动物A型流感病毒RPA-LFD可视化检测方法的建立

论文摘要

为建立动物A型流感病毒（IV）的重组酶聚合酶扩增-侧流层析试纸条（RPA-LFD）检测方法,本研究针对A型IV基质蛋白（M）基因保守序列设计了引物和探针,通过反应条件优化,建立了RPA-LFD检测方法。特异性试验结果显示,该方法检测动物A型IV呈阳性,与新城疫病毒、鸭坦布苏病毒、鸭肝炎病毒、小鹅瘟病毒等无交叉反应,特异性强;反应时间短、敏感性高,可以在35℃,20 min内检测到最低浓度为10拷贝/μL的重组质粒标准品。利用该方法对从化某活禽市场分离的鸭咽拭子样品共50份进行检测,结果 3份为阳性,其余均为阴性,与PCR及病毒分离结果一致,准确性高。本研究首次建立了检测动物A型IV的可视化RPA-LFD检测方法,该方法不依赖任何仪器设备,操作简单、快速,可为基层实验室临床快速检测和流行病学研究提供帮助。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 病毒
•   1.2 主要试剂
•   1.3 病毒RNA的提取和M基因重组质粒的构建
•   1.4 RPA引物和探针的设计与筛选
•   1.5 RPA-LFD检测方法的优化
•   1.6 特异性试验
•   1.7 敏感性试验
•   1.8 临床样品检测
• 2 结果
•   2.1 重组M基因质粒的构建
•   2.2 RPA-LFD方法的建立
•   2.3 RPA-LFD最佳反应条件的确定
•   2.4 特异性试验结果
•   2.5 敏感性试验结果
•   2.6 临床样品检测结果
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 刘文俊,阳佑天,易华东,邓汝森,杨培洁,付新亮,黄运茂,田允波

关键词: 重组酶聚合酶扩增,侧流层析试纸条,型流感病毒

来源: 中国预防兽医学报 2019年05期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 仲恺农业工程学院动物科技学院,广东省水禽健康养殖重点实验室,佛山科学技术学院医药工程学院

基金: 广东省家禽产业体系(2017LM1113),广东省科技计划(2017A020208069),广州市科技计划(201804010412),广东省自然科学基金(2018A030313630)

分类号: S852.65

页码: 474-478

总页数: 5

文件大小: 480K

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