论文摘要
为探索调控家鹅繁殖性能的技术,本研究通过设计合成鹅促性腺激素抑制激素（gonadotropin-inhibitory hormone,GnIH）序列片段,酶切后连接到诺如病毒（Nov）P基因重组pEGX-4T-1载体,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,提取阳性菌重组质粒,并通过测序和酶切进行验证。将测序正确的质粒转化大肠杆菌BL21感受态细胞,利用IPTG诱导重组蛋白表达,SDS-PAGE及Western blotting检测重组蛋白表达。进一步在不同IPTG浓度及诱导时间条件下进行原核表达,确定最佳诱导条件,在最佳条件下的诱导菌液经过离心收集菌体,并超声波破碎离心后对重组蛋白可溶性进行分析。利用xTractor Buffer和Glutathione Superflow树脂对重组蛋白进行纯化,并使用自制的抗GnIH鹅血清及抗鹅二抗通过Western blotting检测重组蛋白。结果显示,重组质粒Nov P-partical-GnIH经双酶切鉴定获得大小约为96 bp的目的基因条带,进一步测序结果证明重组质粒构建成功。诱导表达的重组蛋白分子质量约为64 ku,与预期大小一致,且在37℃、1.0 mmol/L IPTG、诱导2 h条件下表达量最高;菌体超声破碎后经SDS-PAGE检测,重组蛋白主要表达在沉淀中。重组蛋白与GST单抗及抗GnIH阳性血清均能反应,表明此重组蛋白具有较好的反应原性和免疫原性。本研究通过对Nov P-partical-GnIH蛋白原核表达及纯化成功获得了大量纯度较高的重组蛋白,将有助于进一步建立家鹅的繁殖性能免疫调控方法,为提高繁殖性能及调控繁殖机制的研究奠定基础。
论文目录
文章来源
类型: 期刊论文
作者: 黄雪冰,杨培洁,邓汝森,杨博,刘文俊,黄运茂
关键词: 诺如病毒颗粒,促性腺激素抑制激素,蛋白免疫原性,疫苗
来源: 中国畜牧兽医 2019年09期
年度: 2019
分类: 农业科技,基础科学
专业: 生物学,畜牧与动物医学
单位: 仲恺农业工程学院,广东省水禽健康养殖重点实验室
基金: 国家重点研发计划(2016YFD0500510),广东省科技计划(2017A020208069),广东省自然科学基金(2018A030313630)
分类号: S852.65
DOI: 10.16431/j.cnki.1671-7236.2019.09.025
页码: 2699-2706
总页数: 8
文件大小: 3065K
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标签：诺如病毒颗粒论文; 促性腺激素抑制激素论文; 蛋白免疫原性论文; 疫苗论文;