塞内加谷病毒3C蛋白生物信息学分析及真核质粒构建表达

论文摘要

3C蛋白是塞内加谷病毒重要的非结构蛋白之一,在病毒入侵机制及影响宿主抗病毒天然免疫方面发挥重要作用。试验应用Oligo 7.0和Primer 6.0软件,用BLAST对比SVV世界参考株,设计一对特异性引物。以SVV-SN株病毒液抽提RNA为模板,将序列连接pMD19-T载体后测序,对正确片段作生物信息学分析可知SVV 3C可编码一个较稳定非分泌型蛋白,具有一个保守"催化三联体"。预测发现该蛋白具有16个磷酸化位点,证明其较高活性,预测其二级结构后得到再次证实。将pMD19-SVV-3C和真核表达载体pcDNA3.1（+）双酶切后连接,重组质粒经鉴定后命名为pcDNA3.1（+）-SVV-3C。将pcDNA3.1（+）-SVV-3C转染到BHK-21细胞24 h后制样作Western blotting,成功验证该重组质粒可在BHK-21中真核表达。相比其他同科病毒,当前SVV 3C蛋白研究存在空白。文章旨在为进一步研究SVV 3C蛋白结构提供理论依据,为后续探索SVV 3C蛋白对于宿主作用机制奠定基础。

论文目录

• 1 材料与方法
•   1.1 主要试剂
•   1.2 毒株、菌种及质粒
•   1.3 方法
•     1.3.1 引物设计
•     1.3.2 SVV 3C蛋白序列扩增
•     1.3.3 SVV 3C蛋白序列扩增及测序
•     1.3.4 SVV 3C蛋白生物信息学分析
•     1.3.5 SVV 3C蛋白真核质粒构建
•     1.3.6 SVV 3C蛋白真核质粒在BHK-21细胞中表达
• 2 结果与分析
•   2.1 SVV 3C蛋白序列扩增
•   2.2 SVV 3C蛋白生物信息学分析
•     2.2.1 SVV 3C基因结构分析
•     2.2.2 二级结构分析
•   2.3 SVV 3C蛋白真核质粒构建
•   2.4 SVV 3C蛋白真核质粒表达
• 3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 陈瑛琪,蔡瑶,李雨濛,徐逸飞,徐志文,朱玲

关键词: 塞内加谷病毒,蛋白,生物信息学分析,真核表达

来源: 东北农业大学学报 2019年08期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 四川农业大学动物医学院,四川农业大学动物疫病与人类健康四川省重点实验室

基金: 四川省“十三五”育种攻关项目(2016NYZ0052),国家“十二五”科技支撑计划项目(2015BAD12B04-2.3),国家农业产业技术体系四川兽药创新团队专项(CARS-SVDIP)

分类号: S852.65

DOI: 10.19720/j.cnki.issn.1005-9369.2019.8.0005

页码: 32-39

总页数: 8

文件大小: 1795K

下载量: 114