禽流感病毒HA蛋白的原核表达与鉴定

论文摘要

为了实现禽流感病毒血凝素（HA）蛋白在原核系统中高效表达,根据Gen Bank发表的HA（ID=DQ023145. 1）基因序列,在不改变HA蛋白氨基酸序列的情况下,根据大肠杆菌密码子偏好性优化基因序列,化学合成HA全基因。将其克隆到pET28a（+）载体中,构建重组质粒pET28a（+）-HA,转化至BL21工程菌进行诱导表达,利用His-tag镍柱纯化HA重组蛋白,并对纯化后的重组蛋白进行SDS-PAGE分析及Western-blot鉴定。结果表明:当重组菌株p ET28a（+）-HA/BL21（DE3）诱导条件为30℃、IPTG浓度为1 mmol/L诱导8 h时,HA蛋白表达量最高; SDS-PAGE电泳显示经镍柱纯化后HA蛋白纯度较高,Western blot实验发现在预期的70 kD处有明显的蛋白印迹条带,说明已成功实现了在大肠杆菌中高效表达禽流感病毒HA蛋白,为后续开展禽流感检测方法及疫苗的研究奠定了基础。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 菌株和质粒
•   1.2 主要试剂
•   1.3 序列分析与合成
•   1.4 p ET28a （+） -HA重组载体的构建
•   1.5 重组蛋白的诱导表达及纯化
•   1.6 蛋白质印记 （Western blot） 分析
• 2 结果与分析
•   2.1 重组质粒p ET28a （+） -HA酶切鉴定
•   2.2 重组蛋白的诱导表达
•   2.3 重组蛋白PET28a （+） -HA纯化及West-ern blot分析
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 李令臣,侯力嘉,吴胜昔,李俊萱,鲁友铭,徐缘,李志,曾政,梁望旺

关键词: 禽流感病毒,血凝素蛋白,原核表达,镍柱纯化,蛋白免疫印迹

来源: 重庆理工大学学报(自然科学) 2019年05期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅱ辑,基础科学,医药卫生科技

专业: 生物学,基础医学

单位: 重庆理工大学药学与生物工程学院,重庆市动物疫病预防控制中心

基金: 重庆市社会民生科技创新专项(cstc2015shmszx80027,cstc2016shmszx0076,cstc2018jscx-msyb0379),重庆市巴南区科技计划项目(2017TJ06),重庆市技术创新与应用发展专项(cstc2019jscx-msxm0150)

分类号: R373

页码: 137-141

总页数: 5

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