对镉(Cd)胁迫的抗性,减轻了Cd对植物的毒害作用,但不同氮形态的作用也存在差异,铵态氮的作用优于硝态氮。磷的添加也不同程度地影响了杨树中相关基因的表达,可能主要是通过改变土壤pH和Cd的活性来影响植物对Cd的吸收,对植物Cd毒害也有一定的缓解作用。此前在杨树基因工程的研究中,主要改良的目标性状是抗虫、抗病、降低木质素含量、抗除草剂、抗盐碱等,而在抗重金属胁迫上研究较少。重金属ATP酶(HMAs)是重金属转运蛋白,通过消耗ATP转运过多的金属离子。HMA3基因定位在液泡膜上,可以将二价金属离子如Cd~(2+)、Zn~(2+)、Pb~(2+)等运输到液泡中隔离起来,参与重金属离子的转运和解毒。但目前关于HMA3基因的报道较少,故本研究以84K杨为对象,以基因组测序完成的毛果杨(Populus trichocarpa Torr.&Gray)基因序列为参考,设计特异性引物,克隆84K杨的HMA3蛋白编码序列,完成HMA3超表达载体的构建。影响杨树遗传转化因素的较多,培养基种类、激素、农杆菌浓度、侵染时间、外植体状态等都会影响杨树的转化效率。本论文对84K杨转化体系的叶片刻伤方式、叶片接种方式、分化培养基、生根培养基等进行了研究和筛选,结果表明叶片表面垂直主叶脉横切的刻伤方式优于叶块,叶片正面朝下接触培养基优于背面朝下的接种方式,最佳叶片分化培养基为MS+0.5 mg.L~(-1) 6-BA+0.05 mg.L~(-1) NAA,生根培养基为1/2MS+0.5 mg.L~(-1) IBA。本试验中,通过抗生素的筛选,有4株组培苗正常生根。(本文来源于《西北农林科技大学》期刊2019-05-01）
路宏朝,李蕊清,孙志阳,王令,张涛[3]（2019）在《略阳乌鸡METTL21C基因克隆及超表达载体构建》一文中研究指出旨在克隆略阳乌鸡 METTL21C基因,构建其超表达载体。采用实时荧光定量PCR(qPCR)技术检测 METTL21C基因在略阳乌鸡7种组织中的表达,通过PCR扩增技术克隆 METTL21C基因完整的CDS区序列,分析其核苷酸序列及不同物种序列进化关系,将 METTL21C基因片段连接至pCD513B载体,构建其超表达载体并转染至293T细胞。结果显示: METTL21C基因在略阳乌鸡心肌中表达量最高,骨骼肌次之;克隆获得略阳乌鸡 METTL21C基因完整编码区序列,共747 bp,编码249个氨基酸残基,与原鸡的相应序列具有很高的同源性;构建的 METTL21C超表达载体能转染293T细胞并成功表达,可直接用于后续 METTL21C基因功能探索的研究。(本文来源于《西北农业学报》期刊2019年03期）
陈昕晟,葛博学,卜庆忠,吴慧,周春华[4]（2019）在《柿果实CCD1基因超表达和RNAi表达载体的构建》一文中研究指出采用CTAB法提取小方柿果肉总RNA,根据带有不同酶切位点的引物获得目的基因柿类胡萝卜素裂解双加氧酶基因(DkCCD1),将扩增的目的基因序列与NCBI登录的基因序列进行核苷酸序列和氨基酸序列比对,发现核苷酸序列相似度均超过99%,氨基酸序列相似度均为100%,由此得到可用于后续试验的目的基因。将得到的目的基因与双元表达载体pCAMBIA1301连接,构建pCAMBIA1301-CCD1超表达载体和具有发卡结构的pCAMBIA1301-CCD1-RNAi表达载体,通过冻融法将载体导入农杆菌EHA105。PCR扩增结果表明:所构建的pCAMBIA1301-CCD1超表达载体和pCAMBIA1301-CCD1-RNAi载体已导入农杆菌,可用于后续的遗传转化研究。(本文来源于《扬州大学学报(农业与生命科学版)》期刊2019年01期）
李彩弟,任玉玲,杨成兰,苏联攀,祁小清[5]（2019）在《紫花苜蓿G6PDH基因的克隆与超表达载体构建》一文中研究指出为了研究G6PDH在紫花苜蓿抗低温胁迫中的作用,以‘青大1号’紫花苜蓿为材料,利用基因克隆、RACE技术获取‘青大1号’紫花苜蓿葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PDH)基因,并进行生物学信息分析和超表达载体的构建。结果显示,成功克隆了一个紫花苜蓿G6PDH基因,该基因c DNA全长2 260 bp,含有1个长度为1 752 bp的开放阅读框,编码583个氨基酸。MsG6PDH与鹰嘴豆、大豆、羽扇豆等序列一致性达到88%以上;在进化上,Ms G6PDH与同为豆科植物的绿豆、野大豆、大豆亲缘关系最近。经预测,Ms G6PDH蛋白二级结构中,α-螺旋占37.91%,β-折迭占5.66%,无规则卷曲占40.31%,并预测得到其叁级结构。分析MsG6PDH编码的氨基酸序列得知,Ms G6PDH蛋白分子量为65.71 k D;理论等电点为8.25;不稳定系数为44.54,为不稳定蛋白,并且属于亲水性蛋白。此外,还同时成功构建了该基因的植物超表达载体pPZPY112-MsG6PDH。本研究将为明确G6PDH在紫花苜蓿响应低温的信号转导途径中的作用提供理论依据。(本文来源于《分子植物育种》期刊2019年12期）
黄玉吉,赖钟雄[6]（2019）在《香蕉几丁质酶基因ChiI2超表达载体和干涉表达载体的构建》一文中研究指出分离克隆栽培香蕉中的几丁质酶基因ChiI2,构建超表达载体和干涉表达载体,可为进一步研究ChiI2基因响应抗逆胁迫的功能提供基础.从栽培香蕉天宝蕉(Musa spp., AAA)中克隆几丁质酶基因ChiI2,利用生物信息软件对该基因进行分析,并用无缝克隆技术分别构建ChiI2的超表达载体和干涉表达载体.从香蕉果皮中克隆到一个几丁质酶基因ChiI2,该基因全长942 bp,蛋白编码313个氨基酸,其编码的蛋白质理论分子量(Mr)为32.96,等电点(pI)为6.77.ChiI2蛋白的α-螺旋结构有6个,β-折迭结构有5个,转角结构有33个.蛋白质疏水性预测分析值为-0.233,属于亲水性蛋白.功能保守域分析表明,该蛋白是糖苷水解酶家族几丁质酶家族的一员.该基因核苷酸序列推导的氨基酸与野生香蕉、玉米、水稻、小麦、莲等植物的同源性都在70%以上.对ChiI2基因进行荧光定量PCR检测,发现4℃处理6 h的表达显着高于对照和38℃处理6 h,表明ChiI2基因可能与低温响应有关,诱导香蕉苗产生抗冷性.利用无缝克隆技术成功构建了pGreenII-ChiI2超表达载体和pGreenII-ChiI2i干涉表达载体,并转化到农杆菌EHA105菌株中.本研究成功地从栽培香蕉天宝蕉中分离克隆到了ChiI2基因,并对其基因特点和蛋白功能进行了预测分析,成功构建了超表达载体和干涉表达载体,可为进一步研究其功能奠定基础,也为采用基因工程方法改良选育香蕉抗寒品种提供了新尝试.(图8表1参24)(本文来源于《应用与环境生物学报》期刊2019年03期）
池永东,陈智慧,邱翔,钟红梅,陈官璐[7]（2018）在《齐口裂腹鱼PGC-1α超表达及干扰慢病毒载体构建》一文中研究指出利用基因重组方法构建齐口裂腹鱼PGC-1α超表达和干扰慢病毒载体,为最终阐明PGC-1α调控齐口裂腹鱼肌纤维类型转化的分子机理提供重要基础。根据GenBank上登录的齐口裂腹鱼PGC-1α基因序列(GenBank登录号为JN195738)设计引物,经过PCR扩增、双酶切、连接来构建PGC-1α超表达和干扰的慢病毒核心质粒,然后将其与穿梭质粒及包装质粒共同转染293T细胞包装成病毒颗粒,感染体外培养的C2C12成肌细胞,利用实时荧光定量PCR(qPCR)检测PGC-1α在被超表达和干扰表达慢病毒载体感染C2C12成肌细胞72h后的表达水平,确定其超表达及干扰效果。重组质粒FUGWPGC-1α-RFP及PsicoR-PGC-1α-GFP测序验证成功,包装后感染C2C12成肌细胞经qPCR检测后结果显示,超表达组PGC-1α基因表达水平极显著高于对照组(P<0.01),而转染shRNA1组及shRNA2组的PGC-1α基因表达水平极显著低于对照组(P<0.01),证明该基因被成功超表达和干扰。成功构建齐口裂腹鱼PGC-1α超表达及干扰慢病毒载体,为进一步研究该基因在成肌细胞分化中的作用提供重要的基础数据。(本文来源于《水产科学》期刊2018年06期）
黄凯,林亚秋,朱江江,马洁琼,王永[8]（2018）在《山羊FGF1基因腺病毒超表达载体的构建》一文中研究指出【目的】为利用超表达手段进一步研究成纤维细胞生长因子1(FGF1)基因对山羊肌内前体脂肪细胞分化过程的影响。【方法】本试验通过构建p Ad Track-CMV-FGF1穿梭质粒,转入含有腺病毒骨架载体pAdEasy-1的大肠杆菌BJ5183感受态细胞中进行同源重组,获得腺病毒超表达载体pAdEasy-FGF1,经Pac I酶切鉴定后转染293A细胞进行病毒的包装与扩繁,最后用包装的pAdEasy-FGF1感染山羊肌内前体脂肪细胞,检测感染前后FGF1的表达变化。【结果】成功构建了腺病毒超表达载体p AdEasyFGF1,并在293A细胞中成功包装,其感染山羊肌内前体脂肪细胞能显着上调FGF1 mRNA的表达水平。【结论】说明FGF1基因可以通过感染重组腺病毒表达载体pAdEasy-FGF1在山羊肌内前体脂肪细胞中实现超表达。(本文来源于《西南农业学报》期刊2018年11期）
王圆圆,许厚强,陈伟,周迪,张鸣[9]（2018）在《从江香猪PHKG2基因超表达载体和RNA干扰载体的构建及其表达》一文中研究指出旨在克隆从江香猪磷酸化酶激酶γ2(phosphorylase kinase gamma 2,PHKG2)基因编码区,并对PHKG2基因功能进行初步探究。本研究利用RT-PCR法扩增从江香猪PHKG2基因完整CDS区。通过构建pEGFP-N3-PHKG2超表达载体,设计并合成4对针对从江香猪PHKG2基因的RNAi表达载体,瞬时转染至C2C12细胞株和从江香猪肾细胞中,以正常生长的细胞为空白对照,24h后检测各个重组载体的绿色荧光蛋白的表达情况。48h后提取细胞总RNA,利用qRT-PCR方法检测目的基因PHKG2和糖原代谢相关基因糖原磷酸化酶(glycogen phosphorylase,muscle form,PYGM)、肌肉糖原合成酶(glycogen synthase 1(muscle),GYS1)、磷酸甘油酸变位酶(Phosphoglyce rate mutase,PGAM2)基因mRNA的表达情况,并且测定各组细胞中的糖原含量。结果表明,经过双酶切、测序检测以及脂质体瞬时转染至C2C12细胞中,验证超表达载体pEGFP-N3-PHKG2和4对RNAi表达载体均构建成功。转染至从江香猪肾细胞后,相对于空白对照(Blank)和阴性对照(pEGFP-N3),超表达载体pEGFP-N3-PHKG2能极显着提高PHKG2基因的表达量(P<0.01),同时显着上调PGAM2、PYGM基因的表达量(P<0.05),并且显着降低细胞中糖原的含量(P<0.05)。各RNAi载体中,相对于空白对照(Blank)和阴性对照(NC),shRNA-1的干扰效率较高,极显着下调PHKG2基因的表达量(P<0.01),显着下调PGAM2、PYGM、GYS1基因的表达量(P<0.05),并且显着升高细胞中糖原含量(P<0.05)。shRNA-2极显着下调PHKG2基因的表达量(P<0.01);shRNA-3对PHKG2基因的表达也能起到显着的干扰作用(P<0.05);shRNA-4对于所检测的4个基因干扰效果不明显;shRNA-2、shRNA-3、shRNA-4转染细胞后,细胞中糖原含量升高水平不明显。PHKG2基因超表达和RNAi后可分别明显上调和抑制PHKG2、PYGM、PGAM2、GYS1基因的表达,并且分别降低和提高糖原含量,可能是影响从江香猪猪肉品质的重要候选基因,为进一步研究PHKG2基因在细胞糖原代谢通路中的作用机制奠定基础。(本文来源于《畜牧兽医学报》期刊2018年09期）
黄凯,林亚秋,朱江江,马洁琼,王永[10]（2018）在《山羊FGF1基因腺病毒超表达载体的构建》一文中研究指出引言/目的成纤维细胞生长因子1(FGF1)是成纤维细胞生长因子家族(FGFs)中的一员,FGFs被证明在各种生理过程中发挥着重要作用,如胚胎发生、肿瘤形成、组织修复以及细胞的增殖、分化、迁移、凋亡等。关于FGF1的作用研究最初主要集中在肿瘤发生等方面,关于其在脂代谢、糖尿病等方面的作用直到近几年才引起重视。超表达和干扰是分子生物学中研究基因功能的重要手段,因此本研究拟采用超表达手段构建山羊FGF1超表达载体,为进一步(本文来源于《2018年全国养羊生产与学术研讨会论文集》期刊2018-08-16）
超表达载体论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
森林是人类赖以生存的生态系统,具有重要的生态效益。土壤重金属污染形势严峻,严重威胁着森林生态系统的稳定和健康。此前关于重金属污染的研究主要集中于农田,而对森林关注较少。杨树(Populus)是修复重金属污染土壤的候选植物,其地上部分可以在一个生长季内积累较大的生物量,对重金属的总积累量要远远超过草本超富集植物,具有很大的重金属污染土壤的修复潜力。适当的氮、磷营养,可以提高植物对重金属胁迫等逆境的抗性,然而此前的研究多聚焦于农作物的生理机制。本论文以84K杨(Populus alba×Populus glandulosa)为试验材料,研究氮、磷营养元素在基因表达水平上对植物重金属毒害的缓解作用。研究结果显示:氮、磷营养的添加不同程度地改变了84K杨抗氧化、镉吸收转运、氮代谢相关基因的表达。氮营养的添加提高了大多数基因的表达量,增强了植物对镉(Cd)胁迫的抗性,减轻了Cd对植物的毒害作用,但不同氮形态的作用也存在差异,铵态氮的作用优于硝态氮。磷的添加也不同程度地影响了杨树中相关基因的表达,可能主要是通过改变土壤pH和Cd的活性来影响植物对Cd的吸收,对植物Cd毒害也有一定的缓解作用。此前在杨树基因工程的研究中,主要改良的目标性状是抗虫、抗病、降低木质素含量、抗除草剂、抗盐碱等,而在抗重金属胁迫上研究较少。重金属ATP酶(HMAs)是重金属转运蛋白,通过消耗ATP转运过多的金属离子。HMA3基因定位在液泡膜上,可以将二价金属离子如Cd~(2+)、Zn~(2+)、Pb~(2+)等运输到液泡中隔离起来,参与重金属离子的转运和解毒。但目前关于HMA3基因的报道较少,故本研究以84K杨为对象,以基因组测序完成的毛果杨(Populus trichocarpa Torr.&Gray)基因序列为参考,设计特异性引物,克隆84K杨的HMA3蛋白编码序列,完成HMA3超表达载体的构建。影响杨树遗传转化因素的较多,培养基种类、激素、农杆菌浓度、侵染时间、外植体状态等都会影响杨树的转化效率。本论文对84K杨转化体系的叶片刻伤方式、叶片接种方式、分化培养基、生根培养基等进行了研究和筛选,结果表明叶片表面垂直主叶脉横切的刻伤方式优于叶块,叶片正面朝下接触培养基优于背面朝下的接种方式,最佳叶片分化培养基为MS+0.5 mg.L~(-1) 6-BA+0.05 mg.L~(-1) NAA,生根培养基为1/2MS+0.5 mg.L~(-1) IBA。本试验中,通过抗生素的筛选,有4株组培苗正常生根。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
超表达载体论文参考文献
[1].吴竞,何业华,谢桃,丁雅琦,栾爱萍.菠萝果眼发育相关基因AcCBL超表达载体构建及其转化的研究[C].中国园艺学会2019年学术年会暨成立90周年纪念大会论文摘要集.2019
[2].鲁玫.氮和磷对镉胁迫下杨树基因表达的影响及HMA3超表达载体的遗传转化[D].西北农林科技大学.2019
[3].路宏朝,李蕊清,孙志阳,王令,张涛.略阳乌鸡METTL21C基因克隆及超表达载体构建[J].西北农业学报.2019
[4].陈昕晟,葛博学,卜庆忠,吴慧,周春华.柿果实CCD1基因超表达和RNAi表达载体的构建[J].扬州大学学报(农业与生命科学版).2019
[5].李彩弟,任玉玲,杨成兰,苏联攀,祁小清.紫花苜蓿G6PDH基因的克隆与超表达载体构建[J].分子植物育种.2019
[6].黄玉吉,赖钟雄.香蕉几丁质酶基因ChiI2超表达载体和干涉表达载体的构建[J].应用与环境生物学报.2019
[7].池永东,陈智慧,邱翔,钟红梅,陈官璐.齐口裂腹鱼PGC-1α超表达及干扰慢病毒载体构建[J].水产科学.2018
[8].黄凯,林亚秋,朱江江,马洁琼,王永.山羊FGF1基因腺病毒超表达载体的构建[J].西南农业学报.2018
[9].王圆圆,许厚强,陈伟,周迪,张鸣.从江香猪PHKG2基因超表达载体和RNA干扰载体的构建及其表达[J].畜牧兽医学报.2018
[10].黄凯,林亚秋,朱江江,马洁琼,王永.山羊FGF1基因腺病毒超表达载体的构建[C].2018年全国养羊生产与学术研讨会论文集.2018