腐败梭菌α毒素和产气荚膜梭菌ε毒素的共表达及其免疫效力评价

论文摘要

为获得腐败梭菌α毒素和D型产气荚膜梭菌ε毒素的共表达产物,并鉴定其致死活性和反应原性,评价其免疫保护效力,利用PCR扩增腐败梭菌α毒素和产气荚膜梭菌ε毒素基因Gcsa和Gcpe并克隆至pETDuet-1质粒,转化E.coli BL21（DE3）,自诱导培养基诱导这2段基因共表达;用SDS-PAGE和Western-blot以及小鼠毒性试验、抗毒素血清中和试验对表达产物进行鉴定;将诱导后的大肠杆菌灭活,制成铝佐剂疫苗1 m L/只皮下注射免疫家兔2次,测定免疫血清中和抗体效价,用1 MLD的腐败梭菌毒素和D型产气荚膜梭菌毒素分别攻击。结果显示,所构建的E.coli BL21（pETDuet-Gcsa-Gcpe）可以同时表达Gcsa和Gcpe,表达产物能够与腐败梭菌和D型产气荚膜抗毒素血清反应;且具有小鼠致死毒性,只有用2种抗毒素一同作用,才能将其毒性中和;制成灭活疫苗免疫家兔,免疫血清对腐败梭菌毒素的中和抗体效价为2 MLD/0.1 m L,对D型产气荚膜梭菌毒素的中和抗体效价≥50 MLD/0.1 m L;用2种毒素攻击,免疫组家兔全部保护,对照组全部死亡,达到《中华人民共和国兽药典》（2015版）效力检验标准。结果表明,所构建的表达载体可以实现α毒素和ε毒素的活性共表达,本研究为腐败梭菌和产气荚膜梭菌的多联基因工程灭活疫苗的研究提供了实验基础。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 实验材料
•   1.2 共表达载体的构建
•     1.2.1 引物设计
•     1.2.2 PCR扩增
•     1.2.3 p ETDuet-Gcsa-Gcpe的构建
•   1.3 自诱导共表达及产物的鉴定
•     1.3.1 SDS-PAGE分析
•     1.3.2 Western-blot鉴定
•     1.3.3 毒性和毒性中和试验
•   1.4 共表达产物的免疫效力评价
•     1.4.1 灭活疫苗的制备
•     1.4.2 无菌检验与安全检验
•     1.4.3 免疫效力评价
• 2 结果
•   2.1 共表达载体的鉴定
•   2.2 SDS-PAGE和Western-blot鉴定
•   2.3 毒性和毒性中和试验
•   2.4 疫苗的无菌检验和安全检验
•   2.5 免疫效力评价
• 3 分析与讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 彭国瑞,彭小兵,李旭妮,董令赢,蒋玉文

关键词: 腐败梭菌,产气荚膜梭菌,毒素,共表达,免疫,疫苗

来源: 中国兽药杂志 2019年02期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 中国兽医药品监察所

基金: 国家重点研发计划“牛羊重要细菌病新型疫苗及其工艺研究(2017YFD0500905)”

分类号: S852.61

页码: 26-32

总页数: 7

文件大小: 1104K

下载量: 73