山羊痘病毒南疆株P32基因的原核表达及其结构分析

论文摘要

为了研究新疆南疆分离的山羊痘病毒P32基因的特征,试验通过PCR扩增得到P32基因及其膜外区P321～282基因和膜外亲水区P3220～270基因,分别构建了表达载体(pET42b-P32、pET42b-P321～282和pET28a-P3220～270)并进行了原核表达,对其核苷酸序列的同源性、遗传进化关系及推测的氨基酸序列、蛋白质二级结构进行了预测分析。结果表明:山羊痘病毒南疆株P32基因发生了较大突变,相对对照在第100～105位增加了6个核苷酸,编码K、N两个氨基酸,全长达到975 bp,编码324个氨基酸,与Gansu 2009株相似。跨膜分析显示P32蛋白膜外区为1～282位氨基酸,跨膜区为283～305位氨基酸,膜内区为306～324位氨基酸。二级结构分析发现其分子两端呈明显的疏水结构,抗原性较弱,而中间区域有较强的亲水性和较强的抗原性。蛋白质表达发现其全长在大肠杆菌中几乎没有表达,其膜外区可以表达,但表达量较低,难以纯化。说明山羊痘病毒P32蛋白是一个典型的膜蛋白,全长较难表达纯化,南疆株P32蛋白也具有这样的特性。

论文目录

• 1 材料
•   1.1 毒株与菌株
•   1.2 主要试剂
• 2 方法
•   2.1 引物的设计与合成
•   2.2 山羊痘病毒基因组的提取
•   2.3 P32基因的PCR扩增与回收
•   2.4 P32原核表达载体的构建
•   2.5 P32基因的序列分析
•   2.6 推测的P32蛋白的结构分析
•   2.7 P32蛋白的表达
•   2.8 表达的P32蛋白的SDS-PAGE检测
•     1) 样品处理:
•     2) SDS-PAGE:
•   2.9 表达的P32蛋白的Western-blot检测
• 3 结果与分析
•   3.1 目的基因的扩增
•   3.2 重组质粒的酶切鉴定
•   3.3 山羊痘病毒南疆株P32基因的序列及遗传进化分析
•   3.4 推测的山羊痘病毒南疆株P32蛋白氨基酸序列分析
•     1) 跨膜结构分析:
•     2) 二级结构分析:
•   3.5 目的蛋白的SDS-PAGE检测
• 4 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 宋书婷,焦海宏,张孝忠,李有文

关键词: 山羊痘病毒,南疆株,蛋白,原核表达,结构分析

来源: 黑龙江畜牧兽医 2019年04期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 塔里木大学动物科学学院,新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室

基金: 国家自然科学基金项目(31360616,31760741),塔里木畜牧科技兵团重点实验室开放课题项目(HS201307),塔里木大学研究生基金项目(TDGRI201604)

分类号: S852.65

DOI: 10.13881/j.cnki.hljxmsy.2018.02.0183

页码: 83-88+180

总页数: 7

文件大小: 625K

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